표고버섯 톱밥재배시 배양에 의한 중량감소율과 생장기간에 따른 에르고스테롤 정량으로 균사 생장량을 조사하였고, 배양기간과 자실체 발생기간에 따른 균체 외와 균체 내의 효소 특성을 조사하였다. 배양기간에 따른 중량 감소는 산림5호가 농기3호와 산림6호에 비해 낮은 중량감소율을 나타냈다. 에르고스테롤 정량에 의한 균사 생장량 조사 결과, 암배양기간 동안 3균주 모두 균사 생장량이 증가하였으며, 농기3호가 상대적으로 높은 증가율을 보인 반면, 산림5호는 낮은 증가율을 보였다. 농기3호와 산림6호는 명배양기간 동안에 균사 생장량이 최고치에 이르렀으며, 산림5호는 자실체 발생기간 전까지 계속 증가하였다. 배양기간과 발생기간에 따른 글체 외와 군체 내 효소 역가를 측정한 결과, 배양 초기(10일)에는 셀룰로오스와 헤미셀룰로오스 분해에 관여하는 CMCase, avicelase, xylanase, glucanase의 역가가 높았고, 배양 10일 후 리그닌 분해에 관여하는 laccase와 Mn-peroxidase의 역가가 높아지는 경향을 나타내었다.
본 연구는 자기가수분해전 처리를 통하여 제조한 반응성이 높은 셀룰로오스(high reactive cellulose, HRC)기질의 카르복시메틸화(carboxymethylation, CM화) 특성을 알기 위하여 수행되었으며, 비교를 위하여 시판 알파셀룰로오스(commercial α-cellulose, CAC) 및 침엽수 리파이나기계펄프(Refiner mechanical pulp, RMP) 2종의 시료를 사용하였다. HRC는 12시간 당화처리로 70%, 24시간 처리로 90%, 72시간 처리로 99.5%의 높은 당화율을 나타냈다. 아울러 Cellulase 효소활성에 있어서 처리 전후에 측정된 CMCase 및 Avicelase의 효소활성의 큰 변화가 없었다. 이에 대하여 72시간 처리로 CAC는 57%의 당화율을, 리그닌을 많이 포함하는 RMP는 38%의 매우 낮은 당화율을 보였다. CM화시 리그닌함량이 낮은 HRC 및 CAC시료의 CM화가 용이하였고, 1.13-1.15의 높은 치환도를, 리그닌함량이 많은 RMP는 0.85 정도의 낮은 치환도를 나타냈다. 모든 시료에서 알칼리의 농도는 30%, 3시간 처리가 가장 높은 치환도를 보여주었다. CM화물로부터의 수용성부분은 HRC 및 CAC에서 98-98.5%, RMP 로부터는 31.5%로 매우 낮았다. 비표면적이 낮은 RMP는 보수도가 매우 낮았으며, 비표면적이 높았던 CAC 및 HRC는 435% 및 321%의 매우 높은 보수도 값을 나타냈다. 팽윤도에 있어서는 비표면적과는 무관하게 HRC, RMP 그리고 CAC 순으로 팽윤율이 커졌다.
본 연구에서는 Protaetia brevitarsis seulensis larvae 장내에서 서식하는 Bacillus 균주를 활용하여 프로바이오틱스 균주로 선발하기 위해 수행되었다. Bacillus 균주의 선발을 위해 Protaetia brevitarsis seulensis larvae로부터 유래된 균주를 80℃에서 10분간 가열한 후, 적절하게 희석하여 도달하여 성장하는 균주에 대해 일차적으로 carboxymethyl cellulase (CMCase) 활성에 의해 스크리닝한 후, 2차적으로 protease 활성에 의해 선발하였다. 선발된 균주 중에서 F23-72 균주가 CMCase 및 protease 활성이 매우 우수한 것으로 나타났다. 따라서 본 균주를 16S rDNA에 의해 동정을 실시하여 Bacillus velezensis F23-72로 명명하였다. F23-72는 CMCase, avicelase, cellobiase, xylanase, mannanase 등에 대해 B. velezensis KACC10334, K10과 유사한 활성을 보유한 것으로 나타났기 때문에 세포외 효소의 기능성이 우수한 것으로 판단된다. 자가 응집력은 L. plantarum K9에 비교하여 높은 반면에, B. velezensis에 비교하여 낮은 것으로 나타지만, 병원성 균주와 공응집력 및 mucin 부착력은 L. plantarum K9에 비교하여 낮은 것으로 나타났다. 따라서 이와 같은 특성은 Bacillus 균주들은 대체적으로 장점막에 부착성 및 병원성 세균을 부착하여 제거하는 기능은 낮은 것으로 추정된다. B. velezensis F23-72는 Staphylococcus aureus와 Salmonella Typhimurium에 대한 항균력이 KACC10334와 K10에 비교하여 약간 우수한 것으로 나타났으며, 각각 18과 24시간에서 가장 우수한 것으로 나타났다. 이상의 결과를 종합하면, B. velezensis F23-72는 세포외 효소 활성과 항균력이 우수한 반면에 점막 부착이나 병원성 균주의 제거 능력은 낮은 것으로 나타났기 때문에, 소화기능을 돕는 프로바이오틱스로써 활용 가능성이 제의된다.
본 연구는 꿀벌 유충으로부터 분리된 Frutobacillus spp. F 균주들의 기능성과 프로바이오틱스로써 사용 가능성을 평가하기 위해 수행되었다. 항균활성은 그람음성, 그람양성, 효모 균주들에 대해 사용된 F들이 전반적으로 활성을 보였지만, F2와 -3가 보다 우수한 것으로 평가되었고, 특히 F2가 우수하였다. Kerosene 유화력은 F4를 제외한 다른 균주들은 유사하게 관찰되었다. 탄소원에 따른 유화력 분석결과로써 F2는 과당이 존재할 경우에 높게 나타났지만, 표준균주보다 낮은 것으로 관찰되었고, 16S rDNA 서열 분석 결과 F2는 Freuctobacillus fructosus로 확인되었다. 또한 F2는 성장곡선에서 18시간에서 최대 성장력으로 보였고, 이후 소량 증가되는 양상을 보였다. 항균력 및 pH는 역시 18시간에 각각 최대 및 최소 값을 보였으며, 이후에 지속적으로 유지되는 경향성을 보였다. 유산 함량은 배양 후 24시간에서 최대 값을 보인 이후에 약간 감소되는 양상을 보였다. 내산성은 pH 2.5까지는 저항성을 보였지만, pH 2.0에서는 완전히 소실되는 것으로 나타났다. 담즙산에 대한 내성은 전반적으로 강력한 것으로 평가되었다. F2의 뮤이신에 대한 부착력은 S. Typhimurium에 비교하여 높게 나타났고, 배양 18시간까지 상승된 후에, 감소되는 경향성을 보였다. 혐기적 배양시간에 따른 효소 활성은 과당의 존재에 상관없이 CMCase, avicelase, mannase 등이 높은 것으로 나타났다. 자가 및 공응집력은 표준균주에 비교하여 모두 높게 형성되었으며, 표면 소수성은 전자공여체의 양상을 나타내는 클로로포름에 대해 높게 형성되었다. 따라서 Frutobacillus fructosus F2는 항균활성이 우수하였고, 유화력, 내산성, 내담즙성, CMCase, mannase, 자가 및 공응집력 등이 비교적 우수하기 때문에 프로바이오틱스로써 활용 가능성이 있는 것으로 평가된다.
자연계로부터 분리된 FJ1의 환경변수 및 기질 특이성을 본 연구에서 살펴보았는데, 분리 균주 FJ1의 특성은 최적pH, 최적온도는 각각 $6{\sim}7$, $25{\sim}30^{\circ}C$이었다. 또한, 분리균주는 FJ는 Avicel, 섬유소페기물과 같은 결정성 섬유소물질의 분해에 유리함을 알 수 있었다. 본 연구에서는 cellulose의 분해에 관련된 효소를 분비하는 분리균주 FJ1의 환경변수 및 기질 특이성을 조사하였고, 이를 기본으로 하여 배양인자의 조절을 통한 최적의 효소생산 및 생산되어진 효소에 의한 섬유소 페기물(볏짚, 폐지, 음식물 쓰레기 등)의 당화 특성을 검토하고 있다.
Kim, Kyoung-Cheol;Yoo, Seung-Soo;Oh, Young-A;Kim, Seong-Jun
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제13권1호
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pp.1-8
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2003
Strain FJI, a filamentous fungus isolated from rotten wood, showed high ability to hydrolyze cellulosic materials. To identify the strain FJI, ITS sequencing analysis and morphological observation were performed. The strain FJI was identified as Trichoderma harzianum. The strain produced a large amount of CMCase, xylanase, ${\beta}-glucosidase$, and avicelase. Optimal culture conditions for the production of the enzymes, such as pH, temperature, and inoculation concentration, were initial pH 6.0-7.0,$25-30^{\circ}C$, and $10^4$ ea-spores/ml in Mandel's medium, respectively. T.hanzianum FJI utilized various cellulosic materials and organic nitrogen sources to produce cellulases and xylanase, and also considerably a crystalline and/or insoluble material like Avicel and rice straw. The highest levels of CMCase and xylanase were 41.2 and 65.6 U/ml in 7 days of cultivation using 2.5% of carbon source (Avicel+CMC) and 0.5% of nitrogen source (peptone), respectively.
During the screening of cellulase producing microorganisms, a fungal strain C-4 was selected from etiolated leaves. Based on taxonomic studies, the fungus could be classified as a strain of Trichoderma sp. When the strain C-4 was cultured in Mandels' media at 28$circ$C for 6 days, the enzyme activities detected in broth were as follows: 8.2 U/ml (28.1 U/mg) of CMCase activity, 0.75 U/ml (2.58 U/mg) of Avicelase activity, 1.67 U/ ml (5.68 U/mg) of $eta$-glucosidase activity. The optimum pH for enzyme induction was 6.2. The crude enzyme retained 100% of its original CMCase activity at 50$circ$C for 1 hr (pH 5.0), and at 4$circ$C for 24 hrs (pH 5.0). There was no effect on the CMCase activity in the presence of 1 mM of CsCl, LiCl, MgCl$_{2}$, and FeCl$_{2}$, respectively. When the crude enzyme was treated with trypsin and chymotrypsin (2% W/w) for 10 minutes, the remaining CMCase activity was 70%, but there was no further loss of activity for 60 minutes treatment at 30$circ$C. The crude enzyme showed the synergism with rumen fluid for the hydrolysis of Avicel and CMC by 118% and 130%, respectively.
A novel bacterial strain, MG7, with high cellulase activity was isolated and identified by morphological characteristics and molecular phylogeny analysis as Paenibacillus barcinonensis. Maximum production of cellulase by MG7 was observed at pH 7.0 and $35^{\circ}C$. The enzyme was purified with a specific activity of 16.88 U/mg, the cellulase activity was observed in a zymogram, and its molecular mass (58.6 kDa) was confirmed by SDS-PAGE. The purified enzyme showed maximum activity at pH 6.0 and $65^{\circ}C$ and degraded cellulosic substrates such as carboxy methyl cellulose (CMC), Avicel, filter paper, and ${\beta}$-glucan. The enzyme showed stability with 0.5% concentration of various surfactants. The $K_m$ and $V_{max}$ of cellulase for CMC and Avicel were found to be 0.459mg/ml and 10.46mg/ml/h, and 1.01 mg/ml and 10.0 mg/ml/h, respectively. The high catalytic activity and its stability to temperature, pH, surfactants, and metal ions indicated that the cellulase enzyme by MG7 is a good candidate for biotechnological applications.
Penicillium verruculosum 섬유소 분해효소의 유도물질인 KC-flock 및 cellobiose octaacetate(COA)를 유일한 탄소원으로 포함하는 배지에서 21일간 배양하면서 배양여액 중의 섬유소 분해효소 각 성분의 활성도와 전기영동상의 단백질 양상을 검토하였다. 배양여액의 중의 총단백질 생성 및 섬유소 분해활성의 유도 효과는 COA 배지가 다른 두 배지의 3배 이상이었다. 배양기간의 증가에 따라 배양여액 중의 총단백질량이 증가되었는데 CMC 분해활성이나 $\beta$-glucosidase 활성의 증가보다는 avicel 분해활성도의 증가가 총단백질량의 증가와 유사하다.
To obtain basic information on the biochemical property of basidiospores of shiitake mushroom (Lentinula edodes), the ability of producing extracellular enzyme was assessed using a chromogenic plate-based assay. For the aim, amylase, avicelase, $\beta$-glucosidase, CM-cellulase, pectinase, proteinase, and xylanase were tested against monokaryotic strains generated from forty basidiospores of two different parental dikaryotic strains of shiitake mushroom, Sanjo-101Ho and Sanjo-108Ho. These two parental strains showed different degree of extracellular enzyme activity. No identical patterns of the degree of enzyme activity were observed between monokaryotic strains and parental strains of the two shiitake cultivars. The degree of extracellular enzyme activity also varied among monokaryotic strains of the two shiitake cultivars. Our results showed that dikaryotic parental strains of shiitake mushroom produce monokaryotic basidiospores having very diverse biochemical properties.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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