Hydrogel coated ring shaped ocular inserts (containing the antibiotic, tylosin tartrate) were used in an evaluation of the effectiveness of polymeric ocular drug release devices for treating infectious bovine keratoconjunctivitis. The in vivo experiments represent the first experiments using hydrogel ocular inserts containing an antibiotic for treating infectious bovine keratoconjunctivitis. In the infection tests, ten calves. were challenged with $2.4{\times}10^8{\sim}1.6{\times}10^9$ Moraxella bovis (a bacterium) colonies per eye following two ten minute ultraviolet radiation eye preconditioning exposures. Ninety five percent of the eyes (19 of 20 eyes) were successfully infected by this method. All infected eyes were monitored for the presence of the bacteria quantitiatively, and clinical observations were made for 14 days. The test was performed by three consecutive steps: 1) inoculation with 2 ultraviolet (UV) radiations, 2) growth of bacterial colonies and 3) treatment with medicated ring-shaped devices. The first. bacteriological measurements after 2 UV exposures were performed at day 3 of the tests. At day 7 after inoculation of both eyes of a calf with M. bovis, a medicated or a non-medicated ring-shaped device was inserted into each eye of a calf. The eye receiving the non-medicated ring was taken as a control for comparison with the eye that received a medicated ring. During the next 7 day period following a medicated ring insertion, the number of bacteria in the treated eyes dropped dramatically to negligible levels (0 to 30 colony forming units/swab), while the control eyes which received a non-medicated ring still exhibited a relatively high number of bacteria ($10^3\;to\;10^6$ colony forming units/swab). The number of bacteria was significantly reduced by the antibiotic released from the medicated ocular insert.
Bacterial contamination is an unavoidable finding of the semen collection process in boar and can lead in deleterious effects on semen quality and longevity if left uncontrolled. The purpose of this study is to identify the bacteria in extended boar semen and to select the effective antimicrobials to control of the contaminants. Of 116 extended boar semen samples submitted from eight AI centers in Korea, 39 (33.6%) samples were positive for bacterial contamination. Among 39 contaminated semen, most of them (84.6%) were contaminated with one or two bacterial species and there was no significant difference between two age groups $(\leq\;24\;and\;>\;24\;month\;old).$ Stenotrophomonas maltophilia (n = 18) was the most predominant bacterium followed by Elizabethkingia meningoseptica (n = 12), Sphingomonas paucimobilis (n = 12), Myroides spp. (n = 5), Ochrobactrum anthropi (n = 3), and so on. Enrofloxacin (72.9%), florfenicol (72.9%), bacitracin (49.2%) and tylosin (49.2%) showed higher sensitivity compared with penicillin (13.6%) or aminoglycosides (6.8%-18.6%). Brucella spp., Leptospira spp., Mycoplasma hyopneumoniae, Mycoplasma hyorhinis, Mycobacterium tuberculosis complex were not detected in semen by PCR.
먹는물(정수) 중에 잔류하는 버지니아마이신을 비롯한 macrolide 계열 의약물질 3종과 시메티딘을 동시에 정량 및 정성 분석하는 방법을 확립하였다. HLB 카트리지를 사용하여 분석물질을 추출/정제 및 농축한 후, HPLC/ESI-MS/MS를 이용하여 4종의 물질들을 효과적으로 분리하고 감도 좋게 검출할 수 있었다. 정량분석을 위해서 0.01~2.0 ng/mL 범위에서 $r^2$=0.995이상의 높은 직선성을 나타내는 검량선을 얻었으며, 시메티딘(37.7~48.1%)을 제외한 macrolide 계열 3종 의약물질은 64.7~118.1% 범위의 양호한 회수율을 나타내었다. 바탕 정수에 소량 첨가하여 얻은 분석방법의 검출한계와 정량한계는 각각 1.6~74.8 pg/mL 와 5.5~249.7 pg/mL 범위의 높은 감도를 나타내었다.
국내에서 많이 사용되고 있는 제2세대 quinolone 항생제인 norfloxacin(NFX)에 대한 약역학적인 특성을 구명하기 위하여 국내에서 분리된 동물유래 병원성 세균에 대하여 시험관내에서 실험을 수행하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 즉, E coli(n=89) 대한 NFX의 $MIC_{50}$와 $MIC_{90}$는 공히 0.02g/ml이었으며, Streptococcus spp.(n=36)에 대한 NFX의 $MIC_{50}$는 2g/ml 그리고 $MIC_{90}$는 4g/ml로 나타났다. Salmonella spp.(n=56)에 대한 NFX의 $MIC_{50}$와 $MIC_{90}$ 모두 0.2g/ml로 강한 항균력을 보였으며, Streptococcus spp.(n=24)에 대한 NFX의 $MIC_{50}$는 2g/ml 그리고 $MIC_{90}$가 4g/ml로 나타났다. Bacillus spp.(n=34)는 NFX의 $MIC_{50}$와 $MIC_{90}$는 모두 0.4g/ml으로서 대부분의 병원성 세균에 대해서 $MIC_{50}$와 $MIC_{90}$치가 동일하든지 또는 매우 비슷한 수치를 보여주었다. 그러나 NFX는 혐기성세균인 Clostridium spp.(n=34)에 대해서는 항균력이 매우 낮았다. 현재 수의임상에서 항균제 병용요법이 많이 응용되고 있는 것을 고려하여 NFX와 다른 항생물질간의 분획억제농도 (FICs)를 E coli 88ac을 시험균주로 하여 실험한 결과, NFX와 colistin과 병용할 때 FIC 값이 0.38로서 상승작용을 그리고 gentamicin, trimethoprim, amikacin, penicillin 및 tylosin과의 병용시 FIC 값이 각각 0.52, 0.56, 0.63, 1.00 및 1.02로서 상가작용을 보여주었으며, tetracyclin과의 병용시의 FIC값은 1.49로서 길항작용을 나타냄을 알 수 있었다. 한편 실제 항균제의 임상적용시 매우 주요한 요소인 항균활성후 저농도유효성(PAE)을 알아보기 위하여 E coli AB1157을 시험균주로 측정한 결과 PAE은 0.90~1.02 시간 그리고 S aureus R-209에 대해서는 PAE가 1.58~1.99 시간으로서 그람음성균 및 그람양성균 모두에 대해서 긴 PAE를 갖고 있음을 알 수 있었다.
Veterinary antibiotics (VAs) has been used to treat animal disease and to increase animal weight as growth promoter. However, abused usage of VAs can cause production of antibiotic resistance genes (ARGs) in the environment and additionally, residual of VAs in soil can be transferred into crops. Therefore, main objective of this research was to examine bioaccumulation of VAs in sprouts (red cabbage, Brassica Olearacea L. var. Capitata f. rubra and red radish, Raphanus sativus) with hydroponic method. Total of 7 VAs in 2 different classes of VAs (tetracyclcines: tetracycline, oxytetracycline, chlortetracycline, sulfonamides: sulfamethoxazole, sulfamethazine, sulfamethiazole, macrolides: tylosin) were evaluated and experiment was conducted with solid phase extraction (SPE)/high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry (HPLC/MS/MS). Initial spiked concentration of 7 VAs was $5mg\;L^{-1}$ and cultivation period was 8 days. Result showed that growth of sprouts was inhibited about 23-27% when VAs was introduced. Amount of bioaccumulated VAs was also differed depending on class of VAs. The highest amount of bioaccmulated VAs was tetracycline and sulfamethoxazole in each class with a concentration of 4.05, $7.73mg\;kg^{-1}$ respectively. Calculated transfer ratio of VAs into crops was also ranged 0.38-54.27%. Overall, bioaccumulation of VAs in crops can be varied depending on crop species and class of VAs. However, further research should be conducted to verify bioaccumulation of VAs in crops in the soil environment.
Type II제한효소 Stu I을 순수정제하고 그 효소적 특성을 연구하였다. 100g(we weight)의 Streptomyces tubercidicus(ATCC 25502)로부터 얻은 crude extranct를 ammonium sulfate fractionation한 후, DEAE-Sephadex(A-50), QAE-Sephadex(A-50) 그리고 Heparin-agarose의 순서로 column chromatography를 수행하여 1,2mg의 비특이성 nuclease가 없는 Stu I 제한효소를 얻었다. 이 시료에 포함되어 있는 다른 오염 단백질은 Sephadex G-100 column으로 gel filtration 하여 제거함으로써, 순수한 Stu I 단백질을 얻을 수 있었다. 정제된 Stu I 제한효소는 10% SDS-polyacrylamide gel electrophoresis 결과 한 개의 band로 나타났으며, 그 분자량은 34,000 $\pm$ 1,000 dalton이었다. 이 효소는 $Mg^{2+}$이온 존재하에 중성의 pH(7.0-8.0)에서 최대의 활성을 나타내었다. NaCl은 이 효소의 활성에는 필요하지 않았다.
Actinobacillus (A.) pleuropneumoniae is the etiological agent of a porcine pleuropneumonia and have great economic importance to the global swine industry. For recent 5 years, a total of 50 pleuropneumonia cases of 24 pig farms were selected from pig lungs submitted to the College of Veterinary Medicine, Jeju National University using polymerase chain reaction (PCR) analysis. Collected lungs were fixed in 10% neutral phosphate-buffered formalin and processed for histological examination. Serotypes of A. pleuropneumoniae in pneumonic lesions were analyzed by PCR methods. And the antimicrobial susceptibility of A. pleuropneumoniae isolates was determined by a disc diffusion test. Grossly, unilateral distribution of hemorrhagic or necrotic pneumonic lesions was more common than bilateral distribution in lungs. In peracute or acute cases, histopathologic changes were characterized by necrosis, hemorrhage, neutrophils infiltration, vascular thrombosis, widespread edema and fibrinous exudates. Following the acute response, macrophage infiltration, marked fibrosis around zonal necrotic areas, and marked fibrous pleuritis were characteristic in chronic cases. A total of 50 pleuropneumonia were associated with A. pleuropneumoniae serotype 5 in 46 cases (92%), serotype 2 in 3 cases (6%), and both 2 and 5 in 1 case (2%). More than 90% of collected isolates showed high sensitivity to ceftiofur, amoxicillin, and colistin. However, ampicillin, penicillin, and tylosin showed low susceptibility. The results of this study demonstrated that A. pleuropneumoniae serotype 5 was predominant at porcine pleuropneumonia cases in Jeju.
A total of 140 weaning pigs ((Landrace${\times}$Yorkshire)${\times}$Duroc, BW = $6.47{\pm}0.86$ kg) were used in a 5-wk growth trail to determine the effects of phytoncide supplementation on growth performance, nutrient apparent total tract digestibility (ATTD), blood profiles, diarrhea scores and fecal microflora shedding. Pigs were assigned randomly by BW into 5 treatments, dietary treatments were: i) NC, basal diet; ii) PC, NC+0.05% tylosin; iii) EO, NC+0.1% essential oil; iv) PP, NC+0.2% PP (phytoncide with 2% citric acid), and v) PA, NC+0.2% PA (phytoncide). Each treatment had 7 replicate pens with 4 pigs per pen. All pigs were housed in pens with a self-feeder and nipple drinker to allow ad libitum access to feed and water throughout the experimental period. During 0 to 2 wks, supplementation with essential oil and PA decreased (p<0.05) G/F compared with the other treatments. During 2 to 5 wks, supplementation with PA led to a higher (p<0.05) G/F than the other treatments. At 2 wk, ATTD of dry matter (DM) and gross energy (GE) in EO treatment were decreased (p<0.05) compared with NC treatment. Dietary PC treatment improved (p<0.05) ATTD of DM and E compared with the CON group, and PA and PP treatments showed a higher (p<0.05) ATTD of E than that in NC treatment. Pigs fed phytoncide (PA and PP) had a greater (p<0.05) ATTD of DM than those of NC and EO treatments at 5 wk. Moreover, supplementation with phytoncide elevated (p<0.05) the concentration of immunoglobulin (IgG) in blood at 2 wk. The inclusion of EO, PP and PA treatments showed a greater (p<0.05) amount of fecal Lactobacillus compared with CON group. However, no difference (p>0.05) was observed in diarrhea scores among treatments. In conclusion, phytoncide can elevate feed efficiency, nutrient digestibility, and improve the fecal Lactobacillus counts in weaning pigs. Our results indicated that the phytoncide could be used as a good antibiotics alternative in weaning pigs.
An epidemiologic study on pleuropneumonia in the slaughter pigs(Chonan and Asan area, Chungnam province, Korea) during the period of January 1994 through December 1995 was conducted. Isolation of A pleuropneumoniae was attempted in 425 pigs with pneumonic lesions. Biochemical properties, antimicrobial susceptibility, serotypes and pathogenicity of isolated A pleuropneumoniae were investigated. In addition, outer membrane protein(OMP) of the Isolates were extracted to determine its properties and immunogenicity in both mice and piglets The results obtained through this study were summarized as followed ; 1. Of 3, 395 slaughter pigs, pleuropneumonia was observed in 425 pigs(10.6%). A pleuropneumoniae was isolated from 22 pigs(5.2%) out of 425 pigs with pneumonic lesions. The biochemical properties of all isolates were same as those of reference A pleuropneumoniae strain. Among 22 isolates, 9, 1 and 12 isolates were serovar 2, 3 and 5, respectively. 2. The results of antimicrobial susceptibility test revealed that the isolates showed high susceptibility to ciprofloxacin and cephalothin, moderate susceptibility to amikacin, gentamicin, kanamycin and streptomycin, and low susceptibility to erythromycin, tylosin and sulfadimethoxin. 3. The isolates were varied in pathogenicity to mice. Median lethal dose of LE9402(serovar 2) and LE9511(serovar 5) were $9.2{\times}10^7$ CFU and $2.8{\times}10^7$%CFU, respectively. Specific pneumonic lesions were observed from the infected mice with clinical signs. Bacteria recovery rate was high in the lung, but low In heart blood and tracheas. 4. Serovar 2 was found to be more pathogenic than serovar 5 in guinea pig. Mortality on guinea pigs inoculated with serovar 2($5.4{\times}10^8-5.4{\times}10^6$CFU) and serovar 5($2.8{\times}10^8-2.8{\times}10^6$ CFU) was 20~40% and 40~80%, respectively. A severe hemorrhagic lesions and focal pneumonic lesions were observed from dead guinea pigs. Bacteria recovery rate was relatively higher in the lung than that of other organs. 5. In the SDS-PAGE analysis, OMP-enriched fractions of both isolates and reference strains contain common peptide bands equivalent to molecular weight of 17, 27, 42, 52 and 95Kd. In addition to common peptide bands, the bands which are specific to each isolate were also observed. The profiles of Sephadex G25 fractions showed 3 major peaks. The common peptide bands which were observed by SDS-PAGE of the crude OMPs were found in the peaks 1 and 2. 6. The OMPs extracted from serovar 2(LE9402) and serovar 5(LE9511) provided high level of protection in mice(70~80%) and pigs(100%). All animals inoculated with OMPs were seroconverted, showing micro-agglutination titer of 640 to 1280.
Release of veterinary antibiotics (VSs) to agricultural environment through application of animal manure and/or animal manure-based composts to soils is of concern. The current study was conducted to examine decline of VAs during composting the chicken manure. For this, antibiotics free chicken manure (20 kg) and sawdust (10 kg) were added to the bench-scale composting apparatus and then the mixed material was spiked simultaneously with three VAs (chlortetracycline, CTC; sulfamethazine, SMZ; tylosin, TYL) at two different levels (10 and $20mg\;kg^{-1}$). Then the decline of VAs was determined using Charm II system during 53 composting period. For comparison, composting only chicken manure was included at VAs concentration of $10mg\;kg^{-1}$. During composting, the concentration of all three different VAs declined below the prospective guideline values ($0.8mg\;kg^{-1}$ for CTC, $0.2mg\;kg^{-1}$ for SMZ, and $1.0mg\;kg^{-1}$ for TYL) except CTC at $20mg\;kg^{-1}$ spiking when the chicken manure was composted together with sawdust. Interestingly, CTC at $10mg\;kg^{-1}$ spiking appeared to be declined under the guideline value without sawdust while SMZ was resistant to be declined without sawdust. Unlike CTC and SMZ, TYL showed immediate decline right after spiking TYL to composting materials regardless the spiking concentration and existence of sawdust. Appropriate composting procedure of chicken manure was able to decline the residual VAs in the manure below the prospective guideline value and the importance of organic substances on this decline was perceived.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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