Bacillus sp. 유래의 Bacillus polyfermenticus SCD를 Bisroo $t^{ⓡ}$라고 부르고, 이것은 생균제로서 산업적으로 매우 유용하다. 본 연구에서는 B. polyfermenticus SCD를 산업적으로 활용성을 증대시키기 위해 three layer coating법을 사용하여 인공위액의 pH 변화에 대한 안정성과 열안정성, glucose 농도에 따른 안정성을 연구하였다. 그 결과 코팅한 B. polyfermenticus SCD가 인공위액에 대한 내성에서는 배양 4시간을 기준으로 pH 2는 30%, pH 4는 20%, pH 6은 14% 상승효과가 있었음을 알 수 있었고, 온도변화에 대한 안정성에서는 코팅한 B. polyfermenticus SCD가 8$0^{\circ}C$에서 2시간 기준으로 안정성이 약 40% 증진됨을 확인할 수 있었다. 고농도 (30%)의 glucose에서 코팅한 B. polyfermenticus SCD는 안정하였으며, 코팅하지 않은 것보다 약 50% 안정성이 증대됨을 확인할 수 있었다. 그리고 pH 4.0에서는 코팅한 B. polyfermenticus SCD는 코팅을 하지 않은 B polyfermenticus SCD보다 전체적으로 생존율이 40% 이상, pH 6.0에서는 생존율이 42% 이상 증진됨을 알 수 있었다.
Bacillus sp. SH-8은 pH 9.0 이상에서 생육이 가능하였고 pH 7.7 이하에서는 배양 12시간부터 O.$D_{550}$가 급격히 감소하였으며 생균수도 감소하였다. 그러나 Bacillus sp. SH-8M은 pH7.7에서 생육이 가능하였고 pH6.9에서도 약간 생육속도가 늦었으나 정상적인 생육을 나타내었다. 고체배지의 생육 양상도 액체배지에서와 비슷한 결과를 나타내었다. 균주의 형태는 pH 10.2에서 두 균주 모두 단간균위 형태를 나타내었으나 pH7.7에서는 Bacillus sp. SH-8 균주만이 장간균의 형태를 나타내었다. 균체외 pH는 초기 10.2일 때 두 균주 모두 배양 28시간 후에는 9.0이었고 초기 pH 9.0와 9.6에서는 배양초기에 pH가 저하되었다가 12시간 후부터 상승하였다. 한편, Bacillus sp. SH-8M은 초기 pH 6.9와 7.7일때 배양시간에 따라 균체외의 pH가 8.0과 8.7로 상승하였으나 Bacillus sp. SH-8은 배양 12시간 이후에도 7.0으로 일정하였다. 포자형성능은 Bacillus sp. SH-8과 Bacillus sp. SH-8M 모두 배양 3일 후, 초기 pH 10.2일 때 각각 95%와 85%로 가장 높았다.
세계 각국의 민족은 자신의 국토의 삶과 기후 풍토, 지역 특산 산물과 식습관 및 식생활 등에 따라 색다른 전통식품이 만들어 진다. 한국은 오랫동안 농경을 중심으로 먹거리를 해오며 쌀과 함께 곁들일 채소류를 중심으로 조미료가 발달되었고, 염절임 기법을 통해 발효식품을 만들었다. 이러한 발효식품에서 주로 찾아볼 수 있는 종은 Lactobacillus sp.과 Pediococcus sp. 및 Bacillus sp. 등과 같은 유산균을 분리할 수 있었고 다양한 방법으로 동정 되어왔다. 본 연구에서는 시장에서 시판되고 있는 한국전통발효식품을 통해 유산균을 분리 및 동정하였고, 유해세균에 대한 항균능력이 우수한 균주를 선별하였다. 그리고 우수 후보 균주의 인공위액 및 담즙액에 대한 내성과 용혈능 등을 검토하여 최종 균주를 선별하였다. 최종 선별된 유산균은 3종의 prebiotics와 혼합한 synbiotics로서의 항균활성 능력을 평가하였다. 1차 항균 활성에서 C13은 인체 및 어류질병세균에서 가장 넓은 항균 스펙트럼을 보였고, β-haemolysis를 생산하지 않고 인공위액과 담즙액의 내성을 지닌 M1, K1 및 C13을 synbiotics의 2차 항균 활성을 수행하였다. Prebiotics 3종(FOS, GOS, Inulin)과 선별된 균주가 혼합된 synbiotics에서는 이전 보다 항균 활성이 증진 또는 저해됨을 알 수 있었다. 16 rDNA 염기서열 결과, K1과 M1은 Bacillus tequiensis 99.72%, Bacillus subtilis 99.65%, Bacillus inaquosorum 99.72%, Bacillus cabrialesii 99.72%, Bacillus stercoris 99.58%, Bacillus spizizenii 99.58%, Bacillus halotolerans 99.58%, Bacillus mojavensis 99.51%로 분석되었다. 그리고 C13은 Bacillus velezensis 99.71%, Bacillus nematocida 99.36%, Bacillus amyloliquefaciens 99.44%, Bacillus atrophaeus 99.22%, Bacillus nakamurai 99.44%로 분석되었다.
B3(Bio Best Bacillus)와 RABC(Rotating Activated Bacillus Contactor) 공법은 Bacillus를 이용하여 유기물뿐만 아니라 질소와 인도 효율적으로 제거하는 공법이다. 그러나 현 단계에서 폐수처리 시설에 이용되고 있는 Bacillus의 유기물 제거에 대한 미생물학적인 특성을 과학적으로 입증하지 못하였다. 이에 본 연구에서는 활성슬러지에서 보고되는 균주 Burkholderia cepacia(KCTC 2966)를 대조균으로 하고 Bacillus megaterium(KCTC 3007), Paenibacillus polymyxa(KCTC 3627) 균주와 B3 공법의 분뇨처리장으로부터 분리한 Bacillus속 4개 균주 Bacillus sp.(A12, C21, F12, L1)를 선정하여 0.2% Nutrient Broth, $30^{\circ}C$에서 배양하면서 Burkholderia의 Bacillus의 유기물 제거능력을 비교하였다. 접종량에 따른 개체군 차이로 유기물 제거능력이 영향 받을 수 있지만, Bacillus의 유기물 제거능력이 Burkholderia보다 $2\sim5$배 뛰어남을 알 수 있었다. 또한, Bacillus megaterium과 Bacillus sp.(C21, F12, N12)의 영양세포와 내생포자의 유기물 제거능력의 차이를 알아본 결과 내생포자의 제거능력이 영양세포보다 더욱 뛰어남을 알 수 있었다.
고추장의 품질 개선을 위하여 Aspergillus oryzae koji의 일부를 Bacillus sp. koji로 대체$(0{\sim}100%)$하여 고추장을 담그고 숙성중의 효소활성도와 미생물상 및 이화학적 특성을 비교하였다. 고추장 숙성중의 amylase의 활성은 Asp. oryzae koji구에서 높았으나 protease 활성은 Bacillus sp. koji 첨가비율이 증가할수록 높았다. 고추장 숙성중의 효모수와 세균수는 Bacillus sp. koji의 첨가비율이 높을수록 많았다. 고추장의 색도는 Bacillus sp. koji 고추장이 값이 높아 진한 붉은 색을 띄었으며 숙성중에 ${\Delta}E$값의 변화도 적었고 점조성과 Aw는 높았다. Bacillus sp. koji 첨가비율이 증가할수록 고추장 숙성중의 pH가 높아 적정산도는 낮았다. 고추장의 환원당은 Asp. oryzae koji구에서 높았으나 알콜 함량은 차이는 적었다. 고추장 숙성중의 아미노태 질소 함량은 Bacillus sp. koji 비율이 증가할수록 높았으나 암모니아태 질소는 적었다. 12주 숙성시킨 고추장의 맛, 색, 향기는 모두 Bacillus sp. koji를75% 첨가한 고추장에서 양호하여 전체적인 기호도에서 유의적(p<0.05)으로 좋았다.
삼림 토양 시료를 이용하여 cellulase 생산균주를 단리한 결과, Carboxymethylcellulose (CM-cellulose)를 기질로 첨가한 고체배지상에서 명확한 활성환을 형성하는 총 6종류의 cellulase 생산균주를 단리하여, 단리한 균주 유래의 16S rDNA유전자 염기서열 분석을 통하여 균주 동정을 진행하였다. 그 결과 본 연구에서 단리된 균주는 Bacillus subtilis 4종류, Bacillus amyloliquefaciens 1종류, Bacillus cereus 1종류로 동정되었다. 이 중에서 CM-cellulose에 대한 가장 높은 cellulase 활성을 보이는 Bacillus subtilis를 선정하여 Bacillus subtilis NSC로 명명하였다. Bacillus subtilis NSC 유래 cellulase는 균주 배양 36~48시간에서 가장 높은 cellulase 생산성을 보였으며, 최적 pH 및 온도를 검토한 결과, 본 균주 유래 cellulase는 pH 5.0과 $40^{\circ}C$에서 가장 높은 효소 활성을 나타내었다. 그리고, pH 4.0~5.0 조건에서 30분간 효소처리를 하여도 효소활성의 감소가 없었으며, $40^{\circ}C$까지는 30분간의 열처리에도 효소활성의 저하 없이 안정한 특성을 보였다. CM-cellulose, Alkali swollen cellulose, Sigmacell-cellulose, Alpha-cellulose, 그리고 Avicel을 기질로 기질 특이성을 한 결과 CM-cellulose에 대하여 가장 높은 효소 활성을 나타내었으며, cellulose 결정구조를 보유하고 있지않는 CM-cellulose와 Alkali swollen cellulose에 대해서는 명확한 효소활성을 보였다. 하지만, cellulose 결정구조를 보유하고 있는 Sigmacell Cellulose, Alpha-cellulose, 그리고 Avicel 기질에 대해서는 CM-cellulose 활성의 각각 8%, 8%, 그리고 4%의 매우 낮은 효소활성을 나타내었다. Bacillus subtilis NSC 유래 cellulase의 0.26 U/ml 조효소액과 0.52 U/ml 조효소액을 이용하여 CM-cellulose의 분해 특성을 검토하였을 때 두 조효소액 모두 반응 CM-cellulose에 대해 반응 120분 후에 0.43 U/ml와 0.76 U/ml의 효소 활성을 나타내었다.
Cellulase와 xylanase 분비능이 우수한 고온성 부숙촉진 세균을 분리하기 위하여 진주 인근지역의 새송이버섯 재배농장으로부터 새송이버섯 수확 후 배지를 수집하였다. 새송이버섯 수확 후 배지로부터 23종의 균주를 분리하였으며 이 중 cellulase와 xylanase을 동시에 분비하는 균주를 최종 선발하여 SJ21으로 명명하였다. Bacillus ID kit와 VITEK 2 system를 이용하여 분리균 SJ21의 생리적 생화학적 특성을 조사한 결과 분리균 SJ21은 B. lincheniformis와 유사한 특징을 나타내었으며 16S rDNA 염기서열 분석결과에서는 B. subtilis와 99%의 상동성을 나타내었다. 이와 같은 결과를 종합하여 분리균 SJ21은 Bacillus sp. SJ21 로 동정되었다. 분리균이 분비하는 cellulase와 xylanase 활성은 분리균이 증식함에 따라 대수증식기 중반부터 급격히 증가하였고 정지기에 진입하면 효소활성이 더 이상증가하지 않는 것으로 나타났으며 xylanase 활성은 대수증식기 초기부터 지속적으로 증가하여 대수증식기 중반에 최대활성을 나타내었다.
국내 5개 지역에서 수집한 12개 메주로부터 Bacillus, Enterococcus, Staphylococcus 속 bacteria를 선택배지를 이용하여 분리하고, 16S ribosomal RNA 유전자 및 gmk(guanylate kinase) 유전자 염기서열분석을 통해 동정하여, 이들 속의 우점종을 검토하였다. Bacillus 속과 Enterococcus 속은 모든 시료로부터 검출되었고, Bacillus 속은 11개 시료에서 총균수 대비 15% 이상 검출되어 메주 발효에서 가장 우점하는 bacteria로 확인되었다. Staphylococcus 속은 6개 시료에서만 검출되었다. Bacillus 속으로 동정된 151개 분리주는 B. velezensis, B. sonorensis 순으로 우점하였고, B. subtilis, B. licheniformis가 그 뒤를 이었다. Enterococcus 속으로 동정된 165개 분리주 중, 163균주가 E. faecium으로 확인되었다. Staphylococcus 속으로 동정된 82개 분리주에는 6종의 coagulase-negative Staphylococcus 존재가 확인되었고, S. xylosus가 우점종으로 확인되었다.
Bacillus velezensis strain WRN014 was isolated from banana fields in Hainan, China. Bacillus velezensis is an important member of the plant growth-promoting rhizobacteria (PGPR) which can enhance plant growth and control soil-borne disease. The complete genome of Bacillus velezensis WRN014 was sequenced by combining Illumina Hiseq 2500 system and Pacific Biosciences SMRT high-throughput sequencing technologies. Then, the genome of Bacillus velezensis WRN014, together with 45 other completed genome sequences of the Bacillus velezensis strains, were comparatively studied. The genome of Bacillus velezensis WRN014 was 4,063,541bp in length and contained 4,062 coding sequences, 9 genomic islands and 13 gene clusters. The results of comparative genomic analysis provide evidence that (i) The 46 Bacillus velezensis strains formed 2 obviously closely related clades in phylogenetic trees. (ii) The pangenome in this study is open and is increasing with the addition of new sequenced genomes. (iii) Analysis of single nucleotide polymorphisms (SNPs) revealed local diversification of the 46 Bacillus velezensis genomes. Surprisingly, SNPs were not evenly distributed throughout the whole genome. (iv) Analysis of gene clusters revealed that rich gene clusters spread over Bacillus velezensis strains and some gene clusters are conserved in different strains. This study reveals that the strain WRN014 and other Bacillus velezensis strains have potential to be used as PGPR and biopesticide.
Mori Koji;Iriye Ryozo;Hirata Mutsunori;Takamizawa Kazuhiro
Biotechnology and Bioprocess Engineering:BBE
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제9권6호
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pp.482-489
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2004
Bacillus species were observed and quantified by molecular approaches, using the 16S rDNA primers/probes, in a wastewater treatment plant designed for the purpose of stimulating the growth of Bacillus species. The plant has been operating as a test plant since 1997 in the city of Ina, Japan, with excellent treatment performance. Observations by in situ hybridization, using Bacillus-specific probes, indicated that Bacillus strains were inhabited in the plant and their numbers decreased during the treatment process. Similar results were obtained from a quantitative PCR analysis using a Bacillus-specific primer set, and the amount of DNA originating from various Bacillus species was maximally $1.91%\$ of the total DNA in the wastewater treatment tank. Clone library analysis using the Bacillus-specific primers suggested that, while the population was noticeably increased, the phylogenetic diversity of the increasing Bacillus species was very low.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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