• Journal of Animal Science and Technology
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• 제50권2호
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• pp.177-184
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• 2008

Acid-labile subunit(ALS)는 85-kDa 크기의 당단백질로서 7.5-kDa의 insulin-like growth factor(IGF) 및 40~45-kDa IGF-binding protein-3와 결합하여 150-kDa ternary complex를 형성하는 혈장단백질이다. 선행연구에서 본 연구진은 reverse transcription-polymerase chain reaction(RT-PCR) 방법으로 돼지(porcine) ALS(pALS)의 coding sequence를 합성하여 plasmid vector에 삽입시켜 ‘expression construct’를 제작한 바 있다. 그러나 본 expression construct의 pALS coding sequence에는 PCR error로 추정되는 원인으로 말미암아 2개의 bases에서 mis-sense mutation이 일어난 것이 발견되었다. 본 연구에서는 ‘site-directed mutagenesis’ 방법으로 pALS의 올바른 coding sequence를 합성하여 ‘insert DNA’의 마지막 codon 다음에 ‘His-tag’ sequence가 위치한 pET- 28a(+) plasmid expression vector에 삽입하였다. 본 expression construct는 E. coli BL21(DE3) 세포에서 ‘induction’ 시켰고, 발현된 유전자재조합(recombinant) peptide는 Ni-affinity chromato- graphy로 정제하였다. 이렇게 affinity chro- matography로 정제된 peptide는 SDS-PAGE에서 66kDa 위치에 single band를 나타냄으로써 recombinant pALS의 예상된 질량과 일치하였다. 이상의 결과는 본 연구에서 recombinant pALS peptide가 성공적으로 발현정제되었음을 시사한다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제17권1호
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• pp.29-36
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• 2007

The xynA gene encoding the xylanase A of Paenibacillus sp. DG-22 was isolated with a DNA probe obtained by PCR amplification, using degenerated primers deduced from the amino acid residues of the known N-terminal region of the purified enzyme and the conserved region in the family 11 xylanases. The positive clones were screened on the LB agar plates supplemented with xylan, by the Congo-red staining method. The xynA gene consists of a 630-bp open reading frame encoding a protein of 210 amino acids, and the XynA preprotein contains a 28-residues signal peptide whose cleavage yields a l82-residues mature protein of a calculated molecular weight of 20,000Da and pI value of 8.77. The cloned DNA fragment also has another ORF of 873 nucleotides that showed 76% identity to the putative transcriptional activator of Bacillus halodurans C-125. Most of the xylanase activity was found in the periplasmic space of E. coli. The xynA gene was subcloned into pQE60 expression vector to fuse with six histidine-tag. The recombinant xylanase A was purified by heating and immobilized metal affinity chromatography. The optimum pH and temperature of the purified enzyme were 6.0 and $60^{\circ}C$, respectively. This histidine-tagged xylanase A was less thermostable than the native enzyme.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제18권4호
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• pp.639-647
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• 2008

The heat-inducible expression vectors for Corynebacterium glutamicum and C. ammoniagenes were constructed by using the ${\lambda}O_L1$ and the cryptic promoters, CJ1 and CJ4 that express genes constitutively in C. ammoniagenes. Although the promoters were isolated from C. ammoniagenes, CJ1 and CJ4 were also active in C. glutamicum. To construct vectors, the $O_L1$ from the ${\lambda}P_L$ promoter was isolated and fused to the CJ1 and CJ4 promoters by recombinant PCR. The resulting artificial promoters, CJ1O and CJ4O, which have one ${\lambda}O_L1$, and CJ1OX2, which has two successive ${\lambda}O_L1$, were fused to the green fluorescent protein (GFP) gene followed by subcloning into pCES208. The expression of GFP in the corynebacteria harboring the vectors was regulated successfully by the temperature-sensitive cI857 repressor. Among them, C. ammoniagenes harboring plasmid pCJ1OX2G containing GFP fused to CJ1OX2 showed more GFP than the other ones and the expression was tightly regulated by the repressor. To construct the generally applicable expression vector using the plasmid pCJ1OX2G, the His-tag, enterokinase (EK) moiety, and the MCS were inserted in front of the GFP gene. Using the vector, the expression of pyrR from C. glutamicum was tried by temperature shift-up. The results indicated that the constructed vectors (pCeHEMG) can be successfully used in the expression and regulation of foreign genes in corynebacteria.

• 대한수의학회지
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• 제39권4호
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• pp.786-796
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• 1999

As an attempt to develop an effective control method against theileriosis, recombinant antigen protein was produced. Thirty-two kDa membrane protein(MP) gene of T sergenti was amplified through RT-PCR from extracted total RNA of T sergenti isolated in Chonbuk, Korea. The amplified 869 bp of Korean T sergenti membrane gene was cloned and the base sequences were analyzed. The amplified gene was cloned into E coli expression vector, pQE32 plasmid vector, and the vector was introduced into E coli strain M15 to produce the recombinant membrane protein. For the induction of T sergenti membrane protein(KTs-MP), the plasmid harboring E coli strain M15 were cultured in the presence of IPTG, and the recombinant protein were purified by $Ni^+$-NTA agarose. Then, to confirm the authenticity of the produced membrane protein, molecular weight of expressed recombinant KTs-MP was analyzed by SDS-PAGE and Western blotting. The molecular weight of expressed recombinant protein was 32 kDa as expected. The recombinant KTs-MP was successfully recognized by anti-His Tag antibody, antisera of T sergenti infected cattle and monoclonal antibody of T sergenti membrane protein. Therefore, we concluded that the authentic 32 kDa membrane protein of T sergenti was produced as immunologically recognizable form.

• 한국정보과학회논문지:소프트웨어및응용
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• 제29권9호
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• pp.676-683
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• 2002

XML(extensible Markup Language)문서가 웹 문서의 표준으로 자리 매김 할 수 있는 가장 큰 성공요인은 사용자가 문서 타입을 기술할 수 있는 유연성(flexibility)이다. 그러나 XML의 유연성으로 야기되는 문제점은 동일한 의미를 표현하기 위해 XML문서 작성자마다 서로 다른 태그명과 구조를 사용한다는 점이다. 즉 서로 다른 태그 집합, 요소(element), 속성(attribute)에 대한 서로 다른 이름 또는 다른 문서 구조로 인해 다른 태그로 표현된 문서는 서로 다른 부류의 문서로 간주되기 쉽다. 따라서 본 논문은 XML태그에 내재된 의미 정보(semantic information)와 구조 정보(structured information)를 추출하여 의미적으로 최대한 유사한 동의어로 확장하고, XML문서의 확장된 태그간의 의미적 유사도를 비교 분석할 수 있는 개념 기반의 태그 패턴 매처(Tag Pattern Matcher)를 설계 구현하였다. 두 XML문서의 태그간의 의미적 유사도에 가중치를 부여하여 기존의 비구조적인(semi-structured) 문서를 위한 벡터 스페이스 모델(vector space model)을 확장함으로써 두 XML문서가 유사한지를 파악할 수 있다.

• The Plant Pathology Journal
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• 제26권1호
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• pp.25-31
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• 2010

Papaya ringspot virus (PRSV) causes the most widespread and devastating disease in papaya. Isolates of PRSV originating from different geographical regions in south India were collected and maintained on natural host papaya. The entire coat protein (CP) gene of Papaya ringspot virus-P biotype (PRSV-P) was amplified by RTPCR. The amplicon was inserted into pGEM-T vector, sequenced and sub cloned into a bacterial expression vector pRSET-A using a directional cloning strategy. The PRSV coat protein was over-expressed as a fusion protein in Escherichia coli. SDS-PAGE gel revealed that CP expressed as a ~40 kDa protein. The recombinant coat protein (rCP) fused with 6x His-tag was purified from E.coli using Ni-NTA resin. The antigenicity of the fusion protein was determined by western blot analysis using antibodies raised against purified PRSV. The purified rCP was used as an antigen to produce high titer PRSV specific polyclonal antiserum. The resulting antiserum was used to develop an immunocapture reverse transcription-polymerase chain reaction (IC-RT-PCR) assay and compared its sensitivity levels with ELISA based assays for detection of PRSV isolates. IC-RT-PCR was shown to be the most sensitive test followed by dot-blot immunobinding assay (DBIA) and plate trapped ELISA.

• 대한전자공학회논문지SP
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• 제43권4호
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• pp.46-54
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• 2006

최근 각종 온라인 상거래 및 개인 신분카드 이용이 늘어나면서 개인 인증의 중요성이 부각되고 있다. RFID(Radio Frequency Identification) tag가 내장된 개인 신분 카드가 점차 증가하고 있지만, 본인의 인증을 할 수 있는 방법이 미비하기 때문에, 자동화 할 수 있는 대책이 시급하다. RFID tag는 현재 메모리 용량이 매우 작기 때문에, 개인의 생체정보를 저장하기 위해서는 효율적인 특징추출 방법이 필요하며, 저장된 특징들을 비교하기 위해서는 새로운 인식방법이 필요하다. 본 논문에서는 인간의 인지학적인 두뇌 원리인 해마 신경망을 공학적으로 모델링하여 얼굴 영상의 특징 벡터들을 고속 학습하고, 각 영상의 최적의 특정을 구성할 수 있는 해마 신경망 모델링 알고리즘을 이용한 개인생체 인증 시스템에 관한 연구를 수행하였다. 시스템은 크게 NMF(Non-negative Matrix Factorization)와 LDA(Linear Discriminants Analysis) 혼합 알고리즘을 이용한 특징 추출 부분과 해마신경망을 모델링하고 인식 성능을 실험하는 것으로 구성 되어 있다. 제안한 시스템의 성능을 평가하기 위하여 실험은 표정변화와 포즈변화가 포함된 이미지를 각각 구분하여 인식률을 확인하였다. 실험 결과, 본 논문에서 제안하는 특정 추출 방법과 학습 방법을 다른 방법들과 비교하였을 때, 학습시간비용과 인식률에서 우수함을 확인하였다.

• 생명과학회지
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• 제32권12호
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• pp.956-961
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• 2022

식물에서 재조합 단백질을 생산하는 것은 여러 가지 장점이 있다. 식물은 인간 병원체에 감염되지 않으며, 박테리아와 달리 내독소를 생산하지 않는다. 엽록체 형질전환은 핵 형질전환에 비해 안정적으로 많은 유전자를 발현시킬 수 있는 등 다양한 이점이 있다. 항균펩타이드(AMP)는 많은 동물들이 가지고 있는 선천면역의 일종으로, 소량이라도 항균력을 가지며, 기존 항생제와 다르게 쉽게 내성균이 생기지 않는다. 항균펩타이드인 moricin은 누에나방의 한 종류인 Bombyx mori에서 분리되었으며, C-말단은 염기성 아미노산이 모여 있고, N-말단은 α-helix 구조를 가지고 있다. Moricin을 생산할 때 SUMO와 6xHis tag를 융합하여 사용하였다. 발현된 moricin의 용해성과 안정성을 높이기 위해 SUMO를, 발현된 moricin을 정제하기 위하여 6xHis tag를 이용하였다. 본 연구에서 담배 엽록체와 대장균에서 항균펩타이드를 발현하기 위한 형질전환벡터를 제작하였다. 또한, 엽록체와 박테리아의 전사 및 번역의 유사성을 이용하여 대장균에서 단백질의 발현을 확인하였다. 발현된 moricin을 Ni 컬럼 및 SUMOase를 처리하여 정제하고 agar diffusion assay를 이용하여 항균 활성을 확인하였다.

• 한국산업정보학회논문지
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• 제24권6호
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• pp.11-24
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• 2019

웹에서 정보 구매자들의 성향은 가성비에서 가심비 형태로 변해가는 추세이다. 멀티미디어 콘텐츠 추천에도 그러한 흐름이 있는데, 바로 폭소노미 (Folksonomy) 기반의 분위기를 이용한 추천 방법이다. 하지만 이런 방법의 경우 동의어를 고려하지 못한다는 문제점이 존재한다. 이 문제를 해결하기 위해 일부 연구에서는 Thayer모델의 12 분위기를 AV(Arousal and Valence)값으로 정의하여 그 문제점을 해결하였지만, 추천 성능이 재현 수준 0.1에서 키워드 기반 검색 방법보다 떨어지는 문제점을 보였다. 본 논문에서는 재현 수준 0.1에서도 키워드 기반 검색 방법과 동일한 추천 성능을 유지하면서 동의어 문제를 해결할 수 있도록 멀티미디어 콘텐츠의 분위기 벡터를 이용하는 방법을 제안하였다. 또한, 추천 성능 분석을 위해 기존 AV값 기반 방법과 키워드 기반 방법과 비교 분석하였다. 추천 성능 분석결과, 본 논문에서 제안한 방법이 전체적으로 기존 방법들 보다 우수한 추천 성능을 보였다.

• KSBB Journal
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• 제32권1호
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• pp.71-82
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• 2017

To verify anti-diabetic effect of oligopeptide with His-Pro repeats (mHP peptide), the oligopeptide was first secreted and optimized using the secretion vector, pRBAS with alkaline protease gene promoter and the signal sequence in Bacillus subtilis and directly the anti-diabetic effect of the mHP peptide was investigated in insulinoma cell, RINm5F cell line. The oligopeptide gene was obtained by annealing oligonucleotides with repeated His-Pro sequence and finally was constructed as 18 dipeptides (108 bp and 4.0 kDa) coding gene, named oligopeptide with His-Pro repeats (mHP peptide) to make cyclo(His-Pro) known to be anti-diabetic effects. The region encoding the oligopeptide gene was subcloned into the pRBAS secretion vector (E.coli-Bacillus shuttle vector) after PCR amplification using the designed primers including initiation and termination codons and His tag, named pRBAS-mHP (6.56 kb). To optimize secretion of the oligopeptide, various culture conditions were investigated in Bacillus subtilis LKS. As a result, the secreted oligopeptide was maximally measured (approximately $59.6{\mu}g/mL$) in 3 L batch culture and the highest secretion was achieved at $30^{\circ}C$, PY medium, and carbon sources (particularly barley and glycerol). In the RINm5F cells treated with 2 mM STZ, the oligopeptide treatment (0.1 mg/mL) restored the cell viability (10%) and reduced the nitric oxide (NO) generation (35%) and DNA fragmentation (90%). And also, insulin secretion level was increased to 17% higher than in STZ-treated RINm5F cells. These results suggest that the oligopeptide with His-Pro repeats could be a candidate material for anti-diabetic agent against STZ-induced diabetes.