• 한국발생생물학회지:발생과생식
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• 제5권1호
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• pp.17-21
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• 2001

생쥐 초기배아의 체외배양 시 부화에 관련된 단백질 분해효소의 발현 시기와 존재부위를 알아보고 trypsin억제제 benzamidine을 배양액에 첨가하여 부화효소의 역할을 살펴보았다. 부화 효소로 제안되고 있는 trypsin 유사효소의 발현부위를 확인하기 위해 rhodamine이 부착되어 있는 Trypsin subsfrate probe를 이용하여 형광염색하였다. 생쥐 배아의 발생과정에서 trypsin 유사효소의 발현은 후기 상실 배아에서부터 관찰되었으며, 포배기 배아에서는 영양배엽 표면에서 전체적으로 관찰되었다. 특히, 부화가 진행되고 있는 배아의 부화 개시 부위 (blebbing)에서 그 염색 정도가 상대적으로 강함을 확인할 수 있었다. 생쥐 4-세포기 배아의 체외배양 시 배양액에 trypsin 억제제인 benzamidine을 ImM 농도로 첨가하였을 때 포배기로의 발생률은 영향을 받지 않았지만, 부화율은 15.8%로 대조군의 83.0%에 비해 유의하게 (p<0.02) 낮게 나타났다. 배아의 발생단계에 따라 5mM의 benzamidine을 12시간 동안 처리한 경우 부화율이 8.7%로 대조군의 83.0%에 비해 유의하게(p<0.01)낮았다. 결론적으로, trypsin 유사효소는 초기 포배기에서부터 발현되기 시작하며 특히, 후기 포배기에서 그 효소의 작용이 부화 과정에 커다란 영향을 미치는 것이 확인되었다. 또한 배양중 부화 과정에서는 배아 자체에서 분비되는 trypsin 유사효소의 역할만으로도 부화할 수는 있지만 생체 내에서는 배아와 자궁내막 상피와의 상승적 상호 작용에 의해 부화과정이 더 활발히 진행되는 것으로 생각된다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제20권5호
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• pp.534-542
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• 1992

Streptomyces S-217 균주가 생산하는 trypsin 저해물질의 생산 및 정제조건을 검토하였다. 저해물질의 생산은 500ml 후라스크의 배양에서 2 mannitol, 0.9, peptone의 배지와 초기 pH는 7.0 배양시간은 66시간 및 온도30$^{\circ}C$의 조건에서 제일 높았으며, 무기염의 효과는 크게 영향이 없었다. 정제는 column chromatography와 HPLC에 의하여 정제하였다. 정제된 trypsin 저해물질의 초대파장은 $\lambda_{max}$ 215nm이었고, 용해도는 물에는 95, methanol과 dimethylsulfoxide에서는 70% 및 75%이었다.Trypsin 저해물질 복합체 형성시간은 10분 정도였으며, trypsin 효소의 50% 저해농도($IC^{50}$)는 15$\mu$g/ml 이었다. 저해물질의 pH 안정성은 $100^{\circ}C$ 10분간 열처리시 pH 5~9에서 100% 활성이 유지되었으며, 산성측보다 알칼리측이 안정하였고, 열안정성은 $100^{\circ}C$, pH7.0에서 1시간 동안 50% 활성을 유지하였다.

• 한국수산과학회지
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• 제28권5호
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• pp.557-568
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• 1995

어류의 사후 초기의 변화를 육 및 장기조직중에 분포하는 단백질분해효소의 작용과 관련하여 검토할 목적으로 멸치의 육 및 장기에서 분리한 cathepsin L과 chymotrypsin 및 trypsin의 단백질 기질에 대한 특성과 근원섬유단백질에 대한 분해능을 전기영동적으로 분석하여 다음의 결론을 얻었다. 이들 세 효소의 casein에 대한 친화도는 유사하였고, 근원섬유단백질에 대한 친화도는 casein에 대한 친화도보다 높았다. 멸치와 방어의 근원섬유단백질에 대한 cathepsin L과 chymotrypsin의 활성은 trypsin보다 훨씬 높게 나타났다. $0-25\%$까지의 식염농도에서 세 효소의 단백질분해활성은 식염의 농도에 반비례하였으며, 식염의 공존상태에서 세 효소는 casein 보다 근원섬유단백질에 대하여 높은 활성을 나타내었다. 관원섬유단백질의 효소 분해시에 cathepsin L은 chymotrypsin과 trypsin에 비하여 염농도와 온도에 의한 영향이 적었다. 따라서, 멸치의 사후변화와 젓갈 숙성 중의 자가소화는 trypsin보다는 cathepsin L과 chymotrypsin의 단백질분해활성이 더욱 깊이 관여할 것으로 판단된다.

• 생명과학회지
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• 제12권2호
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• pp.151-157
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• 2002

한방재료의 하나인 택사(Alismatis Rhizoma, AR)로부터 단백성 trypsin inhibitor(TI)를 분리, 정제하여 특성을 조사하였다. 정제과정은 0-80.% 포화 황산암모늄을 이용한 염석법, DEAE-cellulose ion exchange chromatography, Sep-hadex G-150 chromatography 등을 이용하였다. 정제된 ARTI의 분자량을 gel filtration과 SDS-PAGE 한 결과 모두 약 23,000 Da으로 나타나 monomer로 되어 있는 것으로 나타났다. 온도안정성에 있어 0-6$0^{\circ}C$에서는 안정하였으나 그 이상의 온도에서는 약 35%가지 안정성이 떨어졌다. ARTI와 상품화된 soybean kunitz inhibitor의 저해능을 비교해 본 결과 ARTI 및 soybean inhibitor 각각의 농도가 0.071 $\mu$M, 1.7 $\mu$M일 때 0.025 g/$m\ell$ trypsin활성을 50% 정도 저해하는 것으로 나타났다. ARTI의 trypsin의 가수분해반응에 대한 저해형태는 비경쟁적 저해형인 것으로 나타났으며 km값은 0.81 $\mu$M이었다.

• 한국임상수의학회지
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• 제25권5호
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• pp.317-323
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• 2008

Canine trypsin-like immunoreactivity (cTLI), which is a mirror of the concentration of trypsin and trypsinogen, is a pancreas-specific enzyme and a suitable marker for canine pancreatitis and especially exocrine pancreatic insufficiency (EPI). To develop the immunochromatographic test kit, monoclonal antibodies that recognize cTLI were prepared. Anionic trypsin, cationic trypsin, and chymotrypsin from canine pancreas were successfully purified to homogeneity, using ammonium sulfate fractionation and benzamidine-affinity chromatography. The purification fold for anionic trypsin was 108 times when compared with that of the homogenation of pancreas. The molecular weights by SDS-PAGE analysis were approximately 23 kDa for chymotrypsin and approximately 20 kDa for cationic trypsin and anionic trypsin, respectively. Using the purified trypsin-like proteins, ten hybridomas which secret canine trypsin-specific monoclonal antibody were prepared. Klotz plot indicated that hybridomas, 5G2H10G4 and 2F4A11, have high affinity constant (Ka) of $4.1\;{\times}\;10^{9}$ and $1.8\;{\times}\;10^{9}$, respectively. Especially, 5F9H3 showed the cationic typsin-specific binding pattern and its Ka was determined to $4.5\;{\times}\;10^{9}$. The development of immunochromatographic test kit using these monoclonal antibodies against cTLI will be very useful in the diagnosis of canine EPI or canine pancreatitis.

• 약학회지
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• 제52권1호
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• pp.79-84
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• 2008

Alismatis Rhizoma has been used as diuretics and antiphlogistics in the Chinese oriental medicine. A trypsin inhibitor was isolated from Alismatis Rhizoma using DEAE ion exchange column, trypsin affinity column, and FPLC chromatography, and its activity and characteristics were studied. The purifed Alismatis Rhizoma trypsin inhibitor (ARTI) was estimated to be about 22 kDa. The sequence determination on N-terminal amino acid residues and 84 amino acid residues has been completed, yet no homology has been found with trypsin inhibitors reported at NCBI. ARTI did not show inhibitory activities on chymotrypsin and elastase, however it exhibited a significant inhibitory activity on bovine trypsin, and formed a complex with rat liver 10-formyltetrahydrofolate dehydrogenase.

• Biomolecules & Therapeutics
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• 제5권2호
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• pp.158-164
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• 1997

To investigate the effects of trypsin inhibitors, aprotinin and urinary trypsin inhibitor (UTI), on the cute pancreatitis, this study was carried out in dogs of acute pancreatitis induced by oleic acid (0.28 mg/kg). Administration with aprotinin and UTI seemed to have a therapeutic effect on the clinical sign, ultrasonographic finding, histopathologic finding. But in amylase and lipase activity, there were no significant differences among three groups.

• Bulletin of the Korean Chemical Society
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• 제33권10호
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• pp.3233-3240
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• 2012

We demonstrated the combined applications of online protein digestion using trypsin immobilized enzyme reactor (IMER) and dual tandem mass spectrometry with collisionally activated dissociation (CAD) and electron transfer dissociation (ETD) for tryptic peptides eluted through the trypsin-IMER. For the trypsin-IMER, the organic and inorganic hybrid monolithic material was used. By employing the trypsin-IMER, the long digestion time could be saved with little or no sacrifice of the digestion efficiency, which was demonstrated for standard protein samples. For three model proteins (cytochrome c, carbonic anhydrase, and bovine serum albumin), the tryptic peptides digested by the IMER were analyzed using LC-MS/MS with the dual application of CAD and ETD. As previously shown by others, the dual application of CAD and ETD increased the sequence coverage in comparison with CAD application only. In particular, ETD was very useful for the analysis of highly-protontated peptide cations, e.g., ${\geq}3+$. The combination approach provided the advantages of both trypsin-IMER and CAD/ETD dual tandem mass spectrometry applications, which are rapid digestion (i.e., 10 min), good digestion efficiency, online coupling of trypsin-IMER and liquid chromatography, and high sequence coverage.

• Natural Product Sciences
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• 제10권5호
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• pp.211-216
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• 2004

Citrus unshiu (Rutaceae) has long been known as an anti-inflammatory and anti-allergic agent. In the present study, the inhibitory effect of CUWE (Citus unshiu water extract) on the production of $TNF-{\alpha}$ and tryptase was examined. In addition, a possible mechanism for the inhibition of trypsin-stimulated human leukemic mast cell-1 (HMC- 1 ) activation was determined. To do so, $TNF-{\alpha}$ production from the HMC-1 cells that were stimulated by trypsin (100 nM) in the presence or absence of CUWE $(10,\;100,\;and\;100\;{\mu}g/ml)$ was measured by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and reverse transcription-PCR. The tryptase production was evaluated by reverse transcription-PCR. Extracellular signal-regulated kinase (ERK) activation was analyzed by Western blot. Trypsin activity was measured by using Bz-DL-Arg-p-nitroanilide (BAPNA) as substrate. Results showed that the CUWE inhibited production of both $TNF-{\alpha}$ and tryptase from the trypsin-stimulated HMC-1 in a dose-dependent manner. The CUWE a1so inhibited the ERK phosphorylation and trysin activity. These results indicate that the CUWE had an inhibitory effect on $TNF-{\alpha}$ and the tryptase productions by blocking the ERK phosphorylation and trypsin activity.

• 한국의류학회지
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• 제37권7호
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• pp.852-863
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• 2013

We investigate the immobilization of trypsin on chitosan nonwoven using glutaraldehyde (GA). The conditions for trypsin on chitosan nonwoven and GA cross-linking were optimized depending on different conditions. The order of GA cross-linking was determined by the activity of immobilized trypsin. The characteristics of chitosan nonwoven were examined by Fourier-transform infrared (FT-IR) and surface morphology analyses (SEM). Results showed that the optimal treatment conditions for trypsin on chitosan nonwoven were as follows: pH 8.5; temperature $37^{\circ}C$; trypsin concentration 15% (o.w.f); and treatment time 60 min. Those for GA cross-linking were: pH 10.0; GA concentration 3% (v/v); and treatment time 120 min. FT-IR analysis showed that GA was cross-linked on chitosan nonwoven. The SEM analysis also showed that trypsin was immobilized on chitosan nonwoven.