Previously, a cytosolic trehalase (TreH) from the hyperthermophilic archaeon Sulfolobus acidocaldarius was reported; however, the gene responsible for the trehalase activity was not identified. Two genes, saci_1816 and saci_1250, that encode the glycoside hydrolase family 15 type glucoamylase-like proteins in S. acidocaldarius were targeted and expressed in Escherichia coli, and their abilities to hydrolyze trehalose were examined. Recombinant Saci_1816 hydrolyzed trehalose exclusively without any help from a cofactor. The mass spectrometric analysis of partially purified native TreH also confirmed that Saci_1816 was involved in proteins exhibiting trehalase activity. Optimal trehalose hydrolysis activity of the recombinant Saci_1816 was observed at pH 4.0 and $60^{\circ}C$. The pH dependence of the recombinant enzyme was similar to that of the native enzyme, but its optimal temperature was $20-25^{\circ}C$ lower, and its thermostability was also slightly reduced. From the biochemical and structural results, Saci_1816 was identified as a trehalase responsible for trehalose degradation in S. acidocaldarius. Identification of the treH gene confirms that the degradation of trehalose in Sulfolobus species occurs via the TreH pathway.
조명나방의 유충성장(幼蟲成長)에 따른 탄수화물대사(炭水化物代謝)의 변화(變化) 및 혈림프와 충체(蟲體)내 항상성(恒常性)을 구명(究明)키 위해 Glucose, Trehalose 그리고 Glycogen을 측정한 결과는 다음과 같다. 헐림프내 Glucose는 3령유충에서 최고함량(最高含量)을 나타냈으며 4령유충에서 급격히 감소(減少)하다가 종령유충으로 성장(成長)하면서 다시 증가(增加)하였고, 충체(蟲體)에서는 유충기(幼蟲期) 성장과정동안 서서히 감소(減少)하는 현상(現象) 나타냈다. Trehalose는 혈림프에서 유충기의 성장과 더불어 증가하면서 높은 함량을 나타낸 반면, 충체(蟲體)에서는 낮은 함량을 보였다. Glycogen은 혈림프에서 Trehalose와 같은 패턴으로 증가하였으나, 충체(蟲體)내에서는 Trehalose와 반대현상(反對現象)을 나타내면서 증가하였다.
본 연구는 설탕의 일부를 트레할로스로 치환하여 제조한 쌀식빵의 품질을 검토한 것이다. 쌀식빵의 맛과 품질을 새롭게 하고 노화 억제 효과가 있는 트레할로스를 설탕 사용량의 25%(Ts25), 50%(Ts50), 75%(Ts75)를 트레할로스로 각각 치환하여 제품을 제조한 다음 상온에서 0, 2, 4일간 저장하면서 경시변화를 확인하였다. 쌀식빵의 비체적은 트레할로스를 첨가한 쌀식빵의 경우 대조군의 97%로 약간 줄어든 결과를 보였으나 경시적인 변화는 감소률이 적은 것으로 나타났다. 수분함량 또한 0일차에는 대조군과 트레할로스 첨가 시료 간 차이가 없었지만 트레할로스 첨가 시료의 수분함량은 경시변화가 작아 보습 효과가 나타났다. 쌀식빵의 경도는 트레할로스를 첨가한 시료에서 대조군보다 유의적으로 낮아 트레할로스의 첨가는 쌀식빵 경도를 낮추어 주는 효과가 있음을 알 수 있었다. 관능검사 결과 쌀식빵의 맛은 대조군에 비해 Ts50의 시료가 가장 좋은 것으로 나타났으며 경시변화를 살펴보면 대조군의 경우 2일차, 4일차에서 크게 감소하였지만 트레할로스 첨가 시료는 맛의 감소가 적은 것으로 나타났다. 풍미와 질감, 전반적인 기호도에서도 트레할로스 첨가 시료가 대조군보다 전반적으로 좋다고 나타나 대조군에 비해 시간이 경과할수록 품질이 유지 또는 증가하는 것을 볼 수 있었다. 트레할로스 첨가는 품질 지속시간 증가에 따른 상품성을 기대할 수 있어 제과 제빵 관련 상품개발에 활용할 수 있을 것이다.
Recently, we found that Arthrobacter crystallopoietes N-08 isolated from soil directly produces trehalose from maltose by a resting cell reaction. In this study, the optimal set of conditions and substrate specificity for the trehalose production using resting cells was investigated. Optimum temperature and pH of the resting cell reaction were $55^{\circ}C$ and pH 5.5, respectively, and the reaction was stable for two hours at $37{\sim}55^{\circ}C$ and for one hour at the wide pH ranges of 3~9. Various disaccharide substrates with different glycosidic linkages, such as maltose, isomaltose, cellobiose, nigerose, sophorose, and laminaribiose, were converted into trehalose-like spots in thin layer chromatography (TLC). These results indicated broad substrate specificity of this reaction and the possibility that cellobiose could be converted into other trehalose anomers such as ${\alpha},{\beta}$- and ${\beta},{\beta}$-trehalose. Therefore, the product after the resting cell reaction with cellobiose was purified by ${\beta}$-glucosidase treatment and Dowex-1 ($OH^-$) column chromatography and its structure was analyzed. Component sugar and methylation analyses indicated that this cellobiose-conversion product was composed of only non-reducing terminal glucopyranoside. MALDI-TOF and ESI-MS/MS analyses suggested that this oligosaccharide contained a non-reducing disaccharide unit with a 1,1-glucosidic linkage. When this disaccharide was analyzed by $^1H$-NMR and $^{13}C$-NMR, it gave the same signals with ${\alpha}$-D-glucopyranosyl-(1,1)-${\alpha}$-D-glucopyranoside. These results suggest that cellobiose can be converted to ${\alpha},{\alpha}$-trehalose by the resting cells of A. crystallopoietes N-08.
In research. which Korean pickled cucumber was treated wish various methods, including blanching. brining in hot solution, and treating with trehalose. I examined the changes of properties of material. The Korean pickled cucumber were fermented 4∼5$^{\circ}C$ for 42 days in 1% salt solution. The physiochemical properties were pH, total acidity, total cell count, lactic acid bacteria and texture properties were also evaluated. The result showed that the effect of blanching and soaking cucumber in 100$^{\circ}C$ hot salt solution significantly reduced the softening rate of texture while a rather rapid fermentation was found for those preserved with salt. The effect of trehalose treatment inhenced fermentation but it was significantly reduced softening rate of texture. The texture evaluation of Korean pickled cucumber was found that heat treatment with blanching after soaked in hot solution and trehalose treatment had a positive effect for reduction of softening of cucumber tissue.
The enzyme activity and organoleptic properties of Korean pickled cucumber were studies for their changes during fermentation. The Korean pickled cucumber were prepared by blanching and high temperature soaking in salt solution and trehalose treatment The results shelved that the effect of combined heat and trehalose treatment significantly reduced the fermentation rate and softening rate of texture while a rather rapid fermentation was for those pleserved with salt. The effect of trehalose treatment enhenced fermentation and it was significantly reduced softening rate of texture by 2% treatment. The sensory evaluation of Korean pickled cucumber was found that combined heat treatment with blanching and hot solution had a positive effect for reduction of softening of cucumber tissue, however, odor and taste were not significantly affected. This study suggested that combined heat and trehalose treatment might have potential for affording protection against softness of cucumber tissue during the fermentation time.
The effect of the trehalose incorporation on the biological membranes was investigated with respect to the phase of the membranes using the fluorescence intensity change. Spherical phospholipid bilayers, vesicles, were prepared only with the variation in the phase of each layer via a double emulsion technique. In the aqueous inside of the vesicles, 8-Aminonaphthalene-1,3,6-trisulfonic acid disodium salt(ANTS) was encapsulated. As a quencher, p-Xylene-bis(N-pyridinium bromide)(DPX) was included in the buffer where the vesicles were dispersed. The fluorescence scale was calibrated with the fluorescence of ANTS vesicles in p-Xylene-bis(N-pyridinium bromide)(DPX)-included-buffer taken as 100% fluorescence and the mixture of ANTS and DPX in the buffer as 0% fluorescence. Trehalose injection into the vesicle solution led the distortion of the membrane. It was found that the distortion was related to the phase of each layer the vesicle up on the ratio of trehalose to lipid. In the identical measurements at glucose, the behavior of the distortion was completely different from that of trehalose. These results seem to depend on the stability of the vesicles, due to the osmotic and volumetric effects on the headgroup packing disruption.
A genomic DNA fragment encoding a putative maltooligosyltrehalose synthase (NfMTS) for trehalose biosynthesis was cloned by the degenerate primer-PCR from cyanobacterium Nostoc flagelliforme. The ORF of NfMTS was 2,799 bp in length and encoded 933 amino acid residues constituting a 106.6 kDa protein. The deduced amino acid sequence of NfMTS contained 4 regions highly conserved for MTSs. By expression of NfMTS in E. coli, it was demonstrated that the recombinant protein catalyzed the conversion of maltohexaose to maltooligosyl trehalose. The $K_m$ of the recombinant enzyme for maltohexaose was 1.87 mM and the optimal temperature and pH of the recombinant enzyme was at $50^{\circ}C$ and 7.0, respectively. The expression of MTS of N. flagelliforme was upregulated, and both trehalose and sucrose contents increased significantly in N. flagelliforme during drought stress. However, trehalose accumulated in small quantities (about 0.36 mg/g DW), whereas sucrose accumulated in high quantities (about 0.90 mg/g DW), indicating both trehalose and sucrose were involved in dehydration stress response in N. flagelliforme and sucrose might act as a chemical chaperone rather than trehalose did during dehydration stress.
Most of the currently licensed viral and bacterial vaccines produced in the world are in state of antigen suspension and the immunogenicity of vaccines could be maintained for one or two years only by keeping in the refrigerator, but without refrigeration vaccines would easily lose their immunogenicites. In this study, as a step to develope the method of increasing the stability of vaccines and maintaining the immunogenicity of vaccines for a long time at room temperature or higher temperature, trehalose, glucose and lactose at different concentration were added into the Hantaan virus vaccines and then kept at $37^{\circ}C$ for 12, 24, 48 hours and at room temperature for seven days respectively. Treated vaccines were then inoculated respectively into ICR mice and the titers of antibody against the antigen of Hantaan virus from the mice sera were evaluated. Vaccine without sugar lost immunogenicity completely in 24 hour at $37^{\circ}C$, but the vaccines containing trehalose could maintain some of the immunogenicity even after exposure at $37^{\circ}C$ for 48 hours and the best concentration of trehalose for maintaining the immunogenicities of vaccines was $7.5{\sim}10$ percent. The results suggest that addition of trehalose could increase the stability of Hantaan virus vaccine.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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