Lim, Chae Eun;Choi, Jung Nam;Kim, In A;Lee, Shin Ae;Hwang, Yong-Sic;Lee, Choong Hwan;Lim, Jun
Molecules and Cells
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v.25
no.3
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pp.368-375
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2008
Approximately 120 UDP-glycosyltransferases (UGTs), which are classified into 14 distinct groups (A to N), have been annotated in the Arabidopsis genome. UGTs catalyze the transfer of sugars to various acceptor molecules including flavonoids. Previously, UGT71C1 was shown to glycosylate the 3-OH of hydroxycinnamates and flavonoids in vitro. Such secondary metabolites are known to play important roles in plant growth and development. To help define the role of UGT71C1 in planta, we investigated its expression patterns, and isolated and characterized a loss-of-function mutation in the UGT71C1 gene (named ugt71c1-1). Our analyses by quantitative real-time reverse transcriptase polymerase chain reaction (qRT-PCR), microarray data mining, and histochemical detection of GUS activity driven by the UGT71C1 promoter region, revealed the tissue-specific expression patterns of UGT71C1 with highest expression in roots. Interestingly, upon treatment with methyl viologen (MV, paraquat), ugt71c1-1 plants displayed enhanced resistance to oxidative stress, and ROS scavenging activity was higher than normal. Metabolite profiling revealed that the levels of two major glycosides of quercetin and kaempferol were reduced in ugt71c1-1 plants. In addition, when exposed to MV-induced oxidative stress, eight representative ROS response genes were expressed at lower levels in ugt71c1-1 plants, indicating that ugt71c1-1 probably has higher non-enzymatic antioxidant activity. Taken together, our results indicate that ugt71c1-1 has increased resistance to oxidative stress, suggesting that UGT71C1 plays a role in some glycosylation pathways affecting secondary metabolites such as flavonoids in response to oxidative stress.
Background: Ginsenosides are known as the principal pharmacological active constituents in Panax medicinal plants such as Asian ginseng, American ginseng, and Notoginseng. Some ginsenosides, especially the 20(R) isomers, are found in trace amounts in natural sources and are difficult to chemically synthesize. The present study provides an approach to produce such trace ginsenosides applying biotransformation through Escherichia coli modified with relevant genes. Methods: Seven uridine diphosphate glycosyltransferase (UGT) genes originating from Panax notoginseng, Medicago sativa, and Bacillus subtilis were synthesized or cloned and constructed into pETM6, an ePathBrick vector, which were then introduced into E. coli BL21star (DE3) separately. 20(R)-Protopanaxadiol (PPD), 20(R)-protopanaxatriol (PPT), and 20(R)-type ginsenosides were used as substrates for biotransformation with recombinant E. coli modified with those UGT genes. Results: E. coli engineered with $GT95^{syn}$ selectively transfers a glucose moiety to the C20 hydroxyl of 20(R)-PPD and 20(R)-PPT to produce 20(R)-CK and 20(R)-F1, respectively. GTK1- and GTC1-modified E. coli glycosylated the C3-OH of 20(R)-PPD to form 20(R)-Rh2. Moreover, E. coli containing $p2GT95^{syn}K1$, a recreated two-step glycosylation pathway via the ePathBrich, implemented the successive glycosylation at C20-OH and C3-OH of 20(R)-PPD and yielded 20(R)-F2 in the biotransformation broth. Conclusion: This study demonstrates that rare 20(R)-ginsenosides can be produced through E. coli engineered with UTG genes.
Insects are known to live at wide range of temperature, but can not survive when they are exposed to over $40^{\circ}C$ or below supercooling point. The larvae of Helicoverpa assulta have been reared at high ($35^{\circ}C$), low (3 to $10^{\circ}C$), and room temperature ($25^{\circ}C$; control). To identify stress-related genes, the transcriptomes of fat body have been analyzed. Genes such as cuticular proteins, fatty acyl ${\Delta}9$ desaturase and glycerol 3 phosphate dehydrogenase were up-regulated whereas chitin synthase, catalase, and UDP-glycosyltransferase were down-regulated at low temperature. Superoxide dismutase, metallothionein 2, phosphoenolpyruvate carboxykinase and trehalose transporter have been up-regulated at high temperature. In addition, expressions of heat shock protein and glutathione peroxidase were increased at high temperature, but decreased at low temperature. These temperature-specific expressed genes can be available as markers for climate change of insect pests.
Proceedings of the Korean Society of Crop Science Conference
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2017.06a
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pp.168-168
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2017
Drought conditions during cultivation reduce agricultural production yield less than a theoretical maximum yield under normal condition. Plant specific NAC transcription factors in rice are known to play an essential roles in stress resistance transcriptional regulation. In this study, we report the rice (Oryza sativa L japonica) NAM, AFTF and CUC transcription factor OsNAC17, which is predominantly induced by abiotic stress in leaf, was contribute to the drought tolerance mediated reactive oxygen species (ROS) in transgenic rice plants. Constitutive (PGD1) promoter was introduced to overexpress OsNAC17 and produced the transgenic PDG1:OsNAC17. Overexpression of OsNAC17 throughout the whole plant improved drought resistance phenotype at the vegetative stage. Morphological characteristics such as grain yield, grain filling rate, and total grain weight improved by 22~64% over wild type plants under drought conditions during the reproductive stage. The improved drought tolerance in transgenic rice was involved in reducing stomatal density up to 15% than in wild type plants and in increasing reactive oxygen species-scavenging enzyme. DEG profiling experiment identified 119 up-regulated genes by more than twofold (P<0.01). These genes included UDP-glycosyltransferase family protein, similar to 2-alkenal reductase (NADPH-dependent oxireductase), similar to retinol dehydrogenase 12, Lipoxygenase, and NB-ARC domain containing protein related in cell death. Furthermore, OsNAC17 was act as a transcriptional activator, which has an activation domain in C-terminal region. These result demonstrate that the overexpression of OsNAC17 improve drought tolerance by regulating ROS scavenging enzymes and by reducing stomatal density
Ahn, Mi Young;Hwang, Jae Sam;Yun, Eun Young;Kim, Min-Ji;Park, Kun-Koo
Toxicological Research
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v.31
no.2
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pp.173-180
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2015
Extract from Gryllus bimaculatus crickets inhibits oxidation at the DNA level, with reduced production of 8-hydroxy-2'-deoxyguanosine (8-OHdG). Microarray analyses were performed with a rat 28K cDNA clone set array to identify the gene expression profiles of aged (10 months old) Wistar Kyoto rats treated for one month with 100 mg/kg G. bimaculatus ethanol extract to assess the effects. The extract produced a meaningful anti-edema effect, evident by the inhibition of creatinine phosphokinase activity. The weights of abdominal and ovarian adipose tissues were reduced and the proportion of unsaturated fatty acids in adipose tissues was increased in an extract dose-dependent manner. Compared with untreated control rats, rats treated with the extract displayed the upregulation of 1053 genes including Fas (tumor necrosis factor receptor superfamily, member 6), Amigo3 (adhesion molecule with an immunoglobulin-like domain), Reticulon 4, 3-hydroxy-3-methylglutaryl-coenzyme (Hmgcr; a reductase), related anti-fatigue (enzyme metabolism), and Rtn antioxidant, and the downregulation of 73 genes including Ugt2b (UDP glycosyltransferase 2 family), Early growth response 1, and Glycoprotein m6a. Data suggest that G. bimaculatus extract may have value in lessening the effects of aging, resulting in a differential gene expression pattern indicative of a marked stress response and lower expression of metabolic and biosynthetic genes.
Isorhamnetin 3-O-glucoside, a member of the flavonol group, has been reported to be effective for inflammatory and ulcer, as well as to alleviate diabetic complications such as neuropathy, nephropathy and retinopathy. Isorhamnetin 3-O-glucoside has been extracted from several plants. Biotransformation is a valuable tool, which is used to produce value-added chemicals with inexpensive compounds. To synthesis isorhamnetin 3-O-glucoside from quercetin, two genes (PGT E82L and ROMT-9) were introduced into Escherichia coli, respectively. In order to synthesis isorhamnetin 3-O-glucoside from quercetin, a co-culture fermentation system was developed by optimizing the medium and temperature for biotransformation, the cell mix ratio, Isopropyl-β-ᴅ-thiogalactoside induction time, and quercetin feed concentration. Finally, isorhamnetin 3-O-glucoside was biosynthesized up to 181.2 mg/L under the optimized biotransformation condition, which was higher 4.7 times than previously reported (39.6 mg/L).
Background: Glycosylation of natural compounds increases the diversity of secondary metabolites. Glycosylation steps are implicated not only in plant growth and development, but also in plant defense responses. Although the activities of uridine-dependent glycosyltransferases (UGTs) have long been recognized, and genes encoding them in several higher plants have been identified, the specific functions of UGTs in planta remain largely unknown. Methods: Spatial and temporal patterns of gene expression were analyzed by quantitative reverse transcription (qRT)-polymerase chain reaction (PCR) and GUS histochemical assay. In planta transformation in heterologous Arabidopsis was generated by floral dipping using Agrobacterium tumefaciens (C58C1). Protein localization was analyzed by confocal microscopy via fluorescent protein tagging. Results: PgUGT72AL1 was highly expressed in the rhizome, upper root, and youngest leaf compared with the other organs. GUS staining of the promoter: GUS fusion revealed high expression in different organs, including axillary leaf branch. Overexpression of PgUGT72AL1 resulted in a fused organ in the axillary leaf branch. Conclusion: PgUGT72AL1, which is phylogenetically close to PgUGT71A27, is involved in the production of ginsenoside compound K. Considering that compound K is not reported in raw ginseng material, further characterization of this gene may shed light on the biological function of ginsenosides in ginseng plant growth and development. The organ fusion phenotype could be caused by the defective growth of cells in the boundary region, commonly regulated by phytohormones such as auxins or brassinosteroids, and requires further analysis.
Kaempferol 3-O-galactoside (Trifolin), a member of the flavonol group, has been reported to have anticancer effects against promyelocytic leukemia, histocytic lymphoma, skin melanoma and lung cancer. Trifolin has been extracted and used from several plants, but the extraction process is complicated and the final yield is low. Biotransformation is an alternative tool to produce high value-added chemicals from inexpensive compounds. To synthesis trifolin from naringenin, three genes (PeFLS and OsUGE-PhUGT) were introduced into Escherichia coli, respectively. In order to synthesis trifolin from naringenin, a co-culture fermentation system was established by optimizing the cell concentration, biotransformation temperature and medium, isopropyl-β-D-thiogalactoside (IPTG) concentration, substrate supply concentration, and recombinant protein induction time. The established optimal conditions for trifolin production were a 3:1 ratio of BL-UGTE to BL-FLS, induction of recombinant protein at 25 ℃ for 4 h after addition of 2.0 mM IPTG, biotransformation at 30 ℃, and supply of 300 μM naringenin. Through the optimized co-culture fermentation system, trifolin was biosynthesized up to 67.3 mg/L.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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