좀구멍버섯균(Schizopora paradoxa)은 백색 부후 균으로 망간이 배지에 첨가되지 않으면 MNP와 GOX는 동시에 생성되지 않았으며 고농도의 망간 첨가시 (40ppm)에는 기본적 농도(11.15ppm)에 비해 MNP와 GOX가 모두 높은 활성을 보였다. 그러나 망간농도에 따른 균사생장량에는 별 차이가 없었다. 구리와 veratryl alcohol에 대해서도 같은 실험을 실시하였으나 농도에 따른 MNP와 GOX의 변화가 상관관계를 갖지 않는 것으로 나타났다. MNP와 GOX의 생성조절과 관련하여 cAMP의 영향을 조사한 결과 cAMP생성효소 억제제인 atropine을 농도별로 배양액에 첨가시 정도의 차이는 있었으나 MNP와 GOX생성이 동시에 억제되었다.
This study was done to know a kind and change (transition) of enzymes produceed by Streptomyces halstedii ssp. scabies SA1-27 and Streptomyces violaceusinger C1-6 which showed good lignolytic activity and a good decolorization ratio of remazol brilliant blue R(RBBR) dye. These strains were isolated from soil and identified by the author. The basal medium containg 0.2% glucose was used to measure enzyme activity, Lignin peroxidase 1 (Lip 1) was measured by the methods of Choi, and Bourbonnais and Paice. Lignin peroxidase 2 (Lip 2) was measured by the methods of Ishida et al and Ramachandra et al using 2.4-dichlorophenol(2.4 DCP), manganese peroxidase(Mnp), veratryl alcohol oxidase (VAO), and laccase. They were measured by each of the methods of Choi and Paszczynski et al, and Bourbonnais and Paice, and De Jong et al. In the results, the kind of enzymes produced by Streptomyces halstedii ssp. scabies SA1-27 were Lip 1, Lip 2, VAO, and laccase, and their activities indicated the highest value as each 4.95 nmol/mg protein, $8.45({\times}100^{-3})unit$, 10.25 nmol/mg protein, 9.20 nmol/mg protein on the sixth day of the culture and decreased gradually over time. The kind of enzymes produced by Streptomyces violaceusinger C1-6 were Lip 1, Lip 2, Mnp, VAO, and laccase, and their activities indicated the highest value as each 4.90 nmol/mg protein, $13.85({\times}100^{-3})unit$, 3.10 nmol/mg protein, 11.30 nmol/mg protein, 4.45 nmol/mg protein on the sixth day of the culture and decreased gradually over time. Consequently, the author knew the fact that there were few differences in the kind and quantity of enzymes produced by the two Streptomyces strains, but all enzyme activities indicated the highest value on the sixth day of the culture and decreased gradually over time.
The textile industry wastewater has been decolorized efficiently by the white rot fungus, Irpex lacteus, without adding any chemicals. The degree of the decolorization of the dye effluent by shaking or stationary cultures is 59 and 93%, respectively, on the 8th day. The higher level of manganese-dependent peroxidase (MnP) and non-specific peroxidase (NsP) was detected in stationary cultures than in the cultures shaken. Laccase activities were equivalent in both cultures and its level was not affected significantly by the culture duration. Neither lignin peroxidase (LiP) nor Remazol Brilliant Blue R oxidase (RBBR ox) was detected in both cultures. The absorbance of the dye effluent was significantly decreased by the stationary culture filtrate of 7 days in the absence of Mn (II) and veratryl alcohol. In the stationary culture filtrate, three or more additional peroxidase bands were detected by the zymogram analysis.
우리 나라 자연 환경에서 분리 동정된 송곳니구름버섯(Irpex zonatus) BN2 균주의 리그닌분해효소활성과 아조(azo)계, 트리페닐메탄(triphenylmethane)계 및 헤테로싸이클릭(heterocyclic)계에 속하는 몇몇 염료의 탈색능을 조사하였다. 송곳니구름버섯 BN2 균주는 lignin peroxidase(LiP)와 veratryl alcohol oxidase(VAO)를 생산하지 않고 laccase와 manganese dependent peroxidase(MnP)를 생산했다. MnP는 배양 3일부터 생산되었으나 효소활성은 매우 낮았다. 반면 laccase는 배양 초기부터 지속적으로 생산되었고 활성은 대단히 높았다. 균주를 염료와 함께 10일간 배양했을 때 아조계 염료인 orange II, orange G, tropaeolin O 및 congo red의 탈색율은 각각 98.0%, 97.4%, 99.0% 및 95.3%로 나타났고 트리페닐메탄계 염료인 basic fuchsin, malachite green 및 crystal violet 들은 98.5%, 95.7% 및 99.4%로, 헤테로싸이클릭계 염료에 속하는 eosin Y, toludine blue, methyl blue 및 azur B는 각각 97.4% 98.7%, 99.9% 및 94.0%의 탈색율을 보였다. 송곳니구름버섯 BN2 균주에 의한 염료의 탈색은 주로 laccase에 의하여 이루어진다고 생각된다.
As the biodegradation of wood constituents has been understood as a multi-basidiomycetes and enzymatic processes, this review will focus on the roles of low molecular compounds and radicals working in harmony with fungal enzymes. Wood rotting basidiomycete fungi penetrate wood, and lead to more easily metabolize carbohydrates of the wood complex. The white-rot fungi, having versatile enzymes, are able to attack directly the "lignin barrier". They also use a multi-enzyme system including so-called "feedback" type enzymes allowing for simultaneous degradation of lignin and carbohydrates. The multi-enzymes including laccase support the proposed route by explaining how the high molecular weight enzymes can function in the wood complex. These enzymes may function separately or cooperate each other. In addition, veratryl alcohol oxidase, cellobiose dehydrogenase, arylalcohol dehydrogenase, and particularly low molecular mediators and radicals have an important role in wood biodegradation. However, the possibility of other mechanism as well as other enzymes, as operating as feedback systems in the process of wood degradation, could not be excluded.
한국산 흰구름버섯(Trametes hirsuta S1)로부터 배지 내로 분비된 laccase를 ultrafiltration과 anion exchange chromatography, adsorption chromatography를 이용하여 분리 정제하고 정제된 효소의 특성을 조사하였다. Laccase는 균주의 일차 대사 과정에서 주로 생산되는 세포의 페놀 산화효소였다. 흰구름버섯을 기본 배지에서 배양하였을 때 생장은 배양 6일까지 급속히 이루어졌고, laccase의 활성은 배양 5일에 최대활성을 나타냈으며 배양액에서 LiP와 VAO의 활성은 측정되지 않았다. Laccase의 생산에 미치는 유도원의 영향을 조사하기 위하여 배양 중인 흰구름버섯에 몇몇 유도원을 첨가한 결과, 2,5-xylidine은 대조구에 비하여 laccase의 생산을 약4배 증가 시켰다. 정제된 laccase는 SDS 젤 전기영동에서 대략 66 kDa의 분자량을 가지는 단일 폴리펩타이드(single polypeptide)였고, 탄수화물 함량은 12%였다. 정제된 laccase의 $K_m$과 $V_{max}$를 ABTS[2,2-azino-bis(3-ethylbenzthiazo line-6-sulfonic acid)]를 기질로 사용하여 조사한 결과 각각 $51.2\;{\mu}M$과 $56.8\;{\mu}mole{\cdot}min^1{\cdot}mg^{-1}$로 측정되었다. Laccase 활성의 최적 pH는 3.0이며, 이 효소는 $50^{\circ}C$ 미만에서 1시간 동안 처리하였을 때 안정적이었고 $70^{\circ}C$에서 20분간 처리하였을 때 효소의 활성이 반감되었다. Laccase의 분광학적 특성을 조사한 결과 구리를 포함하는 단백질로 나타났다. 일반적으로 알려진 laccase의 기질들에 대한 특이성을 조사한 결과, 5 mM ABTS에서 가장 높은 활성을 나타내었으며 tyrosine에서는 laccase의 활성이 나타나지 않았다. 저해제의 영향을 조사한 결과, 일반적으로 구리를 포함하는 단백질의 저해제인 $NaN_3$, TGA, DDC를 일정 농도로 처리한 실험구에서는 효소의 활성이 완전하게 억제되었으며, EDTA 처리구에서는 효소의 활성이 억제되지 않았다. 한국산 흰구름버섯 S1 균주로부터 생산되는 laccase의 N-말단의 아미노산의 서열은 Coriolus hirsutus의 laccase와 100%의 상동성을 나타냈고, T. versicolor의 laccase I과는 68%의 상동성을 나타냈다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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