우리나라 각지에서 젓갈류를 수집하여 혈전용해능을 나타내는 균주들을 분리하였다. 분리된 균주들의 활성을 측정한 결과 2.04 plasmin unit의 가장 우수한 혈전용해활성을 나타내는 균주를 선별하여 동정하였다. 균주의 형태학적, 배양학적 및 생화학적 성질을 조사한 결과 Bacillus pumilus로 나타났으나, 균체의 지방산조성을 분석하여 동정한 결과 Bacillus atropheus로 나타났다. 최종적 결론을 얻기 위해, 16S rRNA partial sequence(V3 region)를 결정하여 분석한 결과 Bacillus subtilis의 16S rRNA partial sequence와 동일한 것으로 나타나, Bacillus subtilis KJ-48로 명명하였다.
Le, Xuan The;Pham, Dung Tien;Pham, Tuan Anh;Tran, Tung Thanh;Khuat, Thanh Huu;Le, Hoa Quang;Vu, Ut Ngoc
Fisheries and Aquatic Sciences
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제22권8호
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pp.17.1-17.9
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2019
Bacillus is a diverse genus consisting of more than 200 species with extensive genetic diversity. Their beneficial effects in industrial shrimp farming have been well documented. However, little is known about the biodiversity of the Bacillus spp. in this aquaculture system. Taxonomic analysis by 16S rRNA sequencing does not always allow species-level identification of Bacillus spp. In this study, 26 Bacillus isolates from two industrial Litopenaeus vannamei shrimp ponds in Bac Lieu Province, Vietnam, were analyzed for their genetic diversity by multi-locus sequence typing (MLST). A total of 22 sequence types were identified and segregated into four distinct clusters, corresponding to B. subtilis, B. velezensis, B. siamensis, and B. licheniformis. Bacillus subtilis and B. velezensis accounted for more than 73% of the Bacillus isolates. Notably, the MLST scheme exhibited high discriminatory power and might be further simplified to be a convenient method to identify species of the genus Bacillus.
청국장 내에 B. cereus을 효과적으로 저지하기 위한 생물학적제어 방법의 개발을 위하여 전통적 방법으로 제조한 백태 및 흑태 청국장으로부터 총 20종의 Bacillus 속 균주를 분리하였고, 이중에서 24시간 배양액에서 B. cereus에 대한 길항활성이 가장 높은 Bacillus sp. SC-8 균주를 선별하였다. 이 균주를 B. cereus와 혼합하여 청국장을 제조한 후 길항능을 분석한 결과 청국장 발효 중에는 B. cereus에 대한 길항효과가 있었으나, 발효 후 $4^{\circ}C$ 저장 중에는 균체수가 감소하여 억제효과가 감소하는 것으로 분석되었다. 또한 대조군으로 사용하였던 Bacillus sp. SC-15 균주에서는 배양액에서는 B. cereus에 대한 길항 활성이 낮았으나 청국장 내에서는 길항효과를 보임에 따라 청국장 발효에 관여하는 균들은 배양 환경에 따라 길항물질의 생성에 차이가 있음을 보였다.
토양 미생물로부터 스크리닝한 미생물 중 카탈라제 생산량이 높은 세 가지 미생물 (Bacillaceae bacterium BKBChE-1, Bacillus sp. BKBChE-2와 Bacillus flexus BKBChE-3)을 배양하여 얻은 카탈라제 효소가 과산화수소를 분해하는 것을 확인하고, 미생물 균체를 천연제올라이트에 정전기적 흡착법으로 고정하였다. 주사전자 현미경을 통해 각각의 미생물이 지지체에 잘 흡착된 것이 관찰되었고, 10.5 mM의 과산화수소를 1시간 이내에 완전히 분해되는 것을 확인하였다. 과산화수소 분해 속도가 가장 빠른 Bacillus flexus BKBChE-3은 온도와 pH 영향성 실험을 통해 고온과 pH 10 이상의 강알칼리 조건에서도 30일 이후까지 미생물이 생존하는 것을 관찰하였다. 또한 고정화된 미생물의 경우 온도 $25-40^{\circ}C$, pH 7-10의 조건에서 생균수가 계속하여 증가하는 것을 확인하였다. 본 실험을 통해 Bacillus flexus BKBChE-3이 생산한 카탈라제 효소 뿐만 아니라 고정화된 균체도 과산화수소의 제거에 효과적임을 확인할 수 있었다. 이들 결과로부터 미생물 발효를 통해 생산된 효소의 생산량 증가와 미생물 개체 수 증가를 이용하여 산업폐수에 적용하면, 과산화수소의 제거 효율을 높이고 균체 재활용을 통한 공정비용을 절감할 수 있을 것으로 사료된다.
본 연구는 근권 토양 및 뿌리에 존재하는 미생물 중 미생물 제제로 적합한 Bacillus sp.을 선별하기 위하여 10종의 식물 병원성 곰팡이에 대한 항진균 활성, 식물 생장 촉진 활성 및 미네랄 가용화능을 평가하였다. 식물 병원성 곰팡이에 대한 항진균 활성은 Bacillus sp.에 따른 차이를 보였으며, 선별된 균주 중 DDP4, DDP16, DDP148, SN56, SN95는 9종 이상의 식물 병원성 곰팡이에 대해 항진균 활성을 나타내었다. 질소고정능과 1-aminocyclopropane-1-carboxylic acid deaminase 생성능에서는 Bacillus sp. 모두 비슷한 수준으로 활성을 나타냈으며, siderophore 생성능은 ANG42와 DDP427에서 비교적 높게 나타났다. Indole-3-acetic acid 생성능은 1.83-67.91 ㎍/ml으로 확인되었으며, Bacillus sp.에 따른 활성 차이를 나타내었다. 이후 각 species마다 활성이 높은 1 균주씩 선정하여 미네랄 가용화능을 확인한 결과, 대부분의 Bacillus sp.에서 인산과 탄산칼슘 가용화능을 확인할 수 있었으며, DDP148과 SN56은 각각 규소 가용화능과 아연 가용화능도 나타내었다. 따라서, 본 연구에서 분리한 Bacillus sp.의 항진균 활성, 식물 생장 촉진 활성 및 미네랄 가용화능 결과를 통해 다목적 기능을 가진 미생물 제제로써 활용이 가능할 것으로 판단된다.
버섯 생산 후 발생되는 부산물인 새송이버섯 수확 후 배지로부터 surfactin을 생성하는 4종의 균주를 분리하였으며 이 중 곰팡이 독소를 생성하는 A. flavus와 A. ochraceous에 대한 항균활성이 우수한 균주를 최종 선발하여 YJ07로 명명하였다. Bacillus ID kit와 VITEK 2 system를 이용하여 분리균 YJ07의 생리적 생화학적 특성을 조사한 결과 분리균은 B. subtilis, B. amyloliquefaciens와 유사한 생리적 생화학적 특성을 나타내었으며 16S rDNA 염기서열 분석을 통한 계통학적 유연관계에서도 B. amyloliquefaciens와 99.5%의 상동성을 나타내었다. 이와 같은 결과를 종합하여 분리균 YJ07은 B. amyloliquefaciens YJ07로 동정되었으며 분리균 YJ07이 생성하는 항균물질은 TLC와 HPLC 분석에서 reference 물질로 사용한 srfactin과 유사한 특성을 나타내었다.
This study was conducted to evaluate the effects of supplementation with bacillus-based probiotic (Bacillus subtilis, $1.0{\times}10^7CFU/g$; Bacillus coagulans, $2.0{\times}10^6CFU/g$ and Lactobacillus acidophilus, $5.0{\times}10^6CFU/g$) on finishing pigs growth performance, nutrients digestibility, blood characteristics and fecal noxious gas content and to determine the optimal addition level of this probiotic preparation. A total of forty eight pigs with an initial body weight (BW) of $90.60{\pm}2.94kg$ were allotted to three dietary treatments (four pigs per pen with four pens per treatment) according to a randomized complete block design. Dietary treatment included: 1) CON (basal diet); 2) BP1 (basal diet+bacillus-based probiotic 0.1%) and 3) BP2 (basal diet+bacillus-based probiotic 0.2%). The experiment lasted 6 weeks. Through the entire experimental period, ADG was improved by 11% (p<0.05) in pigs fed diets supplemented with 0.2% bacillus-based probiotic compared to pigs fed the basal diet. ADFI and gain/feed were not affected by the treatments (p>0.05). Supplementation of bacillus-based probiotic did not affect either DM and N digestibilities or blood characteristics (p>0.05) of pigs. Fecal ammonia nitrogen ($NH_3$-N) measured at the end of experiment was reduced (p<0.05) when pigs were fed the diet with 0.2% bacillus-based probiotic. Fecal butyric acid concentration also decreased significantly (p<0.05) whereas acetic acid and propionic acid concentrations were not affected (p>0.05) when pigs were fed diets with added bacillus-based probiotic. In conclusion, dietary supplementation of bacillus-based probiotic can increase growth performance and decrease fecal noxious gas content concentration.
토양으로 부터 분리한 Bacillus sp. WRD-l의 토마토 생육에 미치는 영향을 조사하기 위하여 미생물 배양액을 100배, 300배, 500배의 희석 비율에 따라 토마토재배지에 관주를 실시하여 토마토 생육 및 토양미생물상 변화를 관찰 하였다. 대조구로는 실제 미생물의 영향을 확인하기 위하여 Bacillus sp. WRD-1 배양액을 멸균하여 사용하였다. 토마토 생육은 전체적으로 100배> 300배> 500배> 대조구 순으로 희석 비율과 비례하였다. 시간별 토양미생물 수는 세균과 방선균의 수는 증가하는 경향을 보였으며, 곰팡이수는 감소하는 경향을 보였다. 이러한 결과로 토양활성개량미생물제로의 개발 가능성을 확인하였다.
혈전용해 활성과 면역세포 활성능이 우수한 청국장을 제조하기 위하여 청국장에서 분리된 220개의 세균으로부터 단백질 분해능과 점질물질 생성능이 우수한 13개의 Bacillus 균주를 선별하였다. 이들 13개 Bacillus 균주들의 fibrin plate 방법을 이용한 혈전용해 활성과 RAW 264.7 cell line을 이용한 cytokine 생성능력 (NO 생성능, Interlukin-1${\alpha},\;TNF-{\alpha}$) 검정에 의한 면역세포 활성능 측정실험을 수행하였는데, Bacillus 균주들을 TSB(Trypticase soy broth)에 키운 시료와 콩에 접종하여 제조한 청국장시료와 같은 두 가지 상이한 시료를 이용하여 혈전용해능과 면역세포 활성능을 측정한 결과, 혈전용해능과 면역세포 활성능이 가장 우수한 세 균주가 최종 선발되었다. 선발된 세균주의 동정결과 두 균주(CHKJ 1249, CHKJ 1326)는 Bacillus licheniformis로 그리고 CHKJ 1339 균주는 Bacillus subtilis로 동정되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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