JHL45, a novel immune modulator for anti-atopic dermatitis and allergic airway disease, was synthesized from decursin isolated from Angelica gigas. In order to conduct a pharmacokinetic study of JHL45, an analytical method, ideally one that uses a minimal amount of biological sample must first be validated. In this study, a HPLC-MS/MS method was developed and validated for the quantification of JHL45 and its major metabolite, (+)-decursinol, from 10 ${\mu}L$ of rat plasma. JHL45 was stable under the analysis conditions, and intra- and inter-day accuracies exceeded 90.06%, with a precision variability ${\leq}$ 13.16% for each analyte. The mean values for Cmax, AUC8h, half-life of JHL45 in rats after intravenous administration of 5 mg/kg JHL45 were 24.59 μg/mL, 10.02 ${\mu}g{\cdot}h/mL$, and 1.88 h, respectively. The validated method herein will be useful for further pharmacokinetic studies of JHL45, as well as in preclinical and clinical phases.
유기농재배 콩을 다양한 용매에서 추출하여 그 추출물에 대한 항산화 효과, 항염증 효과, 대식세포의 세포사멸 보호 효과, 그리고 알레르기 저해효과를 비교하였다. DPPH 법과 SOD 효소의 활성 측정으로 항산화 능력을 평가하였으며, 항염증 효과는 LPS로 유도시킨 Raw 264.7 세포주에서 염증 매개 단백질인 Cox-2와 iNOS의 발현량을 Western blotting으로 조사하여 분석하였다. 또한 대식세포 보호 효과를 세포사멸 조절 단백질인 Bcl-xl의 발현량조사로 평가하였고, 1mM $H_2O_2$ 처리로 유도되는 세포사멸의 보호효과를 세포 수 측정법으로 조사하였다. 항알레르기 효과는 흰쥐의 비만세포인 RBL-2H3 세포주를 사용하여 IgE로 매개되는 비만세포의 탈과립화를 OPT assay로 측정하여 분석하였다. 그 결과, 유기 재배 콩의 다양한 추출물에서 항산화, 세포사멸 보호, 항염증 효과를 나타내었다. 특히 유기농 콩의 열수 추출물은 LPS로 유도시킨 염증반응을 효과적으로 억제하는 것으로 나타났다. 그러나 항알레르기 효과는 모든 추출물에서 히스타민 유리량이 약간 감소하는 것으로 나타나 유기농 콩의 특별한 효과를 확인할 수 없었다. 콩에는 많은 유용한 생리활성물질 뿐 만 아니라 알레르기 유발 물질도 존재하는 것으로 알려져 있지만 조추출물 상태에서는 특이적인 알레르기 유발보다 오히려 항알레르기 효과가 나타났다. 결론적으로, 만성 염증 및 천식, 그리고 아토피피부염과 같은 염증관련 질환에는 유기 재배된 콩이 좋은 억제 효과를 가지고 있다고 판단된다.
Physiological lipid mixtures comprised of cholesterol, ceramide and free fatty acid better maintain epidermal homeostasis and have been recently used for dermatoses induced by skin barrier damage, for example for atopic dermatitis and xerotic skin. Itching and dry atopic dermatitis of the skin may be related to altered skin barrier function. In a previous study, the use of multi-lamellar emulsion (MLE), which is a lipid mixtures containing cholesterol, pseudoceramide and free fatty acid, has been shown to accelerate the recovery of the epidermal permeability barrier. In this study, we assessed the efficacy of MLE compared with a currently used anti-itch moisturizer (AIM), the active ingredients of which are menthol and camphor, on barrier recovery after barrier disruption. To clarify the effect of MLE and AIM after acute barrier perturbation, we measured the relation between transepidermal water loss (TEWL) and the barrier recovery rate at 3, 6, 24, and 48 hours after tape stripping hairless mice and then observed changes in the stratum corneum (SC), including the intercellular lipid structure and secretion of lamellar bodies, by electron microscopy. MLE treated skin recover skin barrier function more rapidly, and AIM treated skin delayed barrier repair. Morphological changes in the epidermis, of MLE treated skin revealed well-conserved lipid multi-lamellar structures at 24 h after tape stripping, whereas AIM treated skin showed altered lamellar bilayers within the SC interstices at 48 h. In addition, MLE treated skin showed an increase in the number of LBs and in their secretions and a decrease in the number of SC layers versus AIM treated skin. These results suggest that MLE may accelerate the production of an epidermal permeability barrier in hairless mice by increasing the number and secretion of LB and improve the dryness and itch associated with an altered epidermal permeability barrier.
아토피성 피부염은 피부장벽 기능장애, 염증 및 만성 소양증을 특징으로 하는 다인성의 염증성 피부질환이다. 아토피성 피부염은 유전적, 면역학적, 환경적 요인 등의 복합적인 요인으로 피부장벽 기능과 면역기능의 장애를 유발한다고 알려져 있다. 고삼 추출물은 중국전통의학에서 사용되고 있으나, 이의 항아토피 효능에 대한 연구는 거의 진행되지 않았다. 본 연구에서는 아토피성 피부염의 주요 증상인 피부장벽 기능과 면역이상 개선에 대한 고삼추출물의 효과를 평가하였다. 고삼추출물은 피부장벽 기능에서 중요한 역할을 하는 각질세포막의 형성을 강화하는 결과를 나타내었다. 또한 피부의 보습작용에 있어서 중요한 히알루론산의 발현을 증가시키는 결과를 나타내었다. 아토피성 피부염 병변에서 특이적으로 증가하는 황색포도상구균에 대한 고삼추출물의 효능도 확인하였으며, 고삼추출물이 황색포도상구균으로부터 유도된 전염증성사이토카인의 생성을 억제함을 확인하였다. 또한 피부 스트레스 등으로 부터 생성되는 신경전달 물질인 substance P에 의해 유도된 전염증성사이토카인의 발현도 억제하는 것을 확인하였다. 이러한 결과들은 고삼추출물이 피부장벽기능과 면역반응 개선을 통해 아토피 피부염 치료에 사용될 수 있는 잠재적 후보물질임을 제시한다.
지방줄기세포는 다양한 세포로 분화할 수 있어서 세포치료제로 주목받고 있으나 세포 증식 속도가 느리고 세포의 수명이 짧아 임상 적용에 어려움이 있다. 본 연구팀은 선행연구에서 지방줄기세포의 증식속도를 향상시키고 세포 수명을 연장시키기 위해 SV40의 T항원 유전자를 사람의 ADSC에 도입하여 불사화시킨 ADSC 세포주를 제작하였으며 ADSC-T라고 명명하였다. 본 연구에서는 ADSC-T 세포의 분화능력을 검증하고, ADSC-T 세포를 배양하여 획득한 무혈청 배양액의 항염증 효능을 평가하였다. 그 결과, ADSC-T 세포주는 지방세포와 골세포로 분화할 수 있는 능력을 보유하고 있어 줄기세포의 가장 중요한 특징인 분화능력을 유지하고 있음을 알 수 있었다. 또한 ADSC-T의 배양액은 염증을 유발하는 NF-κB의 활성을 억제하였고, NF-κB의 표적 유전자인 COX-2와 iNOS의 발현도 억제하였다. 또한 ADSC-T 배양액은 ERK, JNK, p38의 인산화를 저해하여 세포 내 염증 유발 신호 전달 회로인 MAPKs 회로를 억제하는 것으로 나타났으며, 염증을 유발하는 cytokine인 TGF-β, TNF-α, IL-6, IL-13의 발현도 억제하는 효과를 보여 강한 항염증 효능이 있을 것으로 추정되었다. 실제로, 아토피 모델 쥐인 Nc/Nga 마우스를 DNCB로 처리하여 아토피 피부염을 유발한 뒤 ADSC-T 배양액을 도포한 결과 강한 치료 효과를 나타내었다. 이상의 결과로부터, 불사화된 ADSC-T 세포주는 지방줄기세포의 장점과 효능을 유지하고 있으며 향후 지방줄기세포의 세포 수급 문제를 해결할 수 있을 뿐 아니라 임상 적용이 가능한 배양액의 생산에도 널리 이용될 수 있을 것으로 사료된다.
스테비아(Stevia rebaudiana)는 남아메리카 지역이 원산지인 국화과 스테비아 속의 다년생 식물로 스테비올(steviol)을 기본 구조로 하는 다양한 배당체가 존재하며 스테비오사이드(stevioside)와 리바우디오사이드(rebaudioside) A 등이 주성분이다. 스테비올 배당체들은 설탕보다 단맛이 월등히 뛰어나 감미료로 널리 사용되어지고 있다. 최근 여러 논문들에서 스테비올 배당체들이 미백 및 항염 효과 뿐 아니라 피부장벽 타이트정션 단백질 조절에 연관되어 있다는 보고가 있었다. 따라서 본 연구에서는 스테비올 배당체인 리바우디오사이드 A의 항염 효과 연구를 통해 향후 아토피 피부염 개선 화장품 원료 개발 가능성을 확인하고자 하였다. 항염 연구를 위해 마우스 대식세포인 RAW264.7 세포를 이용하여 cell viability 및 염증 유발 사이토카인 mRNA 발현량을 분석하였다. 우선 cell viability 측정을 위해 cell counting kit-8 (CCK-8) assay를 수행하였고 세포독성이 없는 최대 농도를 $250{\mu}M$로 설정하여 이후 모든 실험을 진행하였다. 리바우디오사이드 A의 염증 조절 기능 연구는 주로 정량적 real-time RT-PCR 방법을 이용하였다. LPS에 의해 활성화된 RAW264.7 대식세포에서 리바우디오사이드 A 처리 결과 LPS 처리군 대비 iNOS 발현량은 약 47% 감소하였고, COX-2 또한 41% 감소하였다. 생성된 NO의 양 또한 농도 의존적으로 감소하였다. 대식세포를 LPS로 활성화시킨 조건에서 염증 관련 사이토카인 유전자인 interleukin (IL)-$1{\alpha}$, IL-$1{\beta}$, IL-6의 발현량 조절을 확인한 결과 사이토카인(IL-$1{\alpha}$, $1{\beta}$, 6) 발현이 LPS 처리군 대비 40%, 45%, 59%로 농도 의존적 유의성 있게 감소하였다. 결론적으로 스테비올 배당체인 리바우디오사이드 A는 NO 생성 및 사이토카인 분비 억제를 통해 염증 반응을 저해하였다. 이러한 리바우디오사이드 A의 신규 항염증 조절 기능을 통해 아토피성피부염 개선 소재로의 개발이 기대된다.
Objectives : Trimellitic anhydride (TMA), a sensitizer that induces occupational asthma and atopic dermatitis, is widely used industrially to make epoxy and alkyd resins, plasticizers, high temperature polymer, and surfactants. The aim of this study was to investigative the effects of aqueous extracts of Lonicera japonica Flower(LJFAE) on TMA-induced contact hypersensitivity (CHS) in Balb/c mice. Methods : The dried flowers of L. japonica were extracted with distilled water at $100^{\circ}C$ for 7 h. The extract was freeze-dried following filteration through 0.45 ${\mu}m$ filter. Mice were orally administrated with or without LJFE of a different doses(25-100 mg/kg) for 28 days. In the challenge period, mice were externally applied at difference doses of LJFAE one time per day 30 min before TMA treatment. We examined the effects of LJFAE on the the serum levels of IgE and prostagladin E2 (PGE2), the Thl/Th2 cytokine production of spleen cells, ear swelling responses, and the leukocyte infiltration induced by TMA. Results : The orally and externally administration of LJFAE dose-dependently reduced the serum levels of IgE and PGE2 production as well as ear swelling responses and leukocyte infiltration in TMA-induced Balb/c mice. Furthermore, the levels of Thl (TNF-${\alpha}$, IFN-${\gammer}$, IL-2)/Th2 (IL-4, IL-5, IL-13) cytokine production from spleen cells stimulated with anti-CD3 and CD28 mAbs was markedly suppressed by the orally and externally treatment with LJFAE in a concentration dependent manner. Conclusions : These results suggest that LJFAE suppresses the inflammatory mediators and regulates the Thl/Th2 cytokines. Therefore, these properties may contribute to the strong anti-CHS response effect of LJFAE.
The aim of the present study is to investigate the cytokine production inhibitory effect of a Dictamni Radicis Cortex (DRC). DRC has been commonly used as important medicinal herb in China and it used to control eczema, atopic dermatitis, fever and inflammatory diseases. Inflammation, such as a bacterial infection in vivo metabolites, such as external stimuli or internal stimuli to the defense mechanisms of the biological tissue a variety of intracellular regulatory factors deulin inflammatory TNF-${\alpha}$, IL-$1{\beta}$, IL-6, IL-8, such as proinflammatory cytokines, prostagrandin, lysosomal enzyme, free radicals are involved in a variety of mediators. The present study was designed to determine the effect of the DRC on proinflammatory factors such as NO, iNOS expression and TNF-${\alpha}$, IL-$1{\beta}$, IL-6 in lipopolysaccharide (LPS) - stimulated RAW264.7 cells. The cell toxicity was determined by MTS assay. To evaluate of anti-inflammatory effect of DRC, amount of NO was measured using the NO detection kit and the iNOS expression was measured by reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR). And proinflammatory cytokines were measured by ELISA kit. As a result, the DRC reduced NO, iNOS expression and TNF-${\alpha}$, IL-$1{\beta}$, IL-6 production without cytotoxicity. Our results suggest that the DRC may have an anti-inflammatory property through suppressing inflammatory mediator productions.
Kim, Dong-Wok;Chi, Yeon-Sook;Son, Kun-Ho;Chang, Hyeun-Wook;Kim, Ju-Sun;Kang, Sam-Sik;Kim, Hyun-Pyo
한국응용약물학회:학술대회논문집
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한국응용약물학회 2001년도 추계학술대회 및 정기총회
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pp.82-82
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2001
Previously, several prenylated flavonoids having a C-8 lavandulyl moiety were found to inhibit cyclooxygenase-1 (COX-1) as well as 5-lipoxygenase (5-LOX), and sophoraflavanone G was the most potent inhibitor against these eicosanoid generating enzymes among the prenylated flavonoids tested. In this investigation, effects of sophoraflavanone G on COX-2 induction from RAW 264.7 cells and in vivo inflammatory response were studied. Sophoraflavanone G inhibited prostaglandin E$_2$(PGE$_2$) production from lipopolysaccharide (LPS)-treated RAW cells by COX-2 down-regulation without significantly affecting COX-2 activity at 1 50 $\mu$M. Other prenylated flavonoids including kuraridin and sanggenon D also down-regulated COX-2 induction at 10-25 $\mu$M, lirhile kurarinone and echinoisoflavanone did not. In addition, sophoraflavanone G shelved in vivo anti-inflammatory activity against mouse croton oil-induced ear edema and rat carrageenan paw edema via oral (2-250mg/kg) or topical administration (10 - 250 $\mu\textrm{g}$/ear). Although the potencies of inhibition were far less than that of a reference drug, prednisolone, this compound showed higher anti-inflammato교 activity when applied topically, suggesting a potential use for several eicosanoid-related skin inflammation such as atopic dermatitis.
본 연구는 식중독은 물론, 아토피성 피부염의 원인물질로 알려져 있는 포도상구균 장내독소 B(Staphylococcal enterotoxin B; SEB)에 대한 특이 난황항체를 개발하고자 실험을 실시하였다. 우선, SEB 유전자를 클로닝한 다음, 대장균 발현시스템을 이용하여 약 30 kDa 정도의 재조합 SEB 단백질을 생산하였다. 재조합 SEB 단백질을 산란계에 2주 간격으로 3회 면역접종을 실시하고, 혈청 및 난황 내 항체가를 측정한 결과, 면역 후 4주경에 항체가가 최고치에 달하였으며, 산란계로부터 획득한 난황항체를 이용한 Western blot 결과, 재조합 SEB 단백질은 물론, 상용화 SEB 단백질과도 특이적으로 반응한다는 것을 규명하였다. 결론적으로, 식중독과 아토피성 피부염 등의 원인물질로 알려진 SEB에 특이적인 난황항체를 생산에 성공하였으며, 이러한 특이적인 난황항체는 식중독 및 아토피성 피부염의 예방 및 치료에 활용 가능할 것으로 사료된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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