본 연구에서는 해양 거대조류 중 홍조류에 속하는 꼬시레기(Gracilaria verrucosa)로부터 malonic acid를 사용하여 열수 전처리 조건(전처리 온도, 촉매 농도, 고액비, 전처리 시간)에 따른 전처리와 효소가수분해를 통한 바이오슈거(환원당) 생산 가능성을 조사하였다. 300 mM malonic acid, 1:20 고액비 조건에서 $130^{\circ}C$에서 60분간 전처리를 수행하여 49.2%의 환원당 수율을 얻었다. 전처리 반응 후 이어진 효소 가수분해를 통하여 64.5%의 수율을 확보하였다.
This study was conducted to investigate the physicochemical properties of citrus peel extracts with different hot water extraction and enzymatic hydrolysis conditions. Enzymatic hydrolysis was also employed using Viscozyme L and results were compared with that of optimized hot water extract. Hot water extraction was performed under different parameters; the sample to solvent ratio(1:20, 1:15, 1:10), extraction time(2, 4 hrs), extraction temperature(85, $95^{\circ}C$) and enzymatic hydrolysis(0, 1%) and the subsequent extracts were used for determining their physicochemical properties, such as total yield, total phenolics, total flavonoids, and electron donating ability (EDA). With the increase in the sample to solvent ratio and extraction time, total yield, total phenolics, total flavonoids and EDA increased. But extraction temperature did not significantly affect the hot water extract. As hot water extract was hydrolyzed by the enzyme, total yield and active ingredients increased rapidly. In the result of total yield, total phenolics, total flavonoids and EDA, the activity of enzyme-treated extract was higher than those of enzyme-untreated extract. Based upon the overall hot water extraction efficiency, it was found that 20 times volume or 120 min at a time at $95^{\circ}C$ after enzyme treatment was optimal.
본 연구에서는 창자파래(Enteromorpha intestinalis)로부터 citrate buffer를 사용하여 전처리 조건(고액비, 반응온도, buffer의 pH와 농도)에 따른 전처리 반응과 효소가수분해를 통한 가수분해 수율을 조사하였다. 0.25 M, pH 3.5의 citrate buffer를 이용하여 $140^{\circ}C$에서 60분간 전처리를 수행한 결과, 5.40%의 가수분해 수율을 얻었다. 최종적으로 전처리 반응 후 24시간의 효소 가수분해를 통하여 18.68%의 가수분해 수율을 얻었다. 이 결과는 대조구에 비하여 약 1.81배 증가한 결과이다.
Studies of the pretreatment of chitin and its subsequent hydrolysis by Aspergillus carneus chitinase are reported. Ball milling was found to be the most effective way among the pretreatment methods tested. Data are presented describing the effect of enzyme and substrate concentrations on the rate and extent of the hydrolysis process. It was found that the successive addition of enzyme improved the saccharification yield. Significant product inhibition of the chitinase was observed when N-acetylglucosamine concentration was 3.6% or higher. Adsorption of enzymes to the substrate occurred during a 24 hr hydrolysis period. An initial rapid and extensive adsorption occurred, followed by gradual desorption which increased during the time of reaction. Intermediate removal of the hydrolyzate and continuation of the hydrolysis by adsorbed enzyme on the residual chitin was also investigated. A total of 75.4 g/l reducing sugars, corresponding to 69.2% saccharificaton yield (as N-acetylglucosamine) was obtained. In addition an increase in the amount of recoverable enzymes was observed under these conditions. Evidence presented here suggests that the technique, whereby the free enzymes in the recovered hydrolyzate are re-adsorbed onto the new substrate, may provide a means of recirculating the dissolved enzymes.
The objective of this study was to examine changes in the porosity and internal structure of wood as it goes through the process of saccharification (extraction of fermentable sugars). This study also examined the use of different drying methods to prepare samples for characterization of internal pores, with particular emphasis on the partially disrupted cell wall. Aspen wood flour samples after dilute acid pretreatment followed by enzymatic hydrolysis were examined for nitrogen adsorption. The resulting isotherms were analyzed for surface area, pore size distribution, and total pore volume. Results showed that freeze drying (with sample pre-freezing) maintains the cell wall structure, allowing for examination of saccharification effects. Acid pretreatment (hemicellulose removal) doubled the surface area and tripled the total volume of pores, which were mostly 10-20 nm wide. Subsequent enzymatic hydrolysis (cellulose removal) caused a 5-fold increase in the surface area and a ~ 11-fold increase in the total volume of pores, which ranged from 5 to 100 nm in width. These results indicate that nitrogen adsorption analysis is a feasible technique to examine the internal pore structure of lignocellulosic residues after saccharification. The information on the pore structure will be useful when considering value-adding options for utilizing the solid waste for biofuel production.
Optically active carboxylic acid, D-(-)-$\beta$-hydroxyisobutyric acid {(D)-(-)-HIBA} is a useful chiral starting material for the preparation of enantiomerically pure bioactive compounds which have a chiral methyl carbon center in the molecule such as captopril, $\alpha$-tocopherol, erythromycin A, muscone and so on. (S)-3-Acetoxy-2-methylpropanol can be used as the precursor of (D)-(-)-HIBA, that is, chemical oxidation of the hydroxyl group and subsequent hydrolysis of acyl group in (S)-3-acetoxy-2-methylpropanol affords D-(-)-$\beta$-hydroxyisobutyric acid. (S)-3-Acetoxy-2-methyl-propanol was prepared by lipase-catalyzed asymmetric hydrolysis. In the enzymatic hydrolysis system, lipase AY (Candida rugosa) provided the expected (S)-3-acetoxy-2-methylpropanol in 60% e.e. of the enantiomeric purity under the phosphate buffer and organic co-solvent system.
$\beta$-1,4-Mannotriose was prepared b he enzymatic hydrolysis of white copra meal (WCM) and the subsequent elimination of monosaccharides from the resultant hydrolysate with a yeast. The enzyme system from sunflower seed hydrolyzed WCM and produced monosaccharides and $\beta$-1,4-mannotriose without other oligomers at the final stage of the reaction. WCM(50g) was hydrolyzed at 5$0^{\circ}C$ and pH 4.5 for 24 hr with crude enzyme solution (500 mL) from sunflower seed. By the elimination of monosaccharides from the hydrolysis products with a yeast (Candida glaebosa), 8.1 g of crystalline mannotriose was obtained without the use of chromatographic techniques. After 48hr of yeast cultivation, the total sugar content decreased from 4.6% to 3.5%, whereas the average degree of polymerization increased from 2.3 to 3.1.
Beta-1,4-mannotriose was prepared by the enzymatic hydrolysis of poonac and the subsequent elimination with yeast of monosaccharides and disaccharide from the resultant hydrolysate. The enzyme system hydrolyzed poonac and produced monosaccharides, disaccharide and ${\beta}$-1,4-mannotriose without other oligomers at the final reaction stage. Poonac (50 g) was hydrolyzed at $50^{\circ}C$ and pH 6 for 48 hr with the crude enzyme solution (500 mL) from Trichoderma harzianum. The elimination of monosaccharides and disaccharide from the hydrolysis products with a yeast (Candida guilliermondii) produced 10.5 g of crystalline [${\beta}$-1,4-mannotriose without the use of chromatographic techniques. After 48 hr of yeast cultivation, the total sugar content fell from 4.8% to 3.4%, and the average degree of polymerization (D.P) rose from 2.5 to 3.2. The preparation method presented was confirmed to be suitable for the preparation of mannotriose from poonac.
${\beta}-1$, 4-Mannobiose was prepared by the enzymatic hydrolysis of brown copra meal and the subsequent elimination of mono-saccharides from the resultant hydrolysate with a yeast. The enzyme system hydrolyzed brown copra meal and produced monosaccharides and $\beta$-1, 4-mannobiose without other oligomers at the final stage of the reaction. Brown copra meal (30 g) was hydrolyzed at $50^{\circ}^C$ and pH 5 for 48 hr with the crude enzyme solution (300 ml) from Penicillium purpurogenum. By the elimination of monosaccharides from the hydrolysis products with a yeast (Candida parapsilosis var. komabaensis k-75), 5.2 g of crystalline mannobiose was obtained without the use of chromatographic techniques. After 50 hours of yeast cultivation, the total sugar content fell from 3.5% to 2.4%, and the average degree of polymerization rose from 1.8 to 2.2.
Organophosphorus acid anhydrolases(OPAA) catalyzing the hydrolysis of toxic organophosphates have been found in a variety of prokaryotic and eukaryotic organisms. Of the several kinds of OPAA that can degrade nerve agents, such as DFP, sarin and soman, a OPAA gene harbored in the chromosomal DNA of Alteromonas haloplanktis strain was subcloned in order to develope an enzymatic degradation method of toxic organophosphorus compounds. For this 1481 bp DNA fragment containing OPAA gene and its flanking regions has been synthesized through PCR using chromosomal DNA of A. haloplanktis strain. After subcloning and subsequent expression, crude OPA anhydrolase was prepared and assayed. It was shown that the OPAA had a very high hydrolytic activity on DFP. The specific activity of the enzyme was 1,110 $\mu$mole.$min^{p-1}.mg^{-1}$ protein. It seemed that OPAA with such a high hydrolytic activity may give a good prospects to its use, as a biodegradation tool, in detoxifying toxic organophosphorus compounds, such as pesticides and chemical stockpiles which are posing a potential threat to the field environment and human health.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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