• 생명과학회지
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• 제13권1호
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• pp.67-72
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• 2003

위염, 위궤양 및 위암의 원인 균인 Helicobacter pylori 가균체 표면에 다량 함유하며 주된 생존 인자이며 병원성 인자인 urease를 대장균에서 발현시키고 이 효소에 대한 항체 또는 기질과의 특이 상호 작용을 이용하여 두 단계의 간편한 방법에 의하여 정제하였다. 우선 anti-H. pylori Urease IgG-Sepharose column과 urea-Sepharose column을 각각 제조하고 DEAE-Sepharose 음이온 교환수지를 통하여 1차 정제한 시료를 각각 적용하고 제반 조건에서 용출시켰다. Anti-H. pylori urease IgG-Sepharose column의 경우에는 urease 시료가 너무 강력하게 결합함으로써 극단적인 pH조건에서만 용출이 가능함이 관찰되었으므로, 100 mM 탄산 완충액(pH 10.5)으로 최종 용출하였을 때 비교적 순수한 효소를 얻었으나, 비활성이 다소 감소된 것으로 나타났다. 한편, urea-Sepharose에 적용시킨 시료는 100 mM urea-HEB 완충액(pH 7.5)으로 비교적 용이하게 용출되어 비교적 높은 순도와 비활성의 urease 효소를 얻을 수 있었으나 이 경우에는 urease의 smaller subunit인 UreA peptide band의 강도가 다소 감소한 것이 관찰되었다.

• 한국식품저장유통학회지
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• 제19권2호
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• pp.308-314
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• 2012

발암성 ethyl carbamate의 전구물질인 요소의 분해를 촉매하는 urease 생산 효모를 분리하고 그 특성을 조사하였다. 우리나라 전통 누룩으로부터 약 223주의 효모를 분리하고 이들 중 urease 활성이 있는 6 균주를 선별하였다. 분리된 6 균주는 ITS I-5.8S-ITS II 영역의 PCR-RFLP 분석 및 계통분석을 통하여 이 균주 모두가 $I.$ $orientalis$ ATCC 24210과 99.8% 이상의 염기서열 상동성을 나타내어 유전적으로 매우 가까운 근연관계에 있음을 확인하였다. 분리 효모 중 uresae 활성이 가장 강한 2 균주 JJ22와 SH10을 선정하여 형태학적, 생리학적 특성을 조사한 결과 $I.$ $orientalis$와 특성이 거의 유사하여 $I.$ $orientalis$로 동정하였다. 이 균주들은 온도 $20-40^{\circ}C$의 넓은 범위에서 생육이 양호하였으며 JJ22의 경우에는 $35^{\circ}C$, SH10의 경우에는 $30^{\circ}C$에서 urease 활성이 가장 높았다. pH의 영향을 조사한 결과 pH 2.0-6.0까지 넓은 범위의 산성 조건에서 생육이 매우 양호하여 호산성 효모로 생각된다. Urease 효소의 활성은 PH 5.0에서 최대치를 나타내었고 pH가 감소하거나 높아짐에 따라 활성이 감소하였다.

• Applied Biological Chemistry
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• 제32권2호
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• pp.109-115
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• 1989

퇴비(堆肥) 및 비료(肥料) 시비방법별(施肥方法別)로 무비구외(無肥區外) 7처리(處理)로 21년간(年間) 시험한 미사식양질계(微砂埴壤質系) 보통답(普通畓)에서 urease, L-glutaminase, phosphatase 활성(活性)을 조사하였다. 총(總) urease 활성(活性)(TUA)과 미생물(微生物) 분필(分泌) urease 활성(活性)(MUA)은 처리간(處理間)에 차이가 심하였으나, 토양(土壤)에 축적(蓄積)된 urease 활성(活性)(AUA)은 처리간(處理間)에 차이가 경미(輕微)하였다. 특히 MUA는 3요소(要素)와 퇴비(堆肥), 3요소(要素)와 규산(硅酸) 시용구(施用區)에서 가장 높았으며 토양중(土壤中) 인산(燐酸), 가리(加里), 규산(硅酸) 함량(含量)과도 고도(高度)의 유의(有意)한 상관관계(相關關係)가 있었다. 총(總) L-glutaminase 활성(活性)(TGA)과 토양(土壤)에 축적(蓄積)된 L-glutaminase 활성(活性)(AGA)은 처리 간에 차이가 심하였으나, 미생물(微生物) 분필(分泌) L-glutaminase 활성(活性)(MGA)은 처리간에 차이가 경미(輕微)하였으며 활성정도(活性程度)는 AGA와 비슷하였다. 또한 AGA는 토양 중 규산(硅酸), 인산(燐酸) 함량(含量)과 pH와는 고도(高度)의 유의(有意)한 상관(相關)이 있었다. 토양 중 phosphatase 활성(活性)은 toluene 처리와 무처리간에 차이가 경미하였으나, 퇴비(堆肥)와 비료(肥料) 시비방법(施肥方法)에 따른 차이는 심하여서 3요소구(要素區), 3요소(要素)+퇴비구(堆肥區), 3요소(要素)+규산구(硅酸區)에서 활성(活性)이 높게 나타났다. 그리고 phosphatase 활성(活性)과 토양 PH, 규산(硅酸), 인산(燐酸), 칼슘 함량(含量)과는 유의성(有意性)이 있었다.

• Korean Chemical Engineering Research
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• 제51권5호
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• pp.591-596
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• 2013

전통식물한약재에 대한 데이터베이스, 한국식물자원에 대한 문헌 및 선행연구 결과에 근거해 선정한 6가지의 식물 한약재(연교, 소목, 형개, 황련, 소엽, 오매)의 에탄올(70%) 추출물 중에서 오매 추출물이 Helicobacter pylori의 urease 활성에 가장 강한 억제력을 나타내었다. 극성이 다른 용매를 사용한 회분식 용매추출과 칼럼 크로마토그래피를 이용한 3단계 분리공정을 통하여 오매 추출물에 함유된 유효성분을 분리 정제하였다. NMR 분석에 의해 정제된 오매 추출물에 함유된 활성성분이 ursolic acid로 확인되었다. 본 실험결과는 오매에 함유된 이 성분이 항생제를 대신하여 H. pylori 제거에 활용될 수 있음을 시사하였다.

• 한국생물공학회:학술대회논문집
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• 한국생물공학회 2005년도 생물공학의 동향(XVI)
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• pp.532-534
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• 2005

6종 한약재의 70% 에탄올 추출물의 Helicobacter pylori의 위내 서식을 도와주는 것으로 알려진 urease의 활성억제능은 오매(Mume Fructus)의 에탄올(70%) 추출물에서 가장 높았으며, 소목 및 연교의 추출물도 높았다. 특히, 오매의 경우 한약재 추출물을 넣지 않은 대조군과 비교하여 90% 이상의 urease 활성억제 효과를 나타내었다.

• KSBB Journal
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• 제19권5호
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• pp.348-351
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• 2004

Ethanol ($70\%$) extract of Caesalpinia sappan L. and Forsythiae suspensa Vahl. showed $84\%$ and $72\%$ of anti-urease activity against Helicobacter pylori, respectively. Among the fraction of Artemisia asiatica Nakai extract using methanol ($80\%$), water, ethyl acetate and butanol ethyl acetate fraction showed $90\%$ of the anti-urease activity.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제20권5호
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• pp.519-526
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• 1992

Bacillus pasteurii의 urease gene이 Escherichia coli HB101에서 발현된 Bacillus성 recombinant urease를 단일단백질으로 정제하고 그 효소학적 특성을, 별도로 정제한 B.pasteurii urease의 그것과 비교검토하였다. B.pasteurii urease gene이 cloning 된 E.coli HB101(pBU11)의 균체파쇄액으로 부터 TEAE-cellulose, DEAE-Sephadex A-50, Sephadex G-150, sephadex G-200 등의 이온교환 크로마토그래피와 gel filtration을 이용하여 E.coli내에서 발현된 B. pasteurii성제하였으며, 또한 B.pasteurii로부타 비활성도 185.2배의 urease를 정제하여 disc gel electrophoresis로 단일 단백으로 정제되었음을 확인하였다. 정제된 두 urease 들의 native 상태의 분자량은 공히 280,000$pm$10,000 정도로 확인되었고, SDS-electrophoresis에의 해 subunit 유무와 분자량을 확인한 결과도 67,000정도의 subunit 4개와 20,000의 subunit 1개로 된 $\alpha$$\beta$ 구조의 동일한 효소단백으로 추정할 수 있었다. Gene donor인 B. pasteurii와 cloning 된 균주 E. coli(pBU11)이 생산한 두 urease의 효소학적 특성을 비교 조사해본 결과 두 urease의 최적반응 pH는 공히 7.5로 나타났으며, pH에 대한 안정성도 두 ureaserk 공히 pH 5.5에서 10.5 사이에서 50% 이하로 활성이 떨어지지 않는 강한 pH 안정성을 보였다. 두 urese의 최적반응의 온도는 $60^{\circ}C$였으며, 비교적 온도에 대한 저항이 강한 효소임을 알았다. 두 urease의 활성에 미치는 금속이온의 영향은 $Ag^{2+}$, $Hg^{2+}$ 등에서 양효소가 모두 강한 저해현상을 받는 반면, $Mn^{2+}$, $Mg^{2+}$ 에서는 다소 촉진되는 현상을 보였다. 효소반응 저해제들의 영향을 조사해 본 결과 p-CMB, acetohydroxamic acid에 두 urease가 모두 강한 저해를 받았다. 두 urease의 $K_m$ 값과 $V_{max}$ 값은 E. coli(pBU11)의 urease는 $4.21{\times}10^{-2}mol/\ell$, $86.96\ell$mol/min 이었고, B. pasteurii urease는 $4.04{\times}10^{-2}mol/\ell$, $160\ell$mol/min이었다. 따라서 B. pasteurii의 urease나 그 urease gene으로 cloning되어 E. coliso에서 발현된 recombinant urease는 분자량이나 효소학적 특서에서 거의 동일한 효소단백임을 알 수 있었다.

• 미생물학회지
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• 제37권2호
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• pp.151-157
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• 2001

위염 및 위궤양, 심이지장궤양, 위암의 주요한 발병 원인균으로 알려져 있는 Helicobacter pylori의 생육을 특이적으로 억제하는 유산균을 선발하기 위해서, 45종의 유산균에 대하여 paper disk법을 이용한 항균 효과, Caco-2세포에 대한 정착능, urease activity법을 이용한 H. pylori 억제능 등을 파악하고, 유산균 배양액과 H. pylori의 동시배양에 따른 요소 분해효소의 활성 변화와 우유 발효능 등을 실험하였다. H. pylori의 생육을 억제하는 물질의 생성 유무를 확인하기 위하여 paper disk법으로 유산균 배양액에 의한 H. pylori의 생육 억제환을 측정한 결과, 28종의 유산균에서 생육 억제환이 형성되었다. 대부분이 유산 생성에 의한 낮은 pH 때문인 것으로 판단되지만, 일부 균종에서는 항균성 물질에 의한 억제환이 형성되었다. 다른 유산균에 비해서 생육 억제환이 가장 큰 Lactobacillus gasseri MK-03 균주가 H. pylori에 대한 항균 활성이 가장 우수한 것으로 나타났다. 항균 활성을 나타낸 28종의 유산균을 대항으로 Caco-2 세포에 대한 정착능을 실험한 결과, 18종의 유산균에서 정착능이 확인되었으며, Bifidobacterium longum MK-26 균주가 가장 우수한 것으로 나타났다. 특히 반응 2시간 전에 미리 Caco-2 세포에 정착시켰을 때, H. pylori의 정착율은 0.105%에서 0.004%로 감소되었다. 한편 요소 분해효소 활성을 저해하여 H. pylori를 억제하는 유산균을 선발하기 위해서 항균활성이 인정되는 28종의 유산균을 대상으로 실험한 결과, 21종의 유산균에서 요소 분해효소 활성의 저해 효과가 나타났으며, 이중에서 Lb. acidophilus MK-07 균주가 가장 우수한 것으로 판명되었다. 따라서 Lb. gasseri MK-03 균주는 항균 활성에서, Lb. acidophilus MK-07 균주는 요소 분해효소의 활성 억제에 의해서, Bif. longum MK-26 균주는 정착능 저해에 있어서 각각 우수한 H. pylori 생육 억제능을 나타냈다. 한편 최종적으로 선발된 3종의 유산균과 대조균주로서 13종의 유산균에 대해서는 우유 배양실험을 실시한 결과, 3종의 선발균주 모두가 발효유 제품에의 응용 적합성을 나타냈다.

• 생명과학회지
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• 제10권6호
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• pp.558-563
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• 2000

Effect of inhibitors on Vibrio parahaemolyticus cell growth and its urease activity was studied. The growth of the bacterium and the enzyme activity were inhibited by the addition of 0.02% p-hydroxymercuric benzoate, $HgCl_2$and $AgNO_3$. However, same concentration of boric acid, thallium acetate and $Pb(NO_3)_2$ did not affect the cell growth but inhibited urease activity by 25%, 29%, and 38%, respectively. Acetohydroxamic acid was the most potent inhibitor on cell growth by inhibiting 40% but did not affect urease activity. To investigate the effect of inhibitors on urease activity, urease was purified and confirmed on SDS-PAGE. The purified urease was inhibited 100% by the addition of 1 mM acetohydroxamic acid and $AgNO_3$but no inhibition was occurred by the addition of the same concentration of thallium acetate. and the addition of 0.01 mM of $HgCl_2$ and acetohydroxamic acid inhibited the purified urease activity by 39% and 24%, respectively. On 0.1 millimolar basic, acetohydroxamic acid and $HgCl_2$inhibited 4 times more active in urease inhibition than p-hydroxymercuric benzoate whereas no inhibition was occurred either thallium acetate or $Pb(NO_3)_2$.

• Applied Biological Chemistry
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• 제22권4호
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• pp.217-220
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• 1979

요소(尿素)를 첨가(添加)한 토양(土壞)과 첨가(添加)하지 않은 토양(土壞)에 함질소(含窒素) 제초제(除草劑) asulam, dimetametryne, linuron을 처리(處理)하여 $25^{\circ}{\pm}1^{\circ}C$에서 항온배양(恒溫培養)하면서 효소(酵素) urease activity의 변화(變化)를 경시적(經時的)으로 검사(檢討)하였던 바 다음과 같은 결과(結果)를 얻었다. 요소(尿素)를 첨가(添加)하지 않은 토양(土壤)에서 dimetametryne 및 linuron 약제(藥劑) 처리(處理)에서는 urease의 활성(活性)이 상당히 높았으며, 배양기간(培養期間)이 경과(經過)하면서 약제처리(藥劑處理) 농도(濃度)가 높음에 따라 효소활성(酵素活性)이 다소(多少) 높게 지속(持續)되어 갔다. 반면(反面) 요소(尿素)를 첨가(添加)한 토양(土壤)에서는 asulam과 dimetametryne 약제(藥劑)에 의(依)해서는 효소활성(酵素活性)이 상당히 억제되었으나 linuron 약제(藥劑)는 이와 다르게 요소단독처리구(尿素單獨處理區)보다 다소(多少) 높은 효소활성(酵素活性)을 보였다.