• 한국미생물·생명공학회지
• /
• 제33권4호
• /
• pp.308-314
• /
• 2005

상용 복막투석액에 함유된 고농도의 포도당과 포도당 분해산물(glucose degradation products: CDP)이 복막의 비후, 복막 투과성의 증가 및 한외여과 부전과 같은 복막의 구조적, 기능적 변화를 초래하리라 추정되고 있다. 본 연구에서는 CDP성분이 사람 복막중피세포 활성화에 미치는 영향을 검색하였고 또 이때 ROS와 PKC가 관여하는지를 검색하였다. 혈청이 배제된 M199 배양액으로 성장을 동일화시킨 사람 복막중피세포를 GDP인 methylglyoxal(MGO), acetaldehyde, 그리고 3,4-dioxyglucosone-3-ene(3,4-DGE)으로 48시 간 동안 자극하였고, 복막의 투과성에 대한 지표로서 혈관내피성장인자(vascular endothelial growth factor VEGF)를, 섬유화의 지표로서 fibronectin과 heat shock protein 47(hsp47)의 단백을 정량하였다. 활성산소족(reactive oxygen species:ROS)과 protein kinase C(PKC)의 관여여부는 각각 항산화제 N-acetylcystein(NAC)과 PKC 억제제 calphostin C의 억제 효과로 검색하였다. MGO는 대조군과 비교하여 VEGF 분비를 1.9배, fibronectin분비를 1.5배 그리고 hsp47 표현을 1.3배로 유의하게 증가시켰다(p<0.05). MGO에 의한 VEGF 상향 조절은 calphostin C와 NAC에 의하여 유의하게 억제되었다. 사람 복막중피세포에서 VEGF 분비는 acetaldehyde에 의하여 증가하였으나 3,4-DGE에 의하여 억제되었고, fibronectin 분비와 hsp47 표현은 acetaldehyde나 3,4-DGE에 의하여 영향을 받지 않았다. 이상을 종합할 때, ROS생산과 PKC활성화가 상용투석액내 함유된 MGO에 의한 점진적인 복막의 투과성 증가, 세포외기질 축적 그리고 복막 섬유화를 유발하는 주된 신호체계로서 이를 선택적으로 억제함으로써 복막의 기능을 유지할 수 있을 것으로 생각된다.

• 생명과학회지
• /
• 제26권1호
• /
• pp.91-100
• /
• 2016

혈관신생의 억제는 암과 같은 신생혈관형성 질환의 치료를 위해 유용한 접근법이다. 신생혈관형성의 핵심인자인 혈관내피세포성장인자는 신생혈관형성 질환의 치료를 위한 주요한 표적이다. 그러므로, 본 연구에서는 in vitro 분석과 ex vivo 동물 실험을 통해 황금 열수추출물의 신생혈관형성 억제효과를 연구했다. 본 연구결과에서 황금 열수추출물이 혈관내피세포성장인자에 의해 자극된 혈관내피세포에 있어 세포독성 없이 세포의 이동, 침투, 관형성을 농도 의존적으로 억제하였다. 더 나아가 황금 열수추출물은 혈관내피세포성장인자에 의해 유도된 흰쥐 대동맥 주변 미세혈관 발아를 예방하였다. 본 연구결과들은 황금 열수추출물이 신생혈관형성 억제작용이 있고, 이는 혈관내피세포성장인자에 의해 유도된 혈관신생을 억제 하는 잠재적 소재가 될 수 있음을 제안한다.

• Clinical and Experimental Pediatrics
• /
• 제48권8호
• /
• pp.886-893
• /
• 2005

목 적 : 가와사키병은 어린 소아에서 전신성 혈관염을 일으키는 가장 흔한 원인이다. 가와사키병이 발병한 경우 여러 혈관 성장인자들의 분비가 촉진되어 내막층의 증식과 신생 혈관 생성작용이 진행되면서 관상동맥이 재구성된다. 수년간 가와사키병의 치료제로 IVIG와 코르티코스테로이드가 사용되었으나 그 치료기전이 명확히 밝혀진 바는 없다. 이런 IVIG와 코르티코스테로이드가 가와사키병의 관상동맥합병증을 감소시키는데 어떠한 기전으로 작용하는지 알아보고자 본 연구에서는 Matrigel을 이용하여 in vitro에서 VEGF에 의해 유도된 내막세포 분화에 대한 IVIG와 methylprednisolone의 효과를 보고자 하였다. 방 법 : Matrigel을 이용하여 in vitro에서 VEGF에 의해 유도된 내막세포 분화에 대한 IVIG와 methylprednisolone의 효과를 보고자 VEGF, VEGF와 IVIG, VEGF와 VEGF antibody, VEGF와 methylprednisolone, VEGF, IVIG와 methylprednisolone을 각각 넣어주고, HUVECs를 18시간 동안 배양 후 튜브의 총 길이를 측정하였다. 결 과 : 1) IVIG의 농도를 25 mg/mL, 그리고 40 mg/mL로 증량하였을 경우 IVIG를 투여하지 않은 대조군에 비하여 통계학적으로 각각 유의한 세포수(HUVECs) 감소 효과를 관찰할 수 있었으며(P<0.001), 40 mg/mL를 처리한 경우가 25 mg/mL를 처리한 경우보다 세포수 감소 효과가 더 뚜렷하였다(P<0.05). 세포배양 시간에 따른 억제 효과는 25 mg/mL과 40 mg/mL에서 배양 후 24시간과 48시간 모두에서 대조군과 비교하여 통계학적으로 유의한 효과를 보였다(P<0.001). 2) VEGF 20 ng/mL를 처리한 군에 IVIG 40 mg/mL 또는 여러 농도의 methylprednisolone($10^{-12}M$, $10^{-9}M$ or $10^{-6}M$)을 처치해 주었을 때 튜브 형성이 유의하게 억제되었으며(P<0.05), methylprednisolone의 경우 그 억제 정도가 농도에 비례하여 일어났으나 IVIG 투여시 보다는 억제 효과가 약하였다. 한편, IVIG와 methylprednisolone와 병합투여한 경우는 methylprednisolone 농도에 상관없이 모두 튜브 형성을 잘 억제하였으며(P<0.001), IVIG만 단독 투여한 것과 통계적 차이는 없었다. 결 론 : 본 연구에서는 in vitro에서 VEGF가 HUVECs의 분화를 유도하고 분화된 내막세포의 맥관 형성이 IVIG와 methylprednisolone에 의해 저해된다는 것을 보여주었다. 이는 가와사키병의 관상동맥합병증이 생기는 기전 중 VEGF와 내막세포의 분화로 인해 일어나는 관상동맥의 재구성을 IVIG와 methylprednisolone이 억제한다는 것을 시사하며 치료 기전 중 하나로 제시될 수 있다.

• Journal of Chest Surgery
• /
• 제40권4호
• /
• pp.264-272
• /
• 2007

배경: 혈관내피 성장인자(vascular endothelial growth factor, VEGF)는 혈관평활근세포(vascular smooth muscle cell)의 증식과 이동을 촉진함으로써 혈관신생에 중요한 역할을 한다. 당뇨병은 VEGF의 발현과 연관되어 정상 혈당상태에서 보다 세포의 증식을 더욱 촉진시킨다. 당뇨병쥐에서 VEGF 수용체의 선택적 차단이 손상된 혈관에서 신내막 형성과 혈관평활근세포의 이동에 미치는 영향에 대해 알아보고자 했다. 대상 뜻 방법: 당뇨병 쥐의 경동맥 풍선손상 모델에서 위약을 투여하거나, 혈관내피 성장 인자 수용체-1(VEGFR-1)에 선택적으로 작용하는 항-Flt-1 펩타이드(anti-Flt-1 peptide; Gly-Asn-Gln-Trp-Phe-Ile)를 풍선손상 2일 전부터 0.5mg/kg의 용량으로 2주간 매일 투여한 군으로 나누어 Hematoxylin-Eosin 염색을 하여 신내막의 형성정도와 혈관내강의 협착정도를 비교하였으며, proliferative cell nuclear antigen (PCNA)에 대한 면역조직화학염색법을 시행하여 세포의 증식정도를 관찰하였다. 혈관평활근세포를 고혈당환경에서 배양하고 transwell assay를 시행하여 혈관평활근세포의 이동 정도를 측정하였다. 고혈당 환경에서 자라고 있는 혈관평활근세포에 50ng/mL의 VEGF를 단독 또는 3ug/mL의 항-Flt-1 펩타이드와 함께 처리하고 일정시간이 지난 후 matrigel filter를 통과한 세포를 세어 아무런 처치를 받지 않은 세포가 이동한 정도와 비교하였다. 또한, 혈관평활근세포에 세포이동 정도 측정 시와 같은 처리를 한 후, RNA를 분리하고 reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR)을 시행하여 기질금속단백분해효소(matrix metalloprotenase, MMP)의 발현 정도를 관찰하였다. 결과: 신내막의 면적은 위약 투여 쥐는 $0.24{\pm}0.03 mm^2$이었으나, 항-Flt-1 펩타이드의 처리에 의해 $0.15{\pm}0.04 mm^2$로 유의하게 감소하였으며(p<0.01), 신내막 형성에 따른 내강의 협착 정도도 위약 투여 쥐는 $61.85{\pm}5.11%$, 항-Flt-1 펩타이드 투여 쥐는 $36.03{\pm}3.78%$로 항-Flt-1 펩타이드 투여에 의하여 유의하게 감소하였다(p<0.01). 신내막의 전체 세포수에 대한 PCNA(+)인 세포를 백분율로 구하였으며, 위약 투여 쥐와 항- Flt-1 펩타이드 투여 쥐에서 각각 $52.82{\pm}4.20%,\;38.11{\pm}6.89%$로 나타나 항-Flt-1 펩타이드를 투여한 쥐에서 PCNA(+)인 세포가 유의하게 적음을 보이고 있다(p<0.05). 혈관평활근세포의 이동 정도 측정에서는 항-Flt-1 펩타이드 처리에 의하여 VEGF에 의한 혈관평활근 세포의 이동이 유의하게 감소하였다(p<0.01). 또한, 항-Flt-1 펩타이드 처리에 의하여 VEGF에 의한 MMP-3와 MMP-9 mRNA의 발현 증가가 억제되었다. 결론: 항-Flt-1 펩타이드는 당뇨병쥐의 경동맥손상모델에서 신내막 형성을 억제하였으며, 고혈당 환경에서 배양된 혈관평활근세포의 이동과, MMP-3와 MMP-9의 활성을 억제하였다.

• 대한의용생체공학회:의공학회지
• /
• 제16권4호
• /
• pp.463-470
• /
• 1995

사람의 내피세포는 동물내피세포에 비해 배양증식이 어려운 것으로 알려져 있어 이를 효율적으로 배양증식 시키기 위해서 배양액에 내피세포성장인자를 헤파린과 함께 첨가하는 방법이 많이 사용되어 오고 있다. 한편 최근에는 세포내 cyclic adenosine monophosphate(cAMP)을 증가시키는 물질들인 콜레라독소와 아이소부틸메틸산틴(isobutlmethylxanthine, IBMX)을 세포배양액에 첨가하여 내피세포 증식을 향상시킨 실험결과가 보고된바 있다. 이런 연구결과들을 토대로 할때 내피세포 배양액에 내피세포성장인자 및 헤파린과 함께 cAMP 증가물질을 같이 첨가하여 주면 내피세포의 성장증식을 보다 향상시킬수 있을 것이라는 가설이 가능할 것이다. 본 실험에서는 이와같은 가설을 검증하기 위해 사람의 대망 미세혈관(omental microvessel)으로부터 내피세포를 분리배양한뒤 내피세포성장인자 및 헤파린과 cAMP 증가물질들의 첨가가 내피세포의 증식에 미치는 영향을 분석하고, 궁극적으로는 사람 내피세포의 최적 배양증식 조건을 확립하고자 하였다. 실험 결과 사람의 대망 미세조직에서 내피세포를 분리하여 이를 효과적으로 배양증식하기 위해서는 내피세포성장인자와 헤파린을 첨가한 배지를 사용하거나, 또는 내피세포성장인자를 사용하지 않는 경우 콜레라독소와 IBMX를 병합 첨가하는 것이 좋은 것으로 관찰되었으며, 내피세포성장인자와 콜레라독소 및 IBMX를 동시에 병합 첨가하는 것은 효과가 없는 것으로 밝혀졌다.

• Journal of Digestive Cancer Research
• /
• 제3권1호
• /
• pp.11-16
• /
• 2015

The discovery of HER2, a biomarker in advanced gastric cancer, and successful clinical trial using trastuzumab that targets this biomarker signaled a revolutionary turning point in treatment of metastatic gastric cancer. Many studies about targeted agents for gastric cancer have been attempted. Among them, ramicirumab, a monoclonal antibody that targets vascular endothelial growth factor receptor-2 (VEGFR-2), and apatinib, a tyrosine kinase inhibitor (TKI) that targets VEGFR2, have shown to improve the survival rates in advanced gastric cancer patients, for whom previous therapies had failed; hence, they are expected to be accepted as one of the standard therapies for advanced gastric cancer.

• Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
• /
• 제19권4호
• /
• pp.495-499
• /
• 2006

In our previous studies, we demonstrated that Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF) enhances bovine oocyte maturation and early embryonic development in serum supplemented media. In this experiment, to determine the synergistic effect of VEGF with serum components on early embryonic development in vitro in cattle, 1 mg/ml polyvinyl-alcohol (PVA) was replaced with foetal bovine serum (FBS) in maturation and culture media. Bovine oocytes were matured in Synthetic Oviduct Fluid (SOF) supplemented with PVA, PVA+5 ng/ml of VEGF, FBS, or FBS+VEGF. Fertilized oocytes were cultured in the same conditions for 8 days. The development of embryos was examined at 48 h post- insemination and on days 6, 7 and 8. The results were analyzed using repeated measures two- factor ANOVA, in which the effects of VEGF and serum were assigned as two factors. The development rate to 4- to 8-cell embryos at 48 h was significantly higher in the PVA+VEGF group than in the PVA group (44.7% and 31.5%, respectively). However, the highest development rate to 4- to 8-cell embryos was obtained from the FBS+VEGF group (58.8%). On day 8, the blastocyst rates were higher in the PVA+VEGF (22.8%), FBS (32.1%, p<0.05) and FBS+VEGF (42.1%, p<0.05) groups than in the PVA group (17.1%). Two- factor ANOVA of the development rates indicates that VEGF had a significant effect, but had no synergistic effect with serum components on early embryonic development. The results of the present study demonstrate that VEGF improves the in vitro developmental competence of bovine oocytes and/or embryos independent of the effect of serum components.

• BMB Reports
• /
• 제49권3호
• /
• pp.191-196
• /
• 2016

Vascular endothelial growth factor (VEGF) is a key mediator of angiogenesis and critical for normal embryonic development and repair of pathophysiological conditions in adults. Although phospholipase D (PLD) activity has been implicated in angiogenic processes, its role in VEGF signaling during angiogenesis in mammals is unclear. Here, we found that silencing of PLD2 by siRNA blocked VEGF-mediated signaling in immortalized human umbilical vein endothelial cells (iHUVECs). Also, VEGF-induced endothelial cell survival, proliferation, migration, and tube formation were inhibited by PLD2 silencing. Furthermore, while Pld2-knockout mice exhibited normal development, loss of PLD2 inhibited VEGF-mediated ex vivo angiogenesis. These findings suggest that PLD2 functions as a key mediator in the VEGF-mediated angiogenic functions of endothelial cells.

• IMMUNE NETWORK
• /
• 제3권1호
• /
• pp.38-46
• /
• 2003

Background: Platelet-activating factor (PAF) induces nuclear factor $(NF)-{\kappa}B$ activation and angiogenesis and increases tumor growth and pulmonary tumor metastasis in vivo. The role of $NF-{\kappa}B$ activation in PAF-induced angiogenesis in a mouse model of Matrigel implantation, and in PAF-mediated pulmonary tumor metastasis were investigated. Methods: Angiogenesis using Matrigel and experimental pulmonary tumor metastasis were tested in a mouse model. Electrophoretic mobility shift assay was done for the assessment of $NF-{\kappa}B$ translocation to the nucleus. Expression of angiogenic factors, such as tumor necrosis factor $(TNF)-{\alpha}$, interleukin $(IL)-1{\alpha}$, basic fibroblast growth factor (bFGF), and vascular endothelial growth factor (VEGF) were tested by RT-PCR and ELISA. Results: PAF induced a dose- and time-dependent angiogenic response. PAF-induced angiogenesis was significantly blocked by PAF antagonist, CV6209, and inhibitors of $NF-{\kappa}B$ expression or action, including antisense oligonucleotides to p65 subunit of $NF-{\kappa}B$ (p65 AS) and antioxidants such as ${\alpha}$-tocopherol and N-acetyl-L-cysteine. In vitro, PAF activated the transcription factor, $NF-{\kappa}B$ and induced mRNA expression of $TNF-{\alpha}$, $IL-1{\alpha}$, bFGF, VEGF, and its receptor, KDR. The PAF-induced expression of the above mentioned factors was inhibited by p65 AS or antioxidants. Also, protein synthesis of VEGF was increased by PAF and inhibited by p65 AS or antioxidants. The angiogenic effect of PAF was blocked when anti-VEGF antibodies was treated or antibodies against $TNF-{\alpha}$, $IL-1{\alpha}$, and bFGF was co-administrated, but not by antibodies against $TNF-{\alpha}$, $IL-1{\alpha}$, and bFGF each alone. PAF-augmented pulmonary tumor metastasis was inhibited by p65 AS or antioxidants. Conclusion: These data indicate that PAF increases angiogenesis and pulmonary tumor metastasis through $NF-{\kappa}B$ activation and expression of $NF-{\kappa}B$-dependent angiogenic factors.

• Biomolecules & Therapeutics
• /
• 제24권2호
• /
• pp.132-139
• /
• 2016

The endothelial-mesenchymal transition (EndMT) is known to be involved in the transformation of vascular endothelial cells to mesenchymal cells. EndMT has been confirmed that occur in various pathologic conditions. Transforming growth factor ${\beta}1$ (TGF-${\beta}1$) is a potent stimulator of the vascular endothelial to mesenchymal transition (EMT). Aspirin-triggered resolvin D1 (AT-RvD1) has been known to be involved in the resolution of inflammation, but whether it has effects on TGF-${\beta}1$-induced EndMT is not yet clear. Therefore, we investigated the effects of AT-RvD1 on the EndMT of human umbilical vein vascular endothelial cells line (HUVECs). Treatment with TGF-${\beta}1$ reduced the expression of Nrf2 and enhanced the level of F-actin, which is associated with paracellular permeability. The expression of endothelial marker VE-cadherin in HUVEC cells was reduced, and the expression of mesenchymal marker vimentin was enhanced. AT-RvD1 restored the expression of Nrf2 and vimentin and enhanced the expression of VE-cadherin. AT-RvD1 did also affect the migration of HUVEC cells. Inhibitory ${\kappa}B$ kinase 16 (IKK 16), which is known to inhibit the NF-${\kappa}B$ pathway, had an ability to increase the expression of Nrf2 and was associated with the inhibition effect of AT-RvD1 on TGF-${\beta}1$-induced EndMT, but it had no effect on TGF-${\beta}1$-induced EndMT alone. Smad7, which is a key regulator of TGF-${\beta}$/Smads signaling by negative feedback loops, was significantly increased with the treatment of AT-RvD1. These results suggest the possibility that AT-RvD1 suppresses the TGF-${\beta}1$-induced EndMT through increasing the expression of Smad7 and is closely related to oxidative stress.