• Asian Pacific Journal of Cancer Prevention
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• 제15권8호
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• pp.3495-3501
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• 2014

Melanoma-associated antigen (MAGE) family genes have been considered as potentially promising targets for anticancer immunotherapy. MAGED4 was originally identified as a glioma-specific antigen. Current knowledge about MAGED4 expression in glioma is only based on mRNA analysis and MAGED4 protein expression has not been elucidated. In the present study, we investigated this point and found that MAGED4 mRNA and protein were absent or very lowly expressed in various normal tissues and glioma cell line SHG44, but overexpressed in glioma cell lines A172,U251,U87-MG as well as glioma tissues, with significant heterogeneity. Furthermore, MAGED4 protein expression was positively correlated with the glioma type and grade. We also found that the expression of MAGED4 inversely correlated with the overall methylation status of the MAGED4 promoter CpG island. Furthermore, when SHG44 and A172 with higher methylation were treated with the DNA demethylating agent 5-aza-2'-deoxycytidine (5-AZA-CdR) reactivation of MAGED4 mRNA was mediated by significant demethylation in SHG44 instead of A172. However, 5-AZA-CdR treatment had no effect on MAGED4 protein in both SHG44 and A172 cells. In conclusion, MAGED4 is frequently and highly expressed in glioma and is partly regulated by DNA methylation. The results suggest that MAGED4 might be a promising target for glioma immunotherapy combined with 5-AZA-CdR to enhance its expression and eliminate intratumor heterogeneity.

• Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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• 제33권11호
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• pp.1824-1836
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• 2020

Objective: On the hypothesis that grazing of cattle prompts organs to secrete or internalize circulating microRNAs (c-miRNAs) in parallel with changes in energy metabolism, we aimed to clarify biological events in adipose, skeletal muscle, and liver tissues in grazing Japanese Shorthorn (JSH) steers by a transcriptomic approach. Methods: The subcutaneous fat (SCF), biceps femoris muscle (BFM), and liver in JSH steers after three months of grazing or housing were analyzed using microarray and quantitative polymerase chain reaction (qPCR), followed by gene ontology (GO) and functional annotation analyses. Results: The results of transcriptomics indicated that SCF was highly responsive to grazing compared to BFM and liver tissues. The 'Exosome', 'Carbohydrate metabolism' and 'Lipid metabolism' were extracted as the relevant GO terms in SCF and BFM, and/or liver from the >1.5-fold-altered mRNAs in grazing steers. The qPCR analyses showed a trend of upregulated gene expression related to exosome secretion and internalization (charged multivesicular body protein 4A, vacuolar protein sorting-associated protein 4B, vesicle associated membrane protein 7, caveolin 1) in the BFM and SCF, as well as upregulation of lipolysis-associated mRNAs (carnitine palmitoyltransferase 1A, hormone-sensitive lipase, perilipin 1, adipose triglyceride lipase, fatty acid binding protein 4) and most of the microRNAs (miRNAs) in SCF. Moreover, gene expression related to fatty acid uptake and inter-organ signaling (solute carrier family 27 member 4 and angiopoietin-like 4) was upregulated in BFM, suggesting activation of SCF-BFM organ crosstalk for energy metabolism. Meanwhile, expression of plasma exosomal miR-16a, miR-19b, miR-21-5p, and miR-142-5p was reduced. According to bioinformatic analyses, the c-miRNA target genes are associated with the terms 'Endosome', 'Caveola', 'Endocytosis', 'Carbohydrate metabolism', and with pathways related to environmental information processing and the endocrine system. Conclusion: Exosome and fatty acid metabolism-related gene expression was altered in SCF of grazing cattle, which could be regulated by miRNA such as miR-142-5p. These changes occurred coordinately in both the SCF and BFM, suggesting involvement of exosome in the SCF-BFM organ crosstalk to modulate energy metabolism.

• Asian Pacific Journal of Cancer Prevention
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• 제13권5호
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• pp.1943-1948
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• 2012

Introduction: Prostate cancer in Indonesia is the $3^{rd}$ ranking cancer among males and the $5^{th}$ rank for their cancer mortality. Prognostic markers that can identify aggressive prostate cancer in early stages and help select appropriate therapy to finally reduce the mortality are therefore urgently needed. It has been suggested that stem cells in the prostate gland have a role in initiation, progression, and metastasis of cancer, although controversy continues to exist. Maintenance of normal stem cell or reserve cell populations in several epithelia including prostate has been shown to be regulated by p63 and alteration of p63 expression is considered to have an oncogenic role in prostate cancer. We hypothesize that the expression of cytoplasmic aberrance of p63 is associated with high ALDH1A1 expression as a cancer stem cell marker, thus leading to progression of prostate cancer. Methods: Using a cross-sectional study during two years (2009-2010), a total of 79 paraffin embedded tissues of benign prostatic hyperplasia, PIN prostatic intraepithelial neoplasia, low and high Gleason score prostate cancer were investigated using immunohistochemistry. Associations between cytoplasmic p63 and ALDH1A1, as well as with pathological diagnosis, were analyzed by Chi-Square test using SPSS 15.0. Links of both markers with cell proliferation rate (KI-67) and apoptotic rate (cleaved caspase 3) were also analyzed by Kruskal-Wallis test. Results: The mean age of patient at the diagnosis is 70.0 years. Cytoplasmic aberrance of p63 was associated with ALDH1A1 expression (p<0.001) and both were found to have significant relationships with pathological diagnosis (including Gleason score), (p=0.006 and p<0.001 respectively). Moreover, it was also found that higher levels of cytoplasmic p63 were significantly associated with the frequency of proliferating cells and cells undergoing apoptosis in prostate cancers (p=0.001 and p=0.016 respectively). Conclusion: p63 cytoplasmic aberrance is associated with high ALDH1A1 expression. These components are suggested to have an important role in prostate cancer progression and may be used as molecular markers.

• Asian Pacific Journal of Cancer Prevention
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• 제15권2호
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• pp.871-876
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• 2014

Objective: Desmogleins (DSGs) are major members among the desmosomal cadherins critically involved in cell-cell adhesion and the maintenance of normal tissue architecture in epithelia. Reports exploring links of DSG family member expression with cancers are few and vary. The aim of this study was to investigate the ratio of DSG2 and DSG3 mRNA expression in esophageal squamous cell carcinoma (ESCC) tissue to normal tissue (T/N ratio) and evaluate correlations with clinical parameters. Methods: The mRNA expression of DSGs, as well as ${\gamma}$-catenin and desmoplakin, was detected by real-time quantitative RT-PCR in 85 cases of ESCC tissue specimens. Results: The expression level of DSG3 mRNA was significantly higher than that of DSG2 in ESCC specimens (p=0.000). DSG3 mRNA expression highly correlated with histological grade (p=0.009), whereas that of DSG2 did not significantly relate to any clinicopathologic parameter. Kaplan-Meier survival analysis showed that only DSG3 expression had an impact on the survival curve, with negative DSG3 expression indicating worse survival (p=0.038). Multivariate Cox regression analysis demonstrated DSG3 to be an independent prognostic factor for survival. Furthermore, correlation analysis demonstrated the mRNA level of DSG3 to highly correlate with those of ${\gamma}$-catenin and desmoplakin in ESCC samples (p=0.000), implying that the expression of desmosomal components might be regulated by the same upstream regulatory molecules. Conclusions: Our findings suggest that DSG3 may be involved in the progression of ESCC and serve as a prognostic marker, while expression of DSG2 cannot be used as a predictor of ESCC patient outcome.

• 유기물자원화
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• 제8권4호
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• pp.129-137
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• 2000

본 연구에서는 도시고함수율 유기성폐기물(MWWT)의 처리를 위하여, 음식물 쓰레기의 처리에 사용되었던 컨테이너 호기성 퇴비화 시스템과, 계분 및 축분처리에 사용되었던 직립 상향 기계식 교반기를 조합하여 개발하였다. 호기성 처리 공정은 운전이 쉽다는 점과 운전비용이 저렴하다는 점, 자연에서 이용하기 가장 편리한 안정된 부산물을 만들 수 있다는 장점에도 불구하고, 염분의 농축, 과도한 부형제의 사용에 의한 경제적 부담의 증가 및 설비의 대형화 등의 장애물을 가지고 있다. 개발된 공정은 이러한 문제점을 보완하고자 하수슬러지는 초기의 수분조절 및 고속발효를 위해 직립 밀폐형 반응조에서 5일간, 음식물쓰레기는 탈염과 수분조절을 위해 밀폐형 무교반 필터에서, 침출수는 폐수처리 장치에서 처리하였다. 실험결과 국내 퇴비에 품질규격을 만족하면서 부자재의 사용량을 3% 이내로 조절할 수 있어 기존공정의 문제점을 해결할 수 있는 가능성을 확인하였다.

• Nutrition Research and Practice
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• 제4권5호
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• pp.351-355
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• 2010

Our previous proteomic study demonstrated that oxidative stress and antioxidant delphinidin regulated the cellular level of $p27^{kip1}$ (referred to as p27) as well as some heat shock proteins in human colon cancer HT 29 cells. Current study was conducted to validate and confirm the regulation of these proteins using both in vitro and in vivo systems. The level of p27 was decreased by hydrogen peroxide in a dose-dependent manner in human colon carcinoma HCT 116 (p53-positive) cells while it was increased upon exposure to hydrogen peroxide in HT 29 (p53-negative) cells. However, high concentration of hydrogen peroxide (100 ${\mu}M)$ downregulated p27 in both cell lines, but delphindin, one of antioxidative anthocyanins, enhanced the level of p27 suppressed by 100 ${\mu}M$ hydrogen peroxide. ICR mice were injected with varying concentrations of hydrogen peroxide, delphinidin and both. Western blot analysis for the mouse large intestinal tissue showed that the expression of p27 was upregulated by 25 mg/kg BW hydrogen peroxide. To investigate the association of p27 regulation with hypoxia-inducible factor 1-beta (HIF-$1{\beta}$), the level of p27 was analyzed in wild-type mouse hepatoma hepa1c1c7 and Aryl Hydrocarbon Nuclear Translocator (arnt, HIF-$1{\beta}$)-defective mutant BPRc1 cells in the absence and presence of hydrogen peroxide and delphinidin. While the level of p27 was responsive to hydrogen peroxide and delphinidin, it remained unchanged in BPRc1, suggesting that the regulation of p27 requires functional HIF-$1{\beta}$. We also found that hydrogen peroxide and delphinidin affected PI3K/Akt/mTOR signaling pathway which is one of upstream regulators of HIFs. In conclusion, hydrogen peroxide and antioxidant delphinidin seem to regulate intracellular level of p27 through regulating HIF-1 level which is, in turn, governed by its upstream regulators comprising of PI3K/Akt/mTOR signaling pathway. The results should also encourage further study for the potential of p27 as a biomarker for intracellular oxidative or antioxidant status.

• 한국산학기술학회논문지
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• 제20권12호
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• pp.298-305
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• 2019

꾸지뽕나무 뿌리 추출물은 항염, 항암, 항산화와 같은 효과를 갖는 많은 생리활성 물질을 포함하고 있다고 알려져 있다. 그러나 꾸지뽕나무 뿌리 추출물(이하 CTE)의 사람 혈소판 응집 억제 기전에 관하여는 알려진 바 없다. 본 연구에서는 CTE가 혈소판에 미치는 영향을 확인하고자 하였다. CTE는 collagen으로 유도한 혈소판 응집 반응에서 cyclooxygenase-1 활성을 억제하고, 세포 내 칼슘 농도를 낮추는 방식으로 thromboxane A₂ 생성을 억제하였다. 또한, phospholipase Cγ2와 syk의 인산화 반응을 억제하였으며, guanosine monophosphate (cGMP)에 의존적인 방식으로 vasodilator-stimulated phosphoprotein(VASP)의 Ser²³⁹ 위치를 인산화하여 항혈소판 효과를 나타내었다. 또한, 고지방 식이로 혈소판 활성화를 유도한 랫드에서 CTE를 경구 투여 하였을 때, 간독성 없이 콜라겐으로 유도한 혈소판 응집반응을 thromboxane A₂ 생성을 억제함으로써 항혈소판 효과를 보였다. 이는 in vivo와 in vitro에서 같은 결과를 제시하고 있다. 결론적으로, CTE는 항혈소판 작용 및 심혈관계 질환 예방을 위한 천연물 유래의 안전하고, 새로운 물질임을 제시하는 바이다.

• Journal of Plant Biotechnology
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• 제38권1호
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• pp.87-93
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• 2011

SAMDC는 폴리아민 생합성 과정에서 주효소로 작용하며 항상성을 유지하기위해 정교하게 조절된다. 카네이션 SAMDC 유전자는 5'-leader sequence에 54개 아미노산으로 구성된 small uORF가 존재한다. Translation 과정을 조절하는 uORF의 작용기작을 연구하기 위하여 35S 프로모터에 SAMDC 유전자의 uORF 부위와 GUS 유전자를 재조합한 형질전환 담배 식물체를 이용하였다. 본 실험에서는 SAMDC uORF 염기서열 혹은 SAMDC uORF 단백질에 의해서 downstream GUS ORF의 translation이 억제되었다. 특히 translation 억제는 개시코돈이 point-mutation된 construct에서 효과적으로 이루어졌다. 따라서 이러한 결과는 ribosomal stalling이 translation 억제 과정에 관여한 것으로 사료된다. 개시 코돈과 종결코돈을 가진 SAMDC uORF의 아미노산 서열을 frame shift 시키면 GUS 활성이 증가하였는데 이는 translation inhibitor로서 작용할 때 아미노산 서열이 중요하다는 것을 의미하며, 결국은 SAMDC uORF의 단백질 구조가 중요하게 작용할 가능성을 제시한다. 또한 유식물과 담배 꽃 등의 in vivo 상에서도 GUS 발현을 조직화학적으로 분석했을 때 small uORF가 존재할 경우 GUS 염색이 크게 저하되었지만, 개시코돈이나 혹은 종결코돈이 제거되도록 point-mutation 시킨 construct가 도입된 형질전환식물체에서는 SAMDC uORF의 억제효과가 크게 완화 되었다. 또한 가장 중요한 관찰 결과로는 small uORF 염기서열로부터 in vitro 시스템에서 5.7 kDa의 단백질이 실제적으로 합성되었음을 관찰하였다. 폴리아민 처리 후 GUS 단백질이 억제된 결과는 uORF로부터 합성된 단백질이 폴리아민 뿐 만 아니라 translation 과정에 관여하는 다른 요소들과 상호작용을 이루어 조절될 수 있음을 암시한다.

• Nuclear Medicine and Molecular Imaging
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• 제41권5호
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• pp.343-349
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• 2007

방사성옥소는 갑상선암의 핵의학적 영상과 방사성치료에 널리 그리고 성공적으로 사용되어 왔다. 최근 세포의 옥소섭취를 담당하는 운반체로서 Na/I symporter (NIS)의 분자세포학적 특성이 규명되고 그 유전자가 클로닝되면서 앞으로는 갑상선암 이외의 각종 암에도 NIS 유전자를 외부에서 전달함으로써 방사성옥소 치료를 적용하는 새로운 암치료 기술이 가능할 것으로 기대되고 있다. 방사성옥소를 이용한 암치료의 성공을 위해서는 NIS를 통한 표적세포의 옥소 섭취를 극대화 시키는 것이 핵심이다. TSH는 갑상선 세포의 NIS 발현을 항진시키고 retinoic acid는 갑상선암과 유방암 세포의 NIS발현을 증가시키는 효과가 있다. 또 일반 암세포에는 NIS 유전자를 전달하여 발현 시킬 수 있다. 그러나 NIS 발현 만으로는 원하는 수준의 방사성옥소 섭취를 충분히 얻지 못할 수 있다. 이는 세포의 옥소 섭취가 NIS 단백질의 총량이 아니라 세포막에 위치한 NIS의 양에 의해 결정되기 때문이다. 즉, 옥소를 섭취하려는 전사된 NIS단백질이 세포막으로 이동하여 정상적으로 기능하게 하는 조절 기전이 중요하다. NIS의 세포막 이동 기전은 아직 밝혀져 있지 않으나 다른 운반체와 유사하게 단백질의 전사후 glycosylation이나 phosphorylation이 관여할 것으로 생각된다. 본 연구진은 NIS 유전자를 전달한 암세포에서epidermal growth factor를 통한 extracellular signal regulated kinase 신호경로의 활성화가 방사성옥소 섭취를 항진시킴을 관찰하여 NIS의 전사외 기능조절 기전을 조사하고 있다. 앞으로 NIS기능에 대한 조절기전이 보다 자세하게 밝혀지면 방사성옥소 치료기술과 NIS유전자 영상기술의 개선과 발전에 도움이 될 것으로 기대된다.

• 생명과학회지
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• 제25권1호
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• pp.1-7
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• 2015

칼슘 의존적으로 활성화되는 neutral protease calpain에 의한 단백질 분해는 세포의 성장을 조절하는데 중요한 단백질들의 역할에 매우 중요한 역할을 한다. Cyclin의 분해는 세포주기의 진행을 위한 필연적인 과정이다. D-type cyclins는 외부자극이나 신호에 의하여 세포주기의 G1 초기에 합성이 된 후 cyclin-dependent kinases (cdk4 및 cdk6)와의 결합하여 세포주기 S기 진입을 촉진하는 역할을 한다. 본 연구에서는 cyclin D3 단백질이 calpain protease에 의하여 번역 후 수준에서 조절 받고 있음을 제시하였다. 본 실험의 조건에서 lovastatin과 actinomycin D가 처리된 PC-3-M 전립선 암세포에서 cyclin D3 단백질의 발현이 완전히 사라졌지만, calpain inhibitor인 LLnL의 처리에 의하여 정상 수준으로 회복되었음을 알 수 있었다. 그러나 26S proteasome의 선택적 억제제인 lactacystin, lysosome 억제제인 ammonium chloride 및 chloroquine, serine protease 억제제인 PMSF는 동일 조건에서 lovastatin과 actinomycin D 처리에 의한 cyclin D3 단백질의 발현저하를 억제하지는 못하였다. In vitro 조건에서 순수 분리된 calpain은 cyclin D3 단백질을 칼슘 농도 의존적으로 분해하였으며, cyclin D3 단백질의 반감기는 LLnL 처리에 의하여 매우 유의적으로 증가되었다. 또한 calpain 저해인자인 calpastatin의 과발현은 PC-3-M 세포에서 뿐만 아니라 NIH 3T3 섬유아세포에서도 cyclin D3 단백질의 반감기 및 안전성을 증대시켰다. 이러한 결과는 cyclin D3 단백질이 칼슘에 의해 활성화 되는 protease calpain에 의해 조절됨을 보여주는 것이다.