효모추출물 4 mg/mL를 고추유묘에 경엽 및 뿌리 관주처리 24시간 후에 salicylic acid(SA)함량을 ultra high performance liquid chromatography(UHPLC)분석방법으로 측정한 결과 yeast cell wall extract(YCWE)처리구에서 대조구의 SA처리구와 동일한 peak가 검출되어 SA가 생성 유도 되는 것으로 확인 되었다. SA는 YCWE를 경엽처리 48시간 후 20.29 ${\mu}g/g$으로 가장 높게 나타났으며 관주처리보다 약 3.7배의 높은 SA검출함량을 보였으나 처리 후 72시간부터는 점차적으로 SA함량이 감소하는 양상을 보였다.
Dicyma sp. YCH-37이 생산하는 효모세포벽 용해효소의 성질을 검토한 결과, 각종 환원제와 금속이온에 대체로 안정하였고, guanidine-HCl을 제외한 여러 화학수식제에 대해서도 안정하였다. 배양시간, 전처리 및 배양조건에 따른 영향을 검토한 결과, 정지기 및 사멸기에 있는 효모보다는 대수증식기의 효모, 그리고 생효모에 비해 열처리된 효모가 더 잘 용균되었다. Butanol, acetone 등의 유기용매로 처리된 효모가 그렇지 않은 효모보다 용균도가 좋았으며, 0.5 M ammonium sulfate가 함유된 Yeast extract-Malt extract 배지에서 생육한 효모, 그리고 진탕배양한 효모보다 정치배양한 효모가 용균효소에 의해 더 잘 용균되었다. SDS, Triton X-100, ${\beta}-mercaptoethanol$, potassium chloride, sodium sulfite 등의 화학수식제를 효소반응액에 첨가하였을 때 기질 효모는 더 잘 용균되었다.
Cell lytic enzyme, 5'-phosphodiesterase, and AMP-deaminase were used to produce yeast extract as a natural seasoning from beer yeast cells. Prior to the addition of cell lytic enzyme, heat treatment was performed to increase the cell wall degradation` the optimum condition of the cell lytic enzyme was 50C at pH 7.0. The production yields by the enzymatic method and conventional autolysis method were 42% and 35%, respectively. The total quantity of 5'-nucleotides, GMP and IMP, produced by enzymatic method was increased by 45% than that by the conventional method. Futhermore, the operation time of enzymatic method was only 6.5 hrs, significantly reduced from 24 hrs of the conventional method.
본 연구는 효모의 세포벽에 존재하는 본 연구는 효모의 세포벽에 존재하는 ${\beta}-Glucan$을 대량생산하기 위해 Saccharomyces cerevisiae JUL3의 균체량을 증가시키기 위한 연구를 수행하였다. S. cerevisiae JUL3의 배양학적 특성을 알아보기 위해 kinetic parameter를 조사하였을 때 specific growth rate (${\mu}$)는 $0.145\;h^{-1}$, yield ($Y_{x/s}$)는 0.332 g/g, glucose 소모속도($q_{s}$)는 $0.437\;h^{-1}$이며 productivity (P)는 $0.4827\;g/{\ell}{\cdot}h$을 나타내었다. 균체량이 가장 높게 나타난 탄소원과 질소원은 고과당 (high fructose syrup)과 yeast extract이었다. 효모균체 대량생산 및 scale up을 위하여 반응표면 분석법을 통하여 고과당과 yeast extract에 대한 최적농도를 조사하였다. 균체량이 가장 많이 생산되어질 수 있는 조건으로 제시된 고과당과 yeast extract의 최적 농도는 각각 8.0 %와 5.2 %였으며, 이 때 예측되는 균체량은 $16.95\;g/{\ell}$ 이었다.
효모(Saccharomyces cerevisiae, SC)의 구성성분인 yeast cell-extract(YE)과 yeast cell-wall(CW)이 육계의 생산성, 장내융모 발달 및 혈청 콜레스테롤에 어떠한 영향을 미치는지 알아보고자 사양실험을 실시하였다. 육용 수평아리(Ross) 240수를 4처리 6반복, 반복당 10수를 공시하였다. 옥수수 및 대두박 위주 기본사료에 SC, YE 그리고 CW를 각각 0.5, 0.25 그리고 $0.25\%$로 첨가한 실험사료를 제조하여 육계에 5간 급여하였다. 효모의 급여는 육계의 생산성에 어떠한 영향을 미치지 못하였으며, villus height, crypt depth 및 villus:crypt ratio 역시 처리간 유의성은 발견되지 않았다. SC 급여 받은 육계의 혈청 콜레스테롤은 대조구에 비하여 $19.7\%$ 감소(P<0.05)를 나타내었다. 특히, 효모성분 중 YE가 혈청 콜레스테롤을 유의적으로 낮추었다(P<0.05). 결론적으로 사료내 효모의 첨가는 육계의 혈청 콜레스테롤을 유의적으로 감소시켰으며(P<0.05), 콜레스테롤을 감소시키는 성분은 효모의 세포내용물에 포함되어 있는 것으로 본 연구결과 알 수 있었다.
Ferulic acid esterase (FAE) and acetyl esterase (AE) cleave feruloyl groups substituted at the 5'-OH group of arabinosyl residues and acetyl groups substituted at O-2/O-3 of the xylan backbone, respectively, of arabinoxylans in the cell wall of grasses. In this study, the enzyme profiles of FAE, AE and polysaccharide hydrolases of the anaerobic rumen fungus Neocallimastix sp. YQ1 grown on Chinese wildrye grass hay (CW) or alfalfa hay (AH) were investigated by two $2{\times}4$ factorial experiments, each in 10-day pure cultures. The treatments consisted of two glucose levels ($G^+$: glucose at 1.0 g/L, $G^-$: no glucose) and four N sources (N1: 1.0 g/L yeast extract, 1.0 g/L tryptone and 0.5 g/L $(NH_4)_2SO_4$; N2: 2.8 g/L yeast extract and 0.5 g/L $(NH_4)_2SO_4$; N3: 1.6 g/L tryptone and 0.5 g/L $(NH_4)_2SO_4$; N4: 1.4 g/L tryptone and 1.7 g/L yeast extract) in defined media. The optimal combinations of glucose level and N source for the fungus on CW, instead of AH, were $G^-N4$ and $G^-N3$ for maximum production of FAE and AE, respectively. Xylanase activity peaked on day 4 and day 6 for the fungus grown on CW and AH, respectively. The activities of esterases were positively correlated with those of xylanase and carboxymethyl cellulase. The fungus grown on CW exhibited a greater volatile fatty acid production than on AH with a greater release of ferulic acid from plant cell wall.
아가리쿠스(Agaricus blazei)버섯의 균사체 배양조건을 최적화하여 유효성분인 $\beta$-glucan의 생성을 극대화시키고자 하였다. 아가리쿠스 균사체 배양시 탄소원과 질소원의 농도 및 종류별 배지를 검토한 결과 배지조성은 glucose 5% (w/v), yeast extract 0.5% (w/v), malt extract 0.5% (w/v), $KH_2PO_4$ 0.1% (w/v), $MgSO_4{\cdot}7H_2O$ 0.05% (w/v)가 최적이었다. 30L 발효조에서의 배양 조건은 pH 5.0, $28^{\circ}C$, 1 vvm, 300 rpm에서 균사체의 생육과 $\beta$-glucan의 생성이 가장 효과적이었다. 위 조건 중에서 세포 외 $\beta$-glucan의 생성을 증가시 키기 위해 초기 glucose의 첨가량을 4%로 낮추어 glucose에 의한 균사체 성장 저해작용을 최소화하는 한편, 배양 70시간 시점에 glucose 3%, yeast extract 0.1%, malt extract 0.1%의 추가 배지를 첨가하여 배양함으로써 batch 배양에 의한 2.8 g/L에 비해 2배 정도 증가한 5.2 g/L의 세포 외 $\beta$-glucan을 얻을 수 있었다. 또한 균사체 내의 세포벽 $\beta$-glucan을 효과적으로 추출하기 위해 세포벽분해효소인 lytic enzyme과 단백분해효소인 bromelain의 연속적인 효소반응으로 추출량이 3.5 g/L로 증가하여 균사체의 단순 열수추출에 비해 약 4배의 추출 수율이 향상되었다.
B. macerans 유래의 CGTase를 yeast surface display기술을 이용하여 S. cerevisiae의 표면에 발현된 것을 halo-test와 immunofluorescence microscopy와 flow cytometry를 통하여 확인하였다. 재조합 효모는 효소의 cyclization작용을 저해하고 CD의 분해작용을 촉진하는 glucose와 maltose를 제거하는 발효공정과 표면 발현된 CGTase의 cyclization 공정을 동시에 수행할 수 있어 CD의 생산, 분리공정을 효율적으로 개선하였다.
Streptococcus mutans has the capacity of inducing dental caries. Thus, to develop a novel way of preventing dental caries, a cell wall hydrolase-producing strain was isolated and its characteristics were investigated. Among 200 alkalophilic strains isolated from soil, 8 strains exhibited lytic activities against Streptococcus mutans. However, strain YU5215 with the highest cell wall hydrolase activity was selected for further study. Strain YU5215 was identified as a novel strain of Bacillus based on analyzing its 16S rDNA sequence and Bergey's Manual of Systematic Bacteriology, and thus designated as Bacillus mutanolyticus YU5215. The optimal conditions for the production of the cell wall hydrolase from Bacillus mutanolyticus YU5215 consisted of glucose ($0.8\%$), yeast extract ($1.2\%$), polypeptone ($0.5\%$), $K_{2}HPO_{4}\;(0.1\%$), $MgSO_{4}{\cdot}7H_{2}O$ ($0.02\%$), and $Na_{2}CO_{3}\;(1.0\%$) at pH 10.0. Bacillus mutanolyticus YU5215 was cultured at 30^{circ}C for 72 h to produce the cell wall hydrolase, which was then purified by acetone precipitation and CM-agarose column chromatography. The molecular weight of the lytic enzyme was determined as 22,700 Da by SDS-PAGE. When the cell wall peptidoglycan of Streptococcus mutans was digested with the lytic enzyme, no increase in the reducing sugars was observed, while the free amino acids increased, indicating that the lytic enzyme had an endopeptidase-like property. The amino terminus of the cell wall peptidoglycan digested by the lytic enzyme was determined as a glutamic acid, while the lytic site of the lytic enzyme in the Streptococcus mutans peptidoglycan was identified as the peptide linkage of L-Ala and D-Glu.
정미성이 높은 효모 추출물을 얻고자 각종 효소의 사용에 대한 최적 조합 및 공정법을 알아보기 위하여 맥주 폐효모박을 각종 효소로 처리하여 효모추출물 중의 정미성분(IMP, GMP 및 유리아미노산)을 측정하여 비교, 분석하였다. Glucanase(0.5%) 처리에 의한 효모추출물중의 조단백질 함량은 33.6% 이었다. Tunicase(1%) 28.0% 와 무처리구 21.1%에 비해 최고 1.6배의 증가를 보였다. 단백질 분해효소처리에 의한 조단백질의 함량은 bromelin(1%), protamex(1%) 처리에서 각각 30.8%, 29.8%로 무처리구에 비해 최고 1.4배의 증가를 보였다. 효소 복합처리에 의한 상승효과는 glucanase(0.5%)+protamex(1%) 처리구에서 조단백질의 함량이 34.4%로 나타나 glucanase 단독처리구의 33.6%보다 높은 함량을 나타냈다. IMP+GMP 총함량은 glucanase + phophodiesterase + adenyldeaminase (G+P+A) 혼합 처리구에서 1,066 mg/100 g, glucanase + ptotamex + phophodiesterase + adenyldeaminase (G+Pro+P+A) 혼합 처리구에서는 1,047 mg/100 g으로 비슷하였다. 유리아미노산의 함량은 protamex가 첨가된 G+Pro+P+A 혼합처리구에서 2,302 mg/100 g으로 가장 높게 나타났다. 따라서 IMP, GMP 및 유리아미노산의 함량을 모두 고려해 볼 때 세포벽 분해효소 (gulcanase 0.5%, 12시간), 단백질 분해효소 (protamex 1%, 3시간), 핵산 분해효소 (phosphodiesterase 0.1%, 3시간) 및 핵산 전이효소 (adenyldeaminase 1%, 1.5시간)를 순차적으로 적용시켜 가수분해시키는 것이 효모 추출물의 정미성을 높이는 최적의 효소 복합 사용공정으로 판단되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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