선행된 연구에서 Yo-Pro-1의 전달 효율의 경향과 CFP 유전자의 발현 효율의 경향이 큰 차이를 보였지만 이 문제에 대한 원인을 제시할 수 없었다. 따라서 본 연구에서는 형광 염료를 이용하여 DNA에 표지 후 전달 효율을 정량화함으로써 이 문제에 대한 원인을 찾고자 한다. 표지를 위한 형광 염료로 Yo-Pro-1을 사용하였으며, Yo-Pro-1과 표지 된 DNA의 전달 효율을 비교하였다. 전압 조건에 따른 전달효율 비교에서는 Yo-Pro-1과 Yo-Pro-1으로 표지 된 DNA의 전달 효율 모두 96 V에서 전달 효율이 최대가 되었으며 전압이 더 증가하면 전달 효율이 오히려 감소하는 경향을 보였다. 전압 인가 횟수 조건에 따른 전달 효율 비교에서는 Yo-Pro-1과 Yo-Pro-1으로 표지 된 DNA의 두 전달 물질 모두 8회의 전압 인가 횟수에서 전달 효율이 최대가 되었으며 전압 인가 횟수가 더 증가하면 전달 효율이 감소하는 경향을 보였다. 두 결과를 통해 디지털 전기천공시스템에서 Yo-Pro-1을 사용한 전달 효율 측정이 DNA의 전달 효율을 잘 대변하는 것을 확인하였다. 또한, 본 연구의 결과를 통해 선행된 연구에서 보인 Yo-Pro-1의 전달 효율의 경향과 CFP 유전자의 발현 효율의 경향 차이는 전달 물질의 전달 효율 차이에서 기인한 결과가 아닌 전달 된 유전 물질의 발현 과정에서의 문제로 인한 결과임을 추론해 볼 수 있었다.
본 연구에서는 전기천공시스템에서 형광 염료를 사용한 세포 생존율 평가와 형광 염료를 전달 물질로 하여 세포 내부로의 전달 효율 평가를 통해 세포의 생존율과 전달 물질의 전달 효율 평가에 사용하기 적합한 형광 염료의 선정 및 사용에 적절한 농도에 대한 가이드라인을 제시 할 수 있는 기초 연구를 수행하였다. 형광 염료로는 Propidium Iodide와 Yo-Pro-1을 사용하였다. Propidium Iodide과 Yo-Pro-1을 사용한 세포 생존율 평가와 전달 효율의 평가에서 각 형광염료의 유세포 분석 히스토그램의 모양은 형광 염료의 종류와 사용한 농도에 따라 다른 것을 확인하였다. 이는 사용하는 형광 염료의 특성과 연관이 있는 것으로 이 결과를 통해 세포 분석에 사용하는 형광 염료의 특성에 따라 분석 결과가 달라지는 것을 알 수 있었다. 형광 염료 자체가 세포 생존률에 미치는 영향은 크지 않음을 확인하였다. 또한 두 종류 이상의 형광 염료를 사용하여 분석을 하는 경우 발생할 수 있는 형광 신호 간의 간섭 영향을 확인하였다. 간섭의 영향은 Yo-Pro-1의 농도가 높을수록 큰 것으로 확인되었으며 Propidium Iodide의 농도는 형광 신호의 간섭에 큰 영향을 미치지 않음을 확인하였다. 본 연구를 통해 형광 염료의 종류와 농도에 따라 세포 생존율 평가와 전달 효율의 평가 결과가 영향을 받는 것을 확인했으며 이는 형광 염료의 특성과 연관이 있는 것으로 판단된다. 또한, 본 연구 결과를 토대로 세포 생존율 평가와 전달 효율 평가에 적절한 형광 염료의 선정과 사용에 적절한 농도를 제시하였다.
본 연구에서는 기 개발된 액적 접촉충전 기반의 디지털 전기천공 기술을 이용해 미세조류에 단백질을 전달하는 연구를 수행 하였다. Chlamydomonas reinhardtii 중 세포벽이 존재하는 야생종 cc-125에 적용한 결과, 살아 있는 세포의 핵 내부로 형광 단백질 GFP가 10% 이상의 비교적 높은 효율로 전달될 수 있음을 확인하였다. 또한 인가 전기장의 크기 변화에 따른 단백질 전달 효율을 살펴봄으로써 최적의 단백질 전달 효율을 위한 전기천공 전기장 조건을 도출하였다(960 V/cm). 전달 물질의 크기에 따른 영향 분석을 위해 추가로 수행한 핵산 염색 형광 염료 Yo-Pro-1의 전달 특성 분석 결과, 크기에 따른 차이가 존재함에도 최적의 전달 효율을 나타내는 인가 전기장의 세기 조건은 매우 유사한 경향을 보였다. 마지막으로 본 연구 결과의 의미 및 크리스퍼 유전자 가위 기술의 적용 등 향후 활용방안에 대해서 논의하였다.
The aim of this study is to compare the anti-inflammatory and immunological activity of different parts (bone, meat, and rind) of Yeonsan Ogye (YO). In order to evaluate cytotoxicity, MTT assay was performed. We investigated the production of nitric oxide (NO) and pro-inflammatory cytokines, such as IL-$1{\beta}$, IL-6, and TNF-${\alpha}$, in LPS-induced RAW264.7 cells. All parts of the YO showed no toxicity at concentrations of 1, 10, and $100{\mu}g/m{\ell}$. Rooster's bone, hen's bone, and rind decreased the production of NO. And rooster's bone, meat, and hen's bone also attenuated TNF-${\alpha}$ production in LPS-induced RAW 264.7 cells. In addition, all parts of the YO decreased IL-$1{\beta}$ and IL-6 production in LPS-induced RAW264.7 cells, whereas they all increased IL-$1{\beta}$, IL-6 and TNF-${\alpha}$ production in normal RAW264.7 cells. Rooster exhibited higher immune activation and inhibitory activity on inflammation than a hen, and among different parts of the YO, bone showed the highest activity. Our results demonstrated and compared the anti-inflammatory and immunological activity of different parts of the YO. These results suggest that YO may be developed as a raw material for new health supplement food and medicine to attenuate various symptoms related to inflammation and immunity.
Objectives: This study was designed to evaluate the macrophages polarization of traditional Korean medicine on cardiac pain about Geum-Gwe-Yo-Ryak's two prescriptions including Kwaruhaebaekbanha-tang (KHB) and Kwaruhaebaekpaekju-tang (KHP). Materials and methods: Flow cytometry analysis was used to measure the changes in the ratio of M1 type and M2 type macrophages. Protein expression of nuclear factor-like 2 (Nrf2), heme oxygenase-1 (HO-1), inducible nitric oxide synthase (iNOS), and cyclooxygenase-2 (COX-2) were measured by Western Blot, and ABCA1 and SR-B1 were detected by real time PCR (RT-PCR). Intracellular lipid accumulation was measured by Oil Red O staining (ORO staining). Results: KHB and KHP increase anti-oxidative activity related protein levels including Nrf2 and HO-1. Furthermore, KHB and KHP inhibit lipid accumulation on intracellular levels through induction of ATP binding receptor cassette subfamily A member 1 (ABCA1) and scavenging receptor class B member 1 (SR-B1), respectively. Finally, KHB and KHP also blocked pro-inflammatory mediators including tumor necrosis factor-alpha ($TNF{\alpha}$) and interleukin-6 (IL-6), iNOS and COX-2 expression. Conclusion: This study suggests that KHB and KHP potently regulate the M1/M2 macrophage polarization.
Nephrocalcinosis often occurs in infants and is caused by excessive calcium or vitamin D supplementation, neonatal primary hyperparathyroidism, and genetic disorders. Idiopathic infantile hypercalcemia (IIH), a rare cause of nephrocalcinosis, results from genetic defects in CYP24A1 or SLC34A1. Mutations in CYP24A1, which encodes 25-hydroxyvitamin D 24-hydroxylase, disrupt active vitamin D degradation. IIH clinically manifests as failure to thrive and hypercalcemia within the first year of life and usually remits spontaneously. Herein, we present a case of IIH wih CYP24A1 mutations. An 11-month-old girl visited our hospital with incidental hypercalcemia. She showed failure to thrive, and her oral intake had decreased over time since the age of 6 months. Her initial serum parathyroid hormone level was low, 25-OH vitamin D and 1,25(OH)2 vitamin D levels were normal, and renal ultrasonography showed bilateral nephrocalcinosis. Whole-exome sequencing revealed compound heterozygous variants in CYP24A1 (NM_000782.4:c.376C>T [p.Pro126Ser] and c.1310C>A [p.Pro437His]). Although her hypercalcemia and poor oral intake spontaneously resolved in approximately 8 months, we suggested that her nephrocalcinosis and renal function be regularly checked in consideration of potential asymptomatic renal damage. Hypercalcemia caused by IIH should be suspected in infants with severe nephrocalcinosis, especially when presenting with failure to thrive.
Purpose: This report presents a unique case featuring real, ghost, and pseudo-ghost images on the panoramic radiograph of a patient wearing earrings. It also explains the formation of these images in an easy-to-understand manner. Materials and Methods: One real image and two ghost images appeared on each side of a panoramic radiograph of a patient wearing earrings on both sides. Of the two ghost images on each side, one was considered a typical ghost image and the other was considered a ghost-like real image (pseudo-ghost image). The formation zones of the real, double, and ghost images were examined based on the path and angles of the X-ray beam from the Planmeca ProMax. To simulate the pseudo-ghost and typical ghost images on panoramic radiography, a radiopaque marker was affixed to the right mandibular condyle of a dry mandible, and the position of the mandible was adjusted accordingly. Results: The center of rotation of the Planmeca ProMax extended beyond the jaw area, and the area of double image formation also reached beyond the jaw. The radiopaque-marked mandibular condyle, situated in the outwardly extending area of double image formation, exhibited triple images consisting of real, double (pseudo-ghost), and ghost images. These findings helped to explain the image formation associated with the patient's earrings observed in the panoramic radiograph. Conclusion: Dentists must understand the characteristics and principles of the panoramic equipment they use and apply this understanding to taking and interpreting panoramic radiographs.
The study evaluated the effect of donor cell treatments for G0/Gl synchronization and the donor ceil type on development and incidence of apoptosis in cloned cattle embryos. Primary cultures were established from a female fetus on day 50 of gestation and adult ear skin biopsies. Cells were randomly allocated into 3 experimental treatment groups after 6~8 passages. Group 1 (Confluent), cells were cultured in DMEM supplemented with 10% FBS until 90% confluent. Group 2 (Serum-starvation), cells were cultured in DMEM Supplemented With 0.5% FBS for 5 days. Group 3 (Roscovitine), Cells were cultured in DMEM supplemented with 10% FBS and 30 $\mu$M Roscovitine for 12 h. Cell cycle and apoptosis were analyzed using flow cytometry after labelling with DAPI and YO-PRO-1. At 19 h post-maturation (hpm), enucleated oocytes were reconstructed with donor cells and fused by a single DC pulse (1.6 kV/cm, 60 $\mu$sec). (중략)
The uracil-sensing domain in archaeal family B-type DNA polymerases recognizes pro-mutagenic uracils in the DNA template, leading to stalling of DNA polymerases. Here, we describe our new findings regarding the molecular, mechanism underpinning the stalling of polymerases. We observed that two successive deaminated bases were required to stall TNA1 and KOD1 DNA polymerases, whereas a single deaminated base was enough for stalling Pfu DNA polymerase, in spite of the virtually identical uracil-sensing domains. TNA1 and KOD1 DNA polymerases have a much higher extension rate than Pfu DNA polymerase; decreasing the extension rate resulted in stalling by TNA1 and KOD1 DNA polymerases at a single deaminated base. These results strongly suggest that these polymerases require two factors to stop DNA polymerization at a single deaminated base: the presence of the uracil-sensing domain and a relatively slow extension rate.
전동차 내장패널에 대한 비교전과정평가를 실시하였다. ISO14044 표준과 에코인디케이터 99 방법론, SimaPro 7.0 software, Ecoinvent DB를 이용하여 전과정목록 DB를 구축하고 LCA를 수행하였다. 전동차 내장패널의 환경성 측면에 대한 일반적인 예상에 대하여 LCA를 통한 검증을 수행하였다. 전동차 내장패널의 중량이 환경성과 상관이 있음에도 불구하고 상대적 중요도는 높지 않았으며, Al 내장패널의 경우 사용단계의 환경영향이 가장 큼에도 불구하고 타 재질 내장패널에 비해 제작단계의 환경영향이 주요환경이슈로 도출되었다. Al 내장패널의 경우, 재활용으로 인한 환경편익이 크나, 장기적으로는 제작단계의 환경영향을 저감하여야 타 재질 대비 환경성 측면의 경쟁력을 강화할 수 있다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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