The cDNA of VP2/NS junction region on segment A of the marine birnavirus (MBV) isolated from flounder (DS strain) was amplified using the reverse transcription (RT)-polymerase chain reaction (PCR). Its cDNA nucleotide and deduced amino acid sequences were analyzed, and compared with the reference strains of MBV and infectious pancreatic necrosis virus (IPNV). Analyses of the nucleotide and deduced amino acid sequences revealed that the DS strain is very similar to the reference strains of MBV, distant from the IPNV.
The VP2 gene of aquatic birnavirus, Korean isolate (GC-1) was cloned and expressed using the baculovirus expression system. The VP2 gene and VP2 partial gene, which contained a neutralizing epitope, were constructed for recombinant transfer vectors, for baculovirus expression. The expressed recombinant proteins were confirmed by indirect immuno fluorescence antibody (IFA), SDS-PAGE and Western blot. The level of expression was checked at regular time using IFA and Western blot. To measure the neutralizing activity of recombinant proteins against GC-1 strain, the antisera against recombinant proteins were produced by using guinea pigs. The result showed that the antisera neutralized the GC-1 strain. However, the neutralizing titer was higher in antisera against the VP2 gene expressed recombinant protein than that of VP2 partial gene recombinant protein.
복부팽만, 안구돌출 및 체색혹화의 외부증상을 대표적으로 나타내며, 세균 및 기생충과 같은 병원체 감염의 원인이 아닌 버나바이러스성으로 판단되어지는 남해안 양식산 넙치, 조피볼락, 농어를 대상으로 RT-PCR 법에 의한 체내 감염 바이러스 검출을 행하였다. IPNV 및 MBV만을 선택적으로 확인 검출 할 수 있으며 감염어체를 사용한 검출에서 배양 세포법(12/50)에 비하여 높은 검출 감도(46/50)를 나타내는 RT-PCR 진단법을 도입하였다. 아울러 우리나라 남해안 양식장에 버나바이러스의 감염이 폭넓게 진행되고 있음을 확인할 수 있었다.
경북 울진 지역에서 채집된 양식 강도다리와 충남 태안 및 부산 지역 넙치 시료로부터 분리한 MABV에 대한 유전자 비교를 위해 VP2-NSPhylogenetic VP3 region (432 bp)을 phylogenetic 분석에 이용했다. Sequence 확인 결과 MABV (08-KU)는 일본 방어에서 최초 분리 보고된 YTAV와 98%의 nucleotide 유사성이 나타났으며, 이전 보고된 다 른 여러 strain들과는 76%이상 유사한 것으로 확인되었다. 그리고 MABV (06-KP)와 MABV (08-KC)도 YTAV와 97-98%의 높은 sequence 유사성을 보였다. 또한 다양한 MABV strain들과의 비교를 위해 충남태안 및 부산지역 넙치 시료에서 분리한 MABV (08-KC)와 MABV (06-KP)에 대한 phylogenetic 분석도 실시하였다. 그 결과 분석에 사용된 MABV (08-KU0, MABV (06-KP), MABV (08-KC)는 모두 일본 방어에서 분리된 MABV Y6와 동일한 genogroup VII에 포함 되었다.
Marine birnavirus (MABV)에 무증상적으로 감염된 넙치 (Paralichthys olivaceus) 치어에 면역억제제의 일종인 Dexamathasone을 투여하였을 때 MABV의 감염강도에 영향을 미치는가를 조사하였다. Real time PCR 분석결과 dexamethasone을 투여한 그룹이 생리식염수를 주사한 그룹 및 no handling 그룹에 비해 유의적으로 낮은 Ct 값을 나타냈으며, 또한 semi-quantitative RT-PCR 분석결과에 있어서도 dexamethasone을 주사한 그룹이 대조구 그룹들에 비해 MABV 유전자가 유의적으로 높게 증폭되는 것으로 나타났다. 이러한 결과로부터 dexamethasone 투여가 넙치 치어에 감염된 MABV의 복제를 증가시킴을 확인하였다.
Eukaryotic translation is initiated by either cap-dependent or cap-independent way, and the cap-independent translation can be initiated by the internal ribosomal entry site (IRES). In this study, to know whether the 5'UTR leader sequence of marine birnavirus (MABV) segment A and segment B can act as IRES, bicistronic vectors harboring a CMV promoter-driven red fluorescent gene (mCherry) and poliovirus IRES- or MABV's leader sequence-driven green fluorescent gene (eGFP) were constructed, then, transfected into a mammalian cell line (BHK-21 cells) and a fish cell line (CHSE-214 cells). The results showed that the poliovirus IRES worked well in BHK-21 cells, but did not work in CHSE-214 cells. In the evaluation of MABV's leader sequences, the reporter eGFP gene under the 5'UTR leader sequence of MABV's segment A was well-translated in CHSE-214 cells, indicating 5'UTR of MABV's segment A initiates translation in the cap-independent way and can be used as a fish-specific IRES system. However, the 5'UTR leader sequence of MABV's segment B did not initiate translation in CHSE-214 cells. As the precise mechanism of birnavirid IRES-mediated translation is not known, more elaborate investigations are needed to uncover why the leader sequence of segment B could not initiate translation in the present study. In addition, further studies on the host species range of MABV's segment A IRES and on the screening of other fish-specific IRESs are needed.
Reverse transcription (RT)-PCR and nested PCR methods (2-step PCR) were tested for their ability to detect marine birnavirus (MBV) in cultured rockfish, Sebastes schlegeli. One set of primers for RT-PCR was designed, based on a gene of infectious pancreatic necrosis virus (IPNV), and another set of primers for nested PCR was designed based on the VP2/NS junction region of MBV. This 2-step PCR method was specific for MBV and sensitivity was heightened when nested PCR was combined to RT-PCR. This 2-step PCR method was useful for detecting MBV not only in diseased fish, but also in asymptomatic fish. These results indicate that this 2-step PCR method is useful for detecting MBV in rockfish.
Kim Yeong Jin;Choi Won Chul;Kim Hyeung Rak;Jung Sung Ju;Jung Tae Sung;Kim Jae Ho;Yeo In Kyu;Oh Myung Joo
Fisheries and Aquatic Sciences
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제3권1호
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pp.49-51
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2000
This study was performed to confirm the relationship between viral propagation and apoptosis by the infection of marine birnavirus strain (MABV NF-4) on chinook salmon embryo (CHSE-214) cells. After 6 hr viral infection, MABV was detected by PCR method. Also, as a result of DNA assay on the cells, MABV infection resulted in a typical feature of apoptosis, DNA fragmentation. The results suggest that MABV replicated to high concentrations during the early stage of infection induces apoptosis.
Marine birnavirus(MABV)는 중요한 어류 병원체로서 일본 양식산 방어서 처음 분리되어 이후 다양한 해산어종에서 MABV 분리가 보고되었으며 환경적인 샘플인 저질, 해양의 동물성 플랑크톤과 해수에서도 MABV 유전자가 검출되고 있다. 본 연구는 Marine birnavirus disease 에 대한 예방학적 접근의 일환으로서 자연산 어류로부터의 MABV 검출 및 지리적 분포, 보균 어종에 대한 유전학적인 조사를 목적으로 2003년과 2005년도에 동중국해역 3지점, 서해안 5지점 그리고 남해안 5지점에서 어류를 채집하였다. RT-PCR(Reverse transcriptase-Polymerase Chain Reaction)을 이용한 연구결과 자연산 해산어류 160마리 중 13종 17마리에서 MABV가 거출되어 감염율10.6%를 보였다. 조사된 13종의 어류 중 특히 농어목에서 가장 높는 검출율을 보였다. 자연산 어류에서 분리한 MABV 분리균주는 염기서열 분석에서 94.7%-100%, 아미노산 분석에서 97.2-100% 유사성을 나타내었으며 IPNV strain과는 구분되며 MABV에 속하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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