박과는 스쿼시, 호박, 애호박, 조롱박, 오이 및 수박 등 100여 속이 넘는 속이 포함된 식물과이며, 종자의 수입량이 매우 많은 작물이다. 이들이 우리나라로 수입될 때, 규제바이러스인 Squash mosaic virus (SqMV), Cucumber green mottle mosaic virus (CGMMV) 및 Kyuri green mottle mosaic virus (KGMMV)에 대하여 검역을 수행한다. 본 연구에서는 SqMV, CGMMV 및 KGMMV를 신속·높은 감도로 검출할 수 있는 특이적 RT-PCR 및 nested PCR 프라이머 조합과 유전자변형-양성대조구 플라스미드를 개발하였다. 또한 본 연구에서 개발한 진단시스템을 2010년부터 2014년 상반기까지 현장적용하여, SqMV 47건, CGMMV 67건 및 KGMMV 17건을 검출하였다.
인삼은 우리나라에서 가장 대중화된 한약 재료로 사용되고 있다. 최근 인삼 잎에 얼룩덜룩하거나 모자이크 증상이 나타나는 바이러스병으로 인삼을 재배하는 많은 농가들에서 수량 손실을 초래하고 있다. 수박모자이크바이러스(WMV-gin로 명명)가 인삼 바이러스병의 원인으로 동정되었다. 흥미롭게도 인공적 즙액 접종에 의해서, 인삼에서 분리한 WMV-gin은 건전 인삼 식물체와 박과작물을 포함한 알려진 WMV 기주 식물 종들을 감염시킬 수 없었다. 그러나 WMV-gin은 2종의 진딧물들(복숭아혹진딧물과 목화진딧물)의 전반에 의해서 인삼을 성공적으로 감염시킬 수 있었다. 비록 2종의 진딧물들이 인삼에서 먹이를 얻는 것을 기피하지만, 이것은 진딧물들이 먹이 탐색 과정동안 인삼에 WMV-gin을 매개하는 것으로 사료된다. 유사하게 수박에서 분리한 WMV-wm 계통은 2종의 진딧물들에 의하여 인삼으로 매개되지만 인위적 즙액 접종으로 인삼을 감염시키지 못하였다. 복숭아혹진딧물과 목화진딧물을 이용한 전반 실험들에 의해서 WMV-gin과 WMV-wm 계통들 모두 인삼에서 WMV의 증식 기주 식물들인 박과 식물들로 전반되지 못함이 밝혀졌다. 이런 결과들은 인삼에서 발생하는 WMV병이 생태학적 접근법에 의해서 방제될 수 있음을 제시해 준다.
In order to cultivate watermelon on farm, grafting of the watermelon seedling to the watermelon stock is necessary because the watermelon root is less viable than the root of watermelon stock. Recently, commercially important watermelon varieties further require a resistant stock against especially CGMMV to control the heavy loss of the total yield of watermelon by CGMMV infection. Therefore, we have set out a project to develop a CGNEMV-resistant watermelon stock. We have successfully transformed dozens of watermelon stocks (gongdae) during last two years especially using a cDNA encoding the coat protein of CGMMV (cucumber green mottle mosaic virus). Recently we have tested levels of resistance of those watermelon stocks against CGMMV infection. For CGMMV inoculation, the leaves of one month old gongdae (T1) were rubbed by carborundum mixed with the CGMMV. A total of 140 plants (T1) were exposed to the CGMMV and we found that ten plants were completely resistant to virus infection. This is the first report that by genetic engineering a cucubitaceae crop resistant to CGMMV infection is ever developed. Further information will be provided in the poster.
경상북도 오이 주산단지인 상주와 군위지역의 바이러스 병 발생을 조사한 결과 포장 발생율은 $55.0{\sim}88.6%$였으며, 상주지역이 군위보다 약간 높게 나타났다. 바이러스 발병 포장의 이병주율은 2006년 상주 지역에서 평균 25.6%로 매우 높게 나타났으며, 발생범위는 최소 1.5%에서 최대 90%로 농가별로 편차가 매우 심하였다. 포장에서 바이러스 증상으로 관찰되는 시료 217점을 RT-PCR을 이용하여 바이러스 종류를 분석한 결과 ZYMV가 85% 이상으로 가장 많이 검출되어 오이에 피해를 주는 주요 바이러스로 나타났다. ZYMV에 감염된 오이는 잎에 황화 및 심한 모자이크 증상이 나타났으며 일부 과일은 곡과 증상과 함께 표면이 울퉁불퉁하게 나타났다.
오이 주요재배지인 상주와 구례에서 오이에 발생하는 바이러스병을 2006년과 2007년에 조사하였다. 경상북도 상주 지역 오이의 병징 발생률은 농가 포장에 따라서 14%에서 90%이었으며 평균 발생률은 46%이었다. 전라남도 구례 지역의 경우 농가 포장에 따라서 9%에서 100%이었으며 평균 발병률은 48%이었다. 주요 발생 바이러스는 CGMMV, ZYMV, PRSV와 WMV2의 4종류였다. 이러한 바이러스는 단독감염과 복합감염 형태로 발생하였다. 2006년과 2007년의 평균 감염률을 보면 단독감염의 경우 ZYMV가 23.5%로 가장 많이 발생하고 있었으며, PRSV가 13.0%, CGMMV가 9.0%, WMV2가 2.0% 순서이었다. 복합감염의 경우에는 2종 바이러스 복합감염이 31.5%, 3종 복합감염이 7.5%, 4종 복합감염이 2.0% 발생하였다. 오이에 발생하고 있는 바이러스 감염형태는 단독감염과 2종 복합감염이 각각 47.7%와 31.5%로 총 88.7%로 대부분을 차지하였다. 오이에 발생한 바이러스의 복합감염으로 많이 발생되는 바이러스로는 ZYMV, CGMMV, PRSV, BBWV2의 순서이었다. 단독감염된 오이의 병징은 다다기 계통이나 취청 계통 오이 모두 비슷한 병징이 나타났으나, CGMMV의 경우 퇴록 반점, 엽맥 퇴록, 엽맥 쭈그러짐 등 매우 다양한 병징이 나타났다. ZYMV는 엽맥 퇴록 병징을 위주로 심한 모자이크 및 기형 병징이 나타났다. 그 이외의 PRSV, WMV-2의 병징은 CGMMV와 ZYMV에 의한 병징에 속하는 비교적 약한 병징이었다.
Efforts to control viral diseases in crop production include several types of physical or chemical treatments; antiviral extracts of a number of plants have also been examined to inhibit plant viral infection. However, treatments utilizing naturally selected microorganisms with activity against plant viruses are poorly documented. Here we report isolation of a soil inhabiting bacterium, Pseudomonas oleovorans strain KBPF-004 (developmental code KNF2016) which showed antiviral activity against mechanical transmission of tobamoviruses. Antiviral activity was also evaluated in seed transmission of two tobamoviruses, Pepper mild mottle virus (PMMoV) and Cucumber green mottle mosaic virus (CGMMV), by treatment of seed collected from infected pepper and watermelon, respectively. Pepper and watermelon seeds were treated with culture supernatant of P. oleovorans strain KBPF-004 or control strain ATCC 8062 before planting. Seeds germinated after treatment with water or ATCC 8062 yielded about 60% CGMMV or PMMoV positive plants, whereas < 20% of KBPF-004-treated seeds were virus-infected, a significantly reduced seed transmission rate. Furthermore, supernatant of P. oleovorans strain KBPF-004 remodeled aggregation of PMMoV 126 kDa protein and subcellular localization of movement protein in Nicotiana benthamiana, diminishing aggregation of the 126 kDa protein and essentially abolishing association of the movement protein with the microtubule network. In leaves agroinfiltrated with constructs expressing the coat protein (CP) of either PMMoV or CGMMV, less full-size CP was detected in the presence of supernatant of P. oleovorans strain KBPF-004. These changes may contribute to the antiviral effects of P. oleovorans strain KBPF-004.
CGMMV는 한국에서 수박의 주요 병원균이고, 수박 생산에 심각한 영향을 미친다. 이 연구에서는 박 종자의 CGMMV를 RT-PCR을 이용하여 신속하고 민감하게 검정하는 진단방법을 개발하였다. CGMMV-W의 외피 단백질 유전자 sequence에서 제작된 CGMMV에 특이적인 primer인 Wmfl과 Wmrl은 RT-PCR에 의해 420 bp의 증폭산물을 증폭하였다. RT-PCR에 의한 진단을 위하여 바이러스 추출과정을 간소화하고 종자 추출물의 반응 억제물질을 감소시키기 위해 ethanol 침전, double filtration, PEG 침전, phenol/chloroform/isoamyl alcohol에 의한 추출법을 비교하였으며 phenol/chloroform/isoamyl alcohol에 의 한 추출법이 민감성이 강한 방법으로 선발되었다. RT-PCR을 위해 선발된 primer들과 추출법은 1,000립의 건전 종자에 1립의 이병 종자를 혼합한 수준까지 판별이 가능하였다. 신속하고 민감한 RT-PCR에 의한 본 검정방법은 높은 반응 억제물질을 함유하는 박 종자에서 CGMMV의 특이적인 진단을 위해 유용한 방법이다.
오이녹반모자이크바이러스(Cucumber green mottle mosaic virus; CGMMV)는 박과작물에 병을 일으키는 중요한 바이러스로 종자 및 토양전염을 하는 것으로 알려져 있다. 본 연구는 CGMMV의 토양전염 생태를 구명하고, 직접적인 화학적 방제방법이 없는 식물 바이러스의 특성을 고려하여 윤작이나 포장위생 등 경종적 방제법을 이용한 CGMMV의 방제전략에 대하여 고찰하였다. CGMMV는 기주식물이 없는 토양에서 17개월 동안 50% 정도의 활성을 유지하였으며, 토양 내에 존재하는 식물의 잔재물 속에서도 1년 이상 높은 활성을 유지하였다. 자연적인 상태에서 CGMMV의 토양전염율은 1.0~3.6%인 데 반해, 수박묘를 정식할 때 뿌리에 상처를 내어 정식한 결과 토양전염율이 12~36%로 증가하여 뿌리의 상처가 CGMMV의 토양전염에 크게 관여함을 알 수 있었다. 수박재배시 작부제계에 따른 CGMMV의 후대감염율을 분석한 결과 2000년에는 답전윤환지 7.3%, 연작지 76.8%, 2001년의 경우 답전유환지 6.1%, 연작지 50.2%로 답전윤환에 의한 윤작이 CGMMV의 피해경감에 효과가 있음을 알 수 있었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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