Mutations in the human connexin 32 (Cx32) gene are responsible for X-linked Charcot-Marie-Tooth (CMTX) disease. Although over 300 different mutations have been identified the detailed molecular etiology of CMTX disease is poorly understood. Several studies reported that connexin membrane channels share most biophysical properties with their parental gap junction channels. In this study, two connexin mutant membrane channels (one mutant channel called the M34T channel in which the methionine residue at the $34^{th}$ position of the Cx32 protein is replaced with threonine residue and the other mutant channel called the T86C channel in which the threonine residue at the $86^{th}$ position is replaced with cysteine residue) associated with CMTX mutations were characterized at the single-channel level instead of using mutant gap junction channels. The biophysical properties of the M34T channel were very similar to those of the gap junction channel formed by M34T mutation. In addition, the mutant membrane channel study revealed the reversal of the gating polarity, the loss of fast gating and the gain of slow gating. The T86C channel also behaves like its parental wild type Cx32 membrane channel. Taken together, these results suggest that a study using connexin membrane channels is useful to characterize CMTX mutants.
A few SV4O-transformed human cells such as SV8O are potentially tumorigenic but rejected by athymic hosts. However, one cell line in this group (W118IVA-2) is known to be fully tumorigenic. Two clones were obtained after the injection of W118IVA-2, of which NW1SC1-1 was tumorigenic but NW18C1-2 was not in nude mice. As examined by Southern blot analysis, NW18C1-1 appears to contain more copy number of SV40 sequences than NW18C1-2 does. However, it was unable to demonstrate that this difference elicits the tumorigenicity in NW18C1-1 but not in NW18C1-2. Therefore, the latter clone was tested if it expresses SV40 early genes to produce large T as well as small t antigens using indirect immunofluorescent assay and immunoprecipitation. In addition, mouse NIH3T3 cells were transfected with the cellular DNA of NW1SC1-2 as well as that of NW18C1-1 to examine if the viral genomes in the clones can make the nontransformed cells to acquire malignant growth potential in vivo. The transformed cells expressed large T antigen and became tumorigenic. Thus, the transforming functions of NW1SC1-2 cell appers to be intact. These results clearly suggest that the inability of NW18C1-2 cell to form tumor in nude mice is not because they are inherently nontumorigenic. However, the possibility that the interaction of SV40 with its host differs in these clones can not he ruled out.
Obesity, a strong risk factor for the development of chronic diseases, is characterized by an increase in the number and size of adipocytes differentiated from precursor cells, preadipocytes. Recent research suggests that increased reactive oxygen species (ROS) production in 3T3-L1 adipocyte facilitates adipocyte differentiation and fat accumulation. This study was to investigate whether reduced ROS production by Sargassum micracanthum extract (SME) could protect the development of obesity through inhibition of adipogenesis. 3T3-L1 preadipocytes were treated SME for up to 8 days following standard induction of differentiation. The extent of differentiation reflected by amount of lipid accumulation and ROS production was determined by Oil red O staining and nitroblue tetrazolium (NBT) assay. Treatment of SME significantly inhibited ROS production and adipocyte differentiation that is depend on down regulation of NADPH oxidase 4 (NOX4), a major ROS generator, and peroxisome proliferator-activated receptor gamma ($PPAR{\gamma}$) and CCAAT/enhancer-binding protein alpha ($C/EBP{\alpha}$), a key adipogenic transcription factor. These results indicate that SME can inhibit adipogenesis through a reduced ROS level that involves down-regulation of NOX4 expression or via modulation of adipogenic transcription factor.
Peroxisome proliferator-activated receptor gamma ($PPAR{\gamma}$) is a key transcription factor that regulates adipogenesis, and epigenetic control of $PPAR{\gamma}$ is of great interest in obesity-inhibition research. Our previous study showed that CACUL1 (CDK2-associated cullin domain 1) acts as a corepressor that inhibits $PPAR{\gamma}$ transcriptional activity and adipocyte differentiation. Here, we investigated the roles of protein arginine methyltransferase 5 (PRMT5), a novel binding partner of CACUL1, in regulating $PPAR{\gamma}$. The interaction between PRMT5 and CACUL1 was shown by immunoprecipitation assay in vivo and GST pulldown assay in vitro. As shown by luciferase reporter assay, PRMT5 and CACUL1 cooperated to inhibit the transcriptional activity of $PPAR{\gamma}$. The suppressive role of PRMT5 in adipogenesis was examined by Oil Red O staining using 3T3-L1 cells, which stably overexpress or deplete PRMT5. Overexpression of PRMT5 suppresses $PPAR{\gamma}$-mediated adipogenesis, whereas PRMT5 knockdown increases lipid accumulation in 3T3-L1 cells. Consistently, PRMT5 attenuates the expression of Lpl and aP2, the target genes of $PPAR{\gamma}$, as demonstrated by RT-qPCR analysis. Overall, these results suggest that PRMT5 interacts with CACUL1 to impair the transcriptional activity of $PPAR{\gamma}$, leading to the inhibition of adipocyte differentiation. Therefore, the regulation of PRMT5 enzymatic activity may provide a clue to develop an anti-obesity drug.
The present study was undertaken to determine whether live T. uaginnlis degrades human secretory IgA, serum If and IgG molecules. Human immunoglobulins were exposed to live trophozoites, parasite Iysate, and excretory-secretory product (ESP) of T ucginnlis. To determine the fragmentation of immunoglobulins, the reaction sample was subjected to SDS-PAGE and EITB, and peroxidase conjugated antihuman IgA and IgG were used as probes. Live trophozoites degraded secretory IgA, serum IgA and IgG, and degradation were pressed forward by the prolongation of the incubation time and by increasing the number of trichomonads respectively. Also the Iysates and ESP of trichomonads degraded IgA and IgG. The cysteine and serine proteinase inhibitors such as I-64, antipain, iodoacetic acid, iodoacetamide, TLCK reduced the ability of cleaving immunoglobulins. The proteinase activity and cytotoxicity of T. uaginnlis to HeLa cells were decreased when live T. vusinalis was treated with metallo-proteinase inhibitor as well as cysteine and serine proteinase inhibitors. These results suggest that proteinase secreted from live T ucginclis may play a part role in host pathogenesis by T. uosinnlis, and the cleaving ability of host immunoglobulins by the proteinase may contribute as a one of immune evasion mechanism for parasite survival in the host.
Allergic diseases have increased over the past several decade worldwide including developing countries. Allergic inflammatory responses are caused by Th (T helper)2 immune responses, triggered by allergen ingestion by antigen presenting cells such as dendritic cells (DCs). Intestinal microorganisms control the metabolism and physiological functions of the host, contribute to early immune system maturation during the early life, and homeostasis and epithelial integrity during life. Bifidobacteria have strain-specific immunostimulatory properties in the Th1/Th2 balance, inhibit TSLP (thymic stromal lymphopoietin) and IgE expression, and promote Flg (Filaggrin) and FoxP3 (Treg) expression to alleviate allergies. In addition, unmethylated CpG motif ODN (oligodeoxynucleotides) is recognized by TLR (toll-like receptors)9 of B cells and plasmacytoid dendritic cells (pDCs) to induce innate and adaptive immune responses, while the butyrate produced by Clostridium butyricum activates the GPR (G-protein coupled receptors)109a signaling pathway to induce the expression of anti-inflammatory gene of pDCs, and directly stimulates the proliferation of thymically derived regulatory T (tTreg) cells through the activation of GPR43 or inhibits the activity of HADC (histone deacetylase) to differentiate naive $CD4^+$ T cells into pTreg cells through the histone H3 acetylation of Foxp3 gene intronic enhancer.
White adipose tissue is now recognized as an important endocrine organ which secretes various signal factors and proteins termed 'adipokine'. Haptoglobin (Hp), which has been known as an acute phase protein, belongs to the adipokine. However, the function of Hp in adipose tissue remains unclear. To verify the role of Hp in preadipocytes, in this study, 3T3-L1 preadipocyte cells were stably transfected with human Hp gene and Hp-overexpressing cells were made. The Hp had no effect on cell growth of preadipocytes. By RT-PCR and Western blot analysis, the Hp inhibited gene expression of IL-6 and COX-2 and enhanced HO-1 synthesis in preadipocytes. Moreover, invasion assay showed the Hp suppressed migration of monocytes to preadipocytes. These findings suggest that the Hp may inhibit an inflammatory reaction in adipose tissue by regulating the expressions of pro-inflammatory and anti-inflammatory mediators, and by repressing monocytes/macrophages infiltration.
Amyloidosis is a multisystemic disease characterized by the accumulation of abnormal proteins in extracellular spaces in various organs, with frequent involvement of the myocardium. We report a case of a patient who had cardiac amyloidosis with a trend of reduction in native T1 and T2 values and extracellular volume fraction on serial cardiac magnetic resonance imaging after chemotherapy and stem cell transplantation. The native T1 value and the extracellular volume fraction are closely associated with tissue amyloid burden in amyloidosis patients. This case demonstrated that cardiac magnetic resonance imaging may be used as a non-invasive and quantitative biomarker in the treatment monitoring of amyloidosis.
Lupeol is a type of pentacyclic triterpene and has been reported to have pharmacological activities against various diseases; however, the effect of lupeol on glucose absorption has not been elucidated yet. This study aimed to investigate the effect of lupeol on glucose uptake in 3T3-L1 adipocytes. Lupeol significantly facilitated glucose uptake by translocating glucose transporter type 4 (GLUT4) to the plasma membrane of the 3T3-L1 adipocytes, which was related to activation of the phosphoinositide 3-kinase (PI3K)/protein kinase B (AKT) and 5 'adenosine monophosphate-activated protein kinase (AMPK) pathways. In the PI3K/AKT pathway, lupeol stimulates the phosphorylation of insulin receptor substrate 1 (IRS-1), which activates PI3K. Its activation by lupeol promotes the phosphorylation of AKT, but not the atypical protein kinase C isoforms ζ and λ. Lupeol also promoted the phosphorylation of AMPK. The activation of AMPK increased the expressions of the plasma membrane GLUT4 and the intracellular glucose uptake. The increase in the glucose uptake by lupeol was suppressed by wortmannin (PI3K inhibitor) and compound C (AMPK inhibitor) in the 3T3-L1 adipocytes. The results indicate that lupeol can facilitate glucose uptake by increasing insulin sensitivity through the stimulation of the expression of plasma membrane glucose transporter type 4 via the PI3K/AKT and AMPK pathways in the 3T3-L1 adipocytes.
B 세포이 가장 중요한 기능은 항체를 생산하여 체액성 면역반응을 조절하는 일이다. B 세포가 항체를 생산해 내는 형질세포(plasma cell)로 분화하기 위해서는 다음의 몇 가지 단계를 거쳐야 한다. 즉 resting 상태에서 mitogen이나 항원의 자극에 의한 활성화(activation)가 첫번째 단계이고 두번째로는 증식(proliferation)이며 마지막 단계가 분화(differentiation)이다. B 세포가 일단 mitogen이나 항원에 의해 활성화가 되면 활성화 된 clone의 증식과 분화는 T 세포에서 생산되는 여러 종류의 림포카인(lymphokine)의 영향하에서 이루어진다. 따라서 B 세포 기능에 영향을 미치는 림포카인의 종류를 알아내고 최근 새롭게 발견되는 림포카인의 B 세포에 대한 영향을 연구함이 중요하리라 생각된다. 여기에서는 B 세포 기능에 영향을 미치는 여러 림포카인의 종류의 그 기능에 관해서 간략하게 기술하고자 한다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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