포유류의 조직에 널리 분포되어 있으며 혈압 조절에 중요한 역할을 하는 Angiotensin-converting enzyme(ACE)은 아연을 함유하는 dipeptidase로서 angiotensin I을 가수분해하여 강력한 혈압상승제인 angiotensin II를 생성하는 효소이다. 최근에 돼지의 난소에서 ACE 활성이 측정되었으며, 돼지의 신장에서 ACE 단백질이 분리되어 그 특성이 알려졌다. 그러나 돼지의 어떠한 ACE DNA 염기서열도 아직까지 보고 된 바는 없다. 그러므로 본 연구에서 reverse transcriptase-polymerase chain reaction(RT-PCR)을 이용하여 돼지의 신장 ACE cDNA를 클로닝하고 그 염기서열을 분석하였다. ACE cDNA는 1309개의 아미노산으로 구성되어 있으며 그 분자량은 150kDa이다. 염기서열로부터 유추한 아미노산의 서열을 분석한 결과, N 말단의 33개 아미노산이 signal peptide 역할을 하는 것으로 보이며, C 말단 근처의 짧은 transmembrane 영역은 세포막에 anchor역할을 하는 것으로 보인다. 돼지 신장의 ACE에서 두 개의 매우 유사한 amino acid peptidase domain은 tandem duplication 되어 있으며, 각각의 domain은 다른 포유류의 체세포 ACE들과 마찬가지로 putative metal-binding site(His-Glu-Met-Gly-His)를 하나씩 가지고 있는 것으로 나타났다. 돼지 신장 ACE 서열과 인간, 토끼, 쥐 등과 같은 포유류의 ACE 아미노산 서열들과의 상동성 비교는 진화과정 중 두 domain이 매우 잘 보전되어 왔음을 보여주고 있다.
This study was designed to investigate the angiotensin convertin enzyme (ACE) inhibitory activity of skipjack/yellowpin tuna cooking broth. The cooking broth was pretreated with membrane filter (MW cut-off 5,000) to obtain the peptide fraction with ACE inhibition. the crude peptides fractionated with Amberlite IR-120 ($H^{+}$ form and followed by Bio-gel P-2, were separated into nine fractions (T-1 to T-9). The maximum inhibitory activity was observed in the fraction T-4 ($IC_{50}$ value, 0.619mg/ml). The abundant amino acids obtained from active fraction T-4 were phenylaanine, leucine and glutamic acid.
Je, Jae-Young;Park, Pyo-Jam;Byun, Hee-Guk;Kim, Se-Kwon;Kim, Jong-Bae;Chang, Soo-Hyun
한국어업기술학회:학술대회논문집
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한국어업기술학회 2002년도 추계 수산관련학회 공동학술대회발표요지집
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pp.191-192
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2002
Angiotensin I converting enzyme [EC 3.4.15.11 (ACE) is important in the maintenance of blood pressure. The enzyme removes histidyl-leucine from angiotensin I to form the blood-vessel-constricting octapeptide, angiotensin II, and degrades vasodilative bradykinin in blood vessels and stimulates e release of aldosterone in the adrenal cortex. (omitted)
대두발효식품의 기능성 탐색 연구의 일환으로 Bacillus natto 를 접종한 납두의 발효과정 중 고혈압을 유발하는 angiotension converting enzyme의 저해 peptide를 분리하고 저해효과를 검토함으로서 대두발효식품의 우수성을 입증하기 위한 과학 적 접근을 시도하고자 하였다. 납두는 Bacillus natto균을 이용하여 제조하였고, 2$0^{\circ}C$, 3$0^{\circ}C$, 4$0^{\circ}C$, 5$0^{\circ}C$, 6$0^{\circ}C$에서 0~72시간 동안 배양하면서 protein량, protease activity, ACE 저해율 을 측정하고 저해활성을 가지는 peptide를 정제 후 아미노산 조상을 분석하였다. Bacillus natto에 의한 납두의 발효시간이 경과함에 따라 protein 함량이 증가하여 4$0^{\circ}C$, 60시간에서 최대를 나타낸 후 감소하였다. 발효시간에 따른 protease activity는 4$0^{\circ}C$, 60 시간 배양이 최적의 조건이었으며, 최적 발효조건에 따라 납두를 제조한 후 20 mM sodium phosphate buffer(pH 7.0)를 가해 추출한 추출물을 Amicon membrane YM-3 filtration 과 Sephadex G-10, G-25를 이용한 gel filtration으로 부분정제하였다. 또한 정제한 peptide는 첨가함량이 높아질수록 저해활성은 높게 나타났으며, 1 mg 정도의 peptide 함량으로 74.74%의 저해율 을 나타내었다. 정제한 peptide의 아미노산 조성은 alanine(30.84%), phenylalanine(30.03%), histidine(20.24%) 순서로 그 함량이 높게 나타났다.
본 연구는 우리나라 전통 발효식품인 장류, 김치류 및 젓갈류로부터 angiotensin converting enzyme 저해활성이 우수한 젖산균을 분리하고자 하였다. 젖산균을 분리하기 위한 선택배지로서 bromocresol purple (BCP) 한천배지를 사용하여 1차적으로 젖산균을 분리하였으며, 그 중 angiotensin converting enzyme 저해활성이 우수한 균주를 최종 선발하였다. 분리된 젖산균을 16S rRNA 유전자 염기서열 분석으로 동정한 결과 Lactobacillus brevis ATCC $14869^T$와 99.7%의 유사도를 나타냄에 따라 L. brevis HLJ59로 명명하였다. L. brevis HLJ59는 내산성의 경우 pH가 2.0, 3.0으로 보정된 DeMan Rogosa Sharpe 액체배지에서 접종 후 각각 90분, 30분이 경과하였을 때 배양초기와 비교 시 약 99% 감소하는 결과를 보였으나, 담즙산(Bile extract)의 경우 1% 첨가 시에도 생육에 저해를 받지 않는 것으로 조사되어 L. brevis HLJ59 균주는 담즙산에 대한 내성이 우수한 균주임을 확인하였다. 항생제 내성의 경우 20종의 항생제를 paper disc법으로 조사한 결과 본 균주는 cephalosporin계의 cefoxatin (30 ${\mu}g$), ceftnaxone (30 ${\mu}g$), penicillin계의 penicillin (10 units), quinolones계 cprofloxacin (5 ${\mu}g$), nalidixic acid (30 ${\mu}g$), lincosamid계의 lincomycin (2 ${\mu}g$) 및 기타 chloramphenicol (30 ${\mu}g$)에 대해서는 내성을 가지고 있음을 확인하였다.
Angiotensin converting enzyme (ACE) converts angiotensin I into angiotensin II by cleaving C-terminal dipeptide of angiotensin I and inactivates bradykinin. ACE inhibitors have been screened from various food sources since the inhibitors decrease blood pressure. Therefore, in this study, an ACE inhibitor was isolated and purified from squid ink using membrane filtration, gel permeation chromatography, normal phase HPLC, and fast protein liquid chromatography. The purified inhibitor was identified to be a molecular mass of 294 by mass spectrometry, and to have IC$\sub$50/ value of 4.9 $\mu\textrm{g}$/mL.
In order to investigate the structure-activity relationships of the stereoisomers of angiotensin converting enzyme inhibitors, captopril and its derivatives were selected as model compounds. In vitro enzymatic activities of them depend on the symmetry at the asymmetric carbons. Especially, the alanyl carbon should have the S configuration to be biologically active. But the demethylated captopril having the achiral carbon also shows the activity although it is less active than captopril. Seven stereoisomers of captopril and its derivatives were chosen and their acidic and ionic forms were used for molecular dynamics simulations. Four computer simulations were practiced for each model compound in order to obtain the good condition for simulation to explain the experimental structure-activity relationships. From the computer simulation results, relativistic movements of three well-known pharmacophoric sites, carboxylate carbon, carbonyl oxygen, and sulfur atoms, were analyzed. Good results were obtained from the aqueous solution molecular dynamics simulation with ionic forms of model compounds. Active model compounds have the pharmacophoric areas of 6.08 to 6.38 $\AA$$^2$and the similarity in the geometrical data. But inactive ones have the largely deviated values of 4.51 to 4.87 $\AA$$^2$from those of active ones.
In this study, an angiotensin I-converting enzyme (ACE) inhibitor from squid skin was purified and characterized. Squid (Todarodes pacificus) skin protein isolates were hydrolyzed using six commercial proteases: alcalase, ${\alpha}$-chymotrypsin, neutrase, papain, pepsin, and trypsin. The peptic hydrolysate had the highest ACE inhibitory activity. The ACE inhibitory peptide was purified using Sephadex G-25 column chromatography and reverse phase high-performance liquid chromatography (HPLC) with a $C_{18}$ column. The purified ACE inhibitory peptide was identified and sequenced, and found to consist of seven amino acid residues: Ser-Ala-Gly-Ser-Leu-Val-Pro (657Da). The $IC_{50}$ value of the purified ACE inhibitory peptide was 766.2 ${\mu}M$, and Lineweaver-Burk plots suggested that the purified peptide acts as a noncompetitive ACE inhibitor. These results suggest that the ACE inhibitory peptide purified from the peptic hydrolysate of squid skin may be of benefit in developing antihypertensive drugs and functional foods.
Angiotensin converting enzyme (ACE)은 혈압 상승작용과 밀접한 관계가 있는 효소이다. 따라서 이 효소의 작용 억제는 혈압 강하를 초래한다. 본 실험에서는 ACE와 여러점에서 유사점을 가진 Carboxypeptidase A에 대하여 강력한 억제 효과를 나타내는 간단한 구조의 억제제를 개발한 바 있는데. 이때 사용한 억제제 설계방법을 ACE 억제제 개발에 적용시켜 ACE 억제를 통한 고혈압 강하제 개발을 목적으로 하였다. ACE 억제작용에 있어서의 알려진 구조-활성 상관 관계와 ACE의 활성부위를 기초로 해서 아래와 같은 구조의 물질을 억제작용 보유의 물질로 설계하고 합성하였다.
국내에서 많이 사용되는 한약재 51종을 극성에 따라 4가지 용매로 분획한 후 안지오텐신 전환 요소 활성도 억제를 검색한 결과 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 202종의 분획중 $400{\;}\mu\textrm{g}/ml$의 농도에서 안지오텐신 전환효소 활성도를 50% 이상 억제한 추출물 수는 26종이었고, 90% 이상 억제한 추출물 수는 4종이었다. 2. 대부분 추출물의 $IC_{50}$ 수치는 $300-400{\;}\mu\textrm{g}/ml$ 이었으나 택사의 물층, 황련의 buthanol, 물 추출물과 단삼의 ethylacetate, buthanol 추출물, 토사자의 ethylacetate 추출물 등은 6종의 추출물은 $200{\;}\mu\textrm{g}/ml$ 이하의 $IC_{50}$을 보였다. 이상과 같은 결과로 보아 많은 한약재들의 항고혈압 효과는 부분적으로 안지오텐신 전환효소를 억제하는 효과에 의한 것으로 여겨진다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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