Kim, You-Jin;Koo, Byoung-Mo;Ryu, Yang-Kyun;Park, Soon-Jung;Lee, Kyu-Ho;Seok, Yeong-Jae
한국미생물학회:학술대회논문집
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한국미생물학회 2006년도 International Meeting of the Microbiological Society of Korea
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pp.29-31
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2006
In a previous report, we showed that enzyme $IIA^{Glc}(EIIA^{Glc}$ of Escherichia coli phosphotransferase system (PTS) interacts with and regulates activity of FrsA (fermentation/respiration switch protein). A BLAST search revealed that orthologs of FrsA exist only in some Gram-negative bacteria such as E. coli, Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Yersinia pestis, Vibrio cholerae, Vibrio vulnificus, Vibrio parahemeolyticus, and Photorhabdus luminescens and all of these species are facultative anaerobes belonging to the ${\gamma}-proteobacterial$ group, and most of them are highly pathogenic. Ligand-fishing experiments using $EIIA^{Glc}$ of Vibrio vulnificus ($vEIIA^{Glc}$) as bait revealed that $vEIIA^{Glc}$ also interacts with vFrsA in a phosphorylation state-dependent manner. The frsA mutant of Vibrio vulnificus showed remarkably reduced cytotoxicity to HeLa cells and reduced lethality to mice compared to wild type. Comparison of extracellular proteomes between the mutant and wild type indicated that hemolysin was not produced in the frsA mutant. Characterization of another protein interacting with $vEIIA^{Glc}$ will be discussed.
우수한 생균제를 개발하기 위하여 안전성이 알려진 유산균을 대상으로 인체의 분변으로부터 300여 균주를 분리하고 내산성, 내담즙성, 내열성, 항균력, 항암 및 항바이러스 효과를 가지는 균주들을 선발하여 생균제 특성을 나타내는지를 알아보기 위해 본 실험을 수행하였다. 인체에서 분리한 여러 균주 중 Miny-148 균주는 낮은 pH 및 높은 담즙산에 대한 내성, 열처리에 대한 열안정성을 지녀 기초적인 probiotic 특성을 가진 균주로 선발되어, Lactobacillus pentosus (99.9% 상동성)로 동정되었다. 항균력 실험에서 Escherichia coli O157:H7을 비롯한 Shigella flexneri, Bacillus anthracis, Staphylococcus aureus, E. coli, Vibrio cholerae, V. vulnificus, Salmonella typhimurium, 그리고 및 methicillin-resistant S. aureus (MRSA) 균주 8종 등 총 16종의 병원성세균을 억제하였다. 또한 Miny-148은 결장암 세포인 HT-29 cell을 억제하였을 뿐 아니라, transmissible gastroenteritis virus의 생육을 저해하여 세포변성 억제효과를 가진 우수한 probiotic 특성을 지닌 균주로 분석되었다.
Park, Nohra;Song, Saemee;Choi, Garam;Jang, Kyung Ku;Jo, Inseong;Choi, Sang Ho;Ha, Nam-Chul
Molecules and Cells
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제40권4호
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pp.299-306
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2017
The transcriptional activator AphB has been implicated in acid resistance and pathogenesis in the food borne pathogens Vibrio vulnificus and Vibrio cholerae. To date, the full-length AphB crystal structure of V. cholerae has been determined and characterized by a tetrameric assembly of AphB consisting of a DNA binding domain and a regulatory domain (RD). Although acidic pH and low oxygen tension might be involved in the activation of AphB, it remains unknown which ligand or stimulus activates AphB at the molecular level. In this study, we determine the crystal structure of the AphB RD from V. vulnificus under aerobic conditions without modification at the conserved cysteine residue of the RD, even in the presence of the oxidizing agent cumene hydroperoxide. A cysteine to serine amino acid residue mutant RD protein further confirmed that the cysteine residue is not involved in sensing oxidative stress in vitro. Interestingly, an unidentified small molecule was observed in the inter-subdomain cavity in the RD when the crystal was incubated with cumene hydroperoxide molecules, suggesting a new ligand-binding site. In addition, we confirmed the role of AphB in acid tolerance by observing an aphB-dependent increase in cadC transcript level when V. vulnificus was exposed to acidic pH. Our study contributes to the understanding of the AphB molecular mechanism in the process of recognizing the host environment.
해마다 반복되는 식중독 발생을 예방하기 위한 한 접근 방법으로써 시판품의 다양한 도마(항균처리 plastic 재질 3종, 항균처리 않은 plastic재질 1종, 나무재질(홍송, 고무나무, 편백나무, 박달나무, 대나무)를 대상으로 세균성 식중독의 주요한 원인균인 Escherichia coli O157:H7, S. Typhimurium, V. vulnificus, V. cholerae, V. parahaemolyticus 및 S. aureus의 6종 미생물에 대하여 저지환 시험과 real-time PCR을 이용한 정량법을 이용하여 항균력을 평가하였다. Plastic 재질의 도마들은 E. coli O157:H7, S. Typhimurium, S. aureus의 식중독균에 대해 항균력을 나타내었고, 항균력이 표시된 도마와 표시되어있지 않은 도마들 간의 항균력 차이는 크지 않았다. 나무 재질의 도마는 V. vulnificus에 대해서 항균력을 나타내었고, 5종의 나무 재질의 도마들 중 대나무 도마는 E. coli O157:H7, S. Typhimurium, V. cholerae, V. vulnificus의 4종의 균에 대해 저지환 시험에서 항균력을 나타내었으며, real-time PCR로 정량한 결과에서는 S. aureus에 대해 생육억제력을 나타내어 5종의 식중독균에 대하여 가장 광범위한 항균력을 보였다. 이는 대나무에 함유된 polyphenol과 organic acid 등의 작용으로 추측된다. 항균력이 있다고 표시된 도마에서도 시험 대상 균들 중 일부에 대해서만 항균력이 나타났으며, 재질별로 항균력에 차이가 나타났던 결과들로부터 도마에 대한 위생상의 지나친 신뢰는 큰 위험을 초래할 가능성이 있음을 인식하고, 조리의 최종관리자들에 의한 일상적인 철저한 관리가 필요하다고 판단된다.
This study included two parts of investigation, the microfloral changes during the brewing process with the changes of pH, total acidity, temperature and alcoholic contents, as well as determination of survival times of major enteric pathogens in Takju. 1. Maximum number of Saccharomyces cerevisiae was $4.3{\times}10^7$ per milliliter on the 5th day of fermentation and gradually decreased. Saccharomyces cerevisiae was one of the predominant strains of the fermentation process. The number of Saccharomyces cerevisiae was $4.3{\times}10^6$ per milliliter at the completion of the brewing and human consumption. In a few days after the completion of the brewing. Bacillus subtilis and some species of Staphylococcus spp. began to grow and those organisms were responsible for the spoilage. 2. Maximum pH, during the brewing, was 5.8 on the first day of fermentation and rapidly decreased until 6th day of fermentation at pH 4.3. 3. Maximum alcholic content was 14.5 degree on the 4th day of fermentation, 10.3 degree on the 5th day and this degree was continued during the experimentation. 4. Maximum temperature, during Takju brewing was 34.deg.C on the 3rd day of fermentation and rapidly decreased up to 23.deg.C on the 6th day and this temperature was continued until the brewing process was finished. 5. Maximum total acidity was 0.57 percent on the 4th day of fermentation and gradually decreased by brewing process was completed. 6. Survival time of major enteric pathogenic bacteria in Takju was as follows : Shigella dysenteriae and Escherichia coli were isolated in two hours and 14 hours respectively, but Salmonella typhi, Vibrio parahemolyticus were not isolated even in an hour after the inoculation of those organisms in undiluted Takju. In diluted Takju, Salmonella typhi, Vibrio parahemolyticus were not isolated even in an hour after the inoculation of those organisms in undiluted Takju. In diluted Takju, Salmonella typhi, Shigella dysenteriae, and Escherichia coli were survived for 50-60 hours, but Vibrio cholerae and Vibrio parahemolyticus were not isolated even if treated within one hour.
This study was carried out to investigated the distribution and characteristics of Vibrio spp. isolated from fish and shellfish, seawater and brackish water samples collected from Pohang, Uljin, Yeongduk and Gyeongju in Gyeongbuk Province from April 2000 to October 2000. Total 155 strains of genus Vibrio were isolated from 439 collected samples, and numbers of isolated strains of V. parahaemolyticus and V. vulnificus were 140 and 15, respectively. The isolation rate from the samples collected in Pohang was the highest as 41.5% (76 strains), and wat the highest as 71.4% (30 strains) in brackish water, and was the highest as 55.7% (34 strains) in August. And the optimal pH, temperature, and NaCl concentration for growth of V. parahaemolyticus and V. cholerae were 8.0, 3$0^{\circ}C$ and 2.0%, respectively. In a resistance test for environmental factors, heat and cold resistants of V. parahaemolyticus were higher than those of V. vulnificus, withstanding for 15 minutes at 6$0^{\circ}C$ and 6 days at -18$^{\circ}C$. The pH range for existence of V. parahaemolyticus and V. vulnificus were 4.5~l1.0 and 4.5~10.0, showing the similar resistance to pH. V. parahaemolyticus and V. vulnificus could grow in media containing up to 10.0% and 7.0% NaCl, respectively, Salt-tolerance of V. parahaemolyticus was higher than that of V. vulnificus. In an antibiotics sensitivity test against 16 strains of V. parahaemolyticus, twelve strains were resistant to ampicillin, eight strains were resistant to cephalothin. one strain was resistant to streptomycin, and one strain was resistant to ticarcillin.
최근 다양한 분야에서 생물학적 제제개발에 관한 연구가 활발한다. 본 연구에서는 생물학적 제제개발을 위한 일련의 연구로 Pseudomonas aeruginosa KLP-2가 생산하는 항균성 물질을 동정하고, 생리화학적 특성을 확인하였다. 본 항균성 물질을 전제하여 FAB-MS로 확인한 결과 pyocyanine으로 동정되었으며, 진청색의 needles 성상을 나타내었고 chloroform, methanol, ethyl acetate와 같은 용매에 높은 용해도를 나타내었다. Pyocyanine의 UV spectrum은 methanol에서 최대 흡광치(318 nm)를 보였고, FAB-MS로 확인한 결과 m/z 211에서 protonated molecular ion(M+H)$^{+}$ 이 관찰되었으며, 분자식은 $C_{13}$H$_{10}$ N$_{2}$O로 확인되었다. Pyocyanine 은 Bacillus cereus, Bacillus subtilis, Micrococcus luteus, Rodococcus equi, Staphylococcus aureus, Streptococcus faecalis, E. coli. Kegionella peneumophila, Shigella flexneri, Shigela boydii, Shigella sonnei, NAG Vibro cholerae, Vibrio parahaemolyticus, Vibro vulnificus, Yersinia enterocolitica 및 Saccharomyces cerevisiae 등의 다양한 세균에 대하여 항균활성을 보여 비교적 넓은 항균범위를 나타내었으며, 특히 Legionella pneumophila에 대하여 0.5$\mu$g의 pyocyanine을 함유한 disk가 48mm의 억제환을 타나내어 가장 높은 항균활성을 보였다.
통영항 내의 해수 및 저질의 물리 화학적 해양환경 특성과 해수의 위생지표세균을 비롯한 병원성 세균의 시험결과가 횟집의 수족관의 세균학적 수질에 적합한지에 대하여 검토하였다. 조사기간중 통영 항 해수는 수온 $6.8\sim25.2^{\circ}C$, 투명도 $1.0\sim2.5\;m$, 화학적산소요구량 $1.79\~2.41\;mg/L$, 용존산소 $5.7\~10.1\;mg/L$, 용존질소 $6.59\sim10.53{\mu}g-at/L$, 인산염 $0.56\sim1.01{\mu}g-at/L$, chlorophyll-a는 $1.21\sim9.54 mg/m^3$ 범위였으며 염분농도는 $30.11\sim31.41\%$였다. 통영항 해수의 생균수는 조사기간 중 mL당 log수가 $4.2\~6.8$($3.0\times10^4CFU/mL \sim6.9\times10^6CFU/mL$) 범위에 평균 5.3이었다. 월별로는 $1\~3$월이 적었고, $7\~9$월이 많았다. 통영항 내 조사해수의 $84.3\%$와 $93.1\%$가 패류수출해역 수질기준 중 total coliform group과 fecal coliform group의 기준치를 각각 초과하였다. 대장균군형은 Escherichia coli group이 $66.1\%$를 차지하였고, 그중 Type I 이 $56.5\%$, Citrobacter freundii group이 $11.0\%$, Enterobacter aerogenes group이 $9.69\%$, 기타 29균주로 $13.3\%$에 해당하였다. 그런데 전형적인 온혈동물의 장관유래균인 E. coli type I 이 전체의 $56.5\%$를 차지하였다. 통영항내 해수에서 Salmonella sp.나 Shigella sp. 및 Vibrio cholerae O1은 검출되지 않았으나 V. parahaemolyticus, V. vulnificus 및 V. cholerae non-O1 등의 검출율은 $10.4\sim35.4\%$에 달하였다.
The volatile flavor components were obtained from the aerial parts of Houttuynia cordata by a simultaneous distillation-extraction(SDE) method and bactericidal effects of the volatile flavor components on some strains were examined. Strong antibacterial activities were observed against Bacillus cereus, Bacillus subtilis, Vibrio cholerae 0-1 and Vibrio parahaemolyticus. To further elucidate the effective components in the extract, SDE extract was analyzed by gas chromatography (GC) and gas chromatography/mass spectrometry(GC/MS). A total of 98 volatile compound were detected. Of these, 90 were confirmed including 6 hydrocarbons(0.34%), 12 alcohols(1.31%), 13 aldehydes(33.81%), 1 acetal(0.01%), 6 esters(1.16%), 2 acids(3.10%), 5 ketones(5.87%), 2 furans(0.06%), 1 phenol(0.18%), 41 terpenes(53.23%)and 3 miscellaneous compound(0.93%). Major components were determined to be $\beta$-mycene, decanal, cis-ocimene and 2-undecanone.
An antimicrobial substance-producing microorganism was isolated from soil samples. Based of the taxonomic characteristics of its morphological, cultural, physiological properties and 16s rRNA sequence alignment, this microorganism was identified as Pseudomonas aeruginosa, and we named Pseudomonas aeruginosa EL-KM. The optimal culture condition for production of antimicrobial substance was 1% mannitol, 0.4% yeast extract, 0.5% Nacl, 0.2% $K_2SO_4$, 100$\mu$M $MgSO_4$.$7H_2O$, 10$\mu$M $CaCl_2$.$2H_2O$, 1$\mu$M $FeSO_4$.$7H_2O$, 1$\mu$M $MnSO_4$.$4-5H_2O$, initial pH 7 and 200 rpm at 3$0^{\circ}C$. The purification of the antimicrbial substance was performed by silica gel column chromatographys, and fraction with TLC $R_f$ 0.77 value represented good antimicrobial activity. The crude antimicrbial substance was stable within a pH range of 3-10 and temperature range of 4$^{\circ}C$-121$^{\circ}C$ autoclaving. This crude antibacterial substance acted as bacteriolytic agent against Vibrio cholerae non-Ol ATCC 25872, and also exhibited excellent properties, when the substance was demonstrated against many other gram-positive, gram-negative bacteria, yeast and fungi.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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