Culexpfpfens pollens에 존재하는 superoxide dismutase의 연구를 위한 적정 분석 조건과 우화 전후. 시간 경과에 따른 superoxide dismutase 활성 경향에 대해서 연구하였다. C. pipiens에 존재하는 superoxide dismutase의 활성은 부화 직후부터 지속적으로 감소하다가. 우화 후 흡혈 자극에 의해서 급격하게 증가한다 흡혈 후 36시간이 경과했을 때. 최대의 논성도를 보인 후 급격히 감소하였다. 기관별 분석에서 흡혈 후 가장 높은 활성 증가는 중장에서 일어나고, 머리 흥부. 지꼴체 및 난소에서도 활성의 증가가 나타났다. 흡혈 전에는 2개의 동위효소(SOD-1, soD-2)가 존재하였으나. 흡혈후 36시간된 성체에서는 3개의 동위효소 밴드가 보이는데, 머리에서는 SOD-1만이 나타나고, 가슴에서는 SOD-2. 지방체와 난소에서는 SOD-1과 SOD-2이 존재하였고. 중장에서는 SOD-3가 나타났다. 그러므로 흡혈 후 나타나는 새로운 동위효소는 중장에서 합성됨을 알 수 있다.
해양세균으로부터 superoxide dismutase를 생산하는 균주를 광화학적 superoxide ion 형성 및 nitrite정량방법으로 검색하여 고활성 균주 B-446을 확보하고 본 균주로부터 35-75% ammonium sulfate precipitation, DEAE-Sephadex A-25 ion exchange chromatography, Sephadex C-200 gel filtration chromatography, High-Q anion exchange chromatography그리고 HPLC-GPC를 이용하여 수율 6%, 정제도 32.3 배의 정제된 SOD를 얻었으며 정제 과정중 효소활성 분석에 본 광화학적 superoxide ion생성 방법으로 사용하였다.
폐흡충 성충의 인산완충액 추출액을 원심분리하여 만든 세포질 현탁액을 조효소(조효소)로 사용하여 Xanthine- zanthine oxidase system으로 superoxide digmutase 환성을 측정한 결과 비활성도(비활성도: specific activity)는 4.3 units/mg이었다. 이 효소의 활성도를 30∼85% ammonium sulfate 침전 및 DEAE-Trisacryl M anion exchange chromatography와 Sephadex G-100 column chromatography를 통과시키면서 측정하는 방법으로 superoxide dismutase를 정제하고, 정제한 효소의 생화학적 특성을 관찰하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 정제과정을 통해 세포질 내 superoxide dismutase를 150배 정제하였다. Sephadex G-100 gel filtration에 의해 계산한 이 효소의 분자량은 34kDa이었고 환원성 SDS-PAGE상 subunit가 17 kDa이었다. 따라서 이 효소는 subunit 두개로 구성된 중항체로 판단하였다. 3. 이 효소는 1 mM 이상의 cyanide 농도에서는 효소 황성이 100% 억제되었고, 5mM 농도의 azide에서는 11.1%, 10mM azide에서는 22.2% 그 환성이 각각 억제되었다. 3. 이 효소는 완충액의 pH가 10.0일 때 효소 황성이 5.4배 증가되었다. 이상의 결과로 폐흡충의 세포질 내에 존재하는 superoxide dismutase는 구리와 아연을 함유한 superoxide dismutase라고 판단할 수 있었다.
N-nitrosoethylurea(NEU)에 의한 지질 과산화물의 함량 변화와 알데히드 대사효소 및 항산화효소의 활성변화를 쥐 간세포에서 측정하였다. 알데히드 대사효소로는 alcohol dehydrogenase와 aldehyde dehydrogenase가 사용되었고 항산화효소로는 glutathione transferase, superoxide dismutase, glutathione reductase와 catalase가 사용되었다. 쥐 간세포에 다양한 농도의 NEU를 처리한 후 지질 과산화물의 함량변화를 측정하였다. 그 결과 6.25mM NEU에 의하여 지질 과산화물의 함량이 최대 2.5배 증가하였다. Alcohol dehydrogenase의 활성은 NEU처리에 의하여 대조군보다 최대 2.3배 증가하였고 aldehyde dehydrogenase의 활성은 약 2배 증가하였다. 전암성 병변의 지표로 이용되는 glutathione transferase와 catalase의 경우 NEU처리에 의한 활성증가가 미미하였다. 그러나 superoxide dismutase의 활성은 최대 1.5배 증가하였고, glutathione reductase의 활성은 약 3배 증가하였다. 그러므로 superoxide dismutase와 g1utathione reductase의 활성증가가 NEU의 독성에 대한 세포내 항산화 방어과정에서 중요한 역할을 할 것으로 추측된다
To investigate the effect of hyperbaric oxygenation on superoxide dismutase activity, neonatal rats (7-10 days old) and adult rats (approximately 100 days old) were continuously exposed to hyperbaric oxygen environment of 2.4ATA for 8 hours and their superoxide dismutase activity were measured. Neonatal rats, all survived through exposure, showed significant increases in the pulmonary superoxide dismutase activity at immediately and 24 hours after exposure. Adult rats, whose 8 hour survival rates were 14%, did not show any significant increase in the activity of pulmonary superoxide dismutase as compared to the control adult rats. These findings are indicating that increased tolerance to oxygen toxicity in neonatal animals during exposure may be attributed to the increase in activity of superoxide dismutase in neonatal rats.
녹차카테킨(GTC)의 항산화 작용을 알아보고자 in vitro와 in vivo에서 지질과산화와 superoxide dismutase(SOD), catalase 활성에 미치는 영향에 대한 실험을 행하였다. In vitro 시험계에서의 항산화활성 실험결과, GTC는 peroxide value와 과산화지질 생성을 유의성 있게 억제시켰고, SOD 활성이 매우 높았다. 또한 GTC를 rat에 경구투여 한 후 항산화활성실험 결과, GTC는 $CCl_4$로 유도된 rat의 간 microsome의 지질과산화를 유의성 있게 억제시켰으며, SOD와 catalase 활성을 유의성 있게 증가시켰다. 따라서 GTC는 암과 노화의 예방과 관련이 되는 항산화 활성이 있는 것을 알 수 있었다.
Production of free radicals of superoxide anion in tissues by cadmium, activities of superoxide dismutase and catalase to protect tissue damages caused by the free radicals and ATPase that plays an important role in energy metabolism at cellular level were investigated. Experiments in vivo were conducted with liver, kidney and testicle tissue homogenates of rats adding $0.05{\sim}0.50mM$ cadmium chloride, and in vivo experiments administering single dose of 5 mg of cadmium/kg of body weight in 0.1% cadmium chloride solution intraperitoneally 48 hours prior to evisceration. Production of superoxide radicals in liver and testicle increased with addition of cadmium in vitro, but not in kidney. In vivo experiments, however, superoxide radicals slightly increased in liver and kidney but not in testicle. Superoxide dismutase (Cu, Zn-SOD and Mn-SOD), catalase and ATPase (total, $Mg^{++}-\;&\;Na^+,\;K^+-$) activity decreased in the presence of cadimium in dose dependent manner. Reduction of these enzyme activities varied not only with dosage of cadmium but also with type of tissue and between in vitro and in vivo experiment.
$\beta$-fluoroethylacetate를 흰쥐의 복강에 투여하여 krebs cycle이 blocking된 것을 확인하고 이보 인해 각 조직 에서 생성되는 superoxide radical과 SOD의 할성도 변화를 관찰하였다. $\beta$-fluoroethylacetate을 투여한지 1- 3 시간 사이에 모든 장기에서 citrate의 축적농도가 가장 높았으며, 특히 heart외 spleen에서 12배 빛 20배로 가장 높았고, aconltase의 환성도는 한시간 후에 30-35%까지 억제되었고 시간의 경과에 따라 큰 변화는 없었다. 그리고 혈중 glucose의 함량은 계속증가되어 5 시간 후에 612mg/dl로 정상에 비해 1.6배 증가되었다. $\beta$-fluoroe thylacetate을 투여하고 1-2시간 후에 모든 장기에서 superoxide radical이 생성되었고 heart에서는 O. 26$\mu$mole/g호 가장 높았고, SOD의 총활성도는 1-3시간후에 활성이 가장 높았으며, heart에 있는 이 효소가 한 시간후 에 약 4 배로 가장 많이 증가되었다. Mn-SOD는 한시간 후에 모든 조직 에서 증가되였고 Kidney 가 가장 높은 활성도의 변화를 보였다. 이상의 결과로 흰쥐에서 Krebs cycle 이 차단되면 거의 모든 장기에서 superoxide radioal이 생성되며 Cu, Zn 및 Mn- SOD의 활성도가 모두 증가되고 특히 heart에시 가장 큰 변화를 보임을 알 수 있었다.
참돌꽃 유식물에서 줄기와 뿌리의 부위별로 나타나는 superoxide dismutase(SOD)의 활성과 환경 스트레스 또는 항산화분자 처리에 따른 SOD활성도를 조사하여 다음과 같은 결론을 얻었다. SOD의 활성은 줄기보다는 뿌리에서 높았고 각 기부보다는 선단부에 이를수록 높았으며 이러한 현상은 유식물 생육의 초기보다 후기에 더 상승된 결과를 나타내고 있다. 또한 환경 스트레스에 대한 SOD의 활성도는 유식을 초기생육 상태에서는 NaCl또는 cadmium(Cd) 등 유해물질 처리 후 10 및 30% 정도 저해를 받고 있으나 생육 후기에 이를수록 처리된 유해인자에 의한 산화적 스트레스에 대하여 유식물은 자체의 SOD 활성 수준이 상향되는 방어능력을 보였으며 이러한 현상은 뿌리에서 더욱 현저하였다. SOD 활성도를 높이기 위해 항산화물질로 ascorbic acid를 처리한 유식물은 생육 후 최고 46%까지 높아짐을 보였으나 동시기의 스트레스 물질로 첨가한 cadmium 처리구에서 나타난 SOD 활성도에 비하여 유의할만한 상승효과의 차이를 보이지는 않았다. 이러한 결과는 참돌꽃 유식물 특히 뿌리부위는 항산화 기질의 처리 없이도 유해한 환경 인자에 노출되면 자체의 방어 수단으로 SOD 생성이 활발히 진행되고 있음을 시사하였다.
망초(Conyza bonariensis)에서 제초제 paraquat 저항성을 구명하기 위해 paraquat가 생성하는 superoxide 라디칼과 과산화수소 등의 유해 산소 물질을 제거하는 데에 관련된 효소의 활성을 저항성 종과 감수성 종의 망초에서 측정하였다. 경작지 부근에 자라는 망초는 비경작지에 자라는 망초에 비해 paraquat 저항성이 강하였다. 국내에서 paraquat를 자주 살포하는 지역에서 저항성 종의 망초가 출현하고 있음을 처음으로 보고한다. 저항성 종의 superoxide dismutase의 활성, ascorbate peroxidase의 활성, 그리고 glutathione reductase의 활성은 감수성의 그것에 비해 각각 약 20%, 44%, 그리고 64% 높게 나타났다. 이러한 결과로부터 paraquat에 대한 망초의 저항성은 superoxide dismutase, ascorbate peroxidase, 그리고 glutathione reductase 등으로 구성된 효소의 유해 산소 물질을 제거하는 효율성에 부분적으로 달려 있을 수 있다고 사료된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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