Embryonic stem (ES) cell-derived cardiomyocytes (ESCMs) must be specifically purified in order to prevent teratoma formation, and this confusing issue has hampered their clinical application. We therefore investigated a technique to generate pure labeled ESCMs for possible use in cardiac repair. We generated transgenic ES cell lines expressing enhanced green fluorescent protein (EGFP) under the transcriptional control of the $\alpha$-cardiac myosin heavy chain ($\alpha$-MHC) promoter. Differentiated EGFP-positive ES cells displayed characteristics of CMs. Furthermore, neuregulin-1 (NRG-1) upregulated the expression of the cardiac-restricted transcription factors Nkx2.5 and GATA-4, as well as differentiated CM factors ($\alpha$-MHC, $\beta$-MHC). Immunohistochemistry demonstrated that NRG-1 increased expression of cardiac-specific troponin T in the beating foci of the embryoid bodies. This work revealed a potential method for specifically labeling and enriching ESCMs by combining genetically-engineered ES cell clones and exogenous growth factor treatment.
A Fusarium species was isolated from stems of cactus(Hylocereus trigonus) showing rot symptoms at Koyang, Kyonggi province in 1997. This pathogen was identified as Fusarium oxysporum based on mycological characteristics. The rot symptom appeared at the soil line and roughly circular lesions, 1∼3 mm in diameter, appeared on basal stems. The pathogen formed both microconidia and macroconidia. Microconidia were formed abundantly in false-heads on short monophialides, oval to kidney-shaped. Macroconidia were slightly sickle-shaped, 3∼5-septated with an attenuated apical cell and a foot-shaped basal cell. Colony color on PDA was white, peach or purple. Chlamydospores were formed abundantly on PDA. The pathogen was able to cause stem rot symptoms to cactus by wound inoculation as well as non-wound inoculation.
Kim, Seong Sik;Kwon, Dae-Woo;Im, Insook;Kim, Yong-Deok;Hwang, Dae-Seok;Holliday, L. Shannon;Donatelli, Richard E.;Son, Woo-Sung;Jun, Eun-Sook
대한치과교정학회지
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제42권6호
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pp.307-317
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2012
Objective: The purpose of this study was to investigate the isolation and characterization of multipotent human periodontal ligament (PDL) stem cells and to assess their ability to differentiate into bone, cartilage, and adipose tissue. Methods: PDL stem cells were isolated from 7 extracted human premolar teeth. Human PDL cells were expanded in culture, stained using anti-CD29, -CD34, -CD44, and -STRO-1 antibodies, and sorted by fluorescent activated cell sorting (FACS). Gingival fibroblasts (GFs) served as a positive control. PDL stem cells and GFs were cultured using standard conditions conducive for osteogenic, chondrogenic, or adipogenic differentiation. Results: An average of $152.8{\pm}27.6$ colony-forming units was present at day 7 in cultures of PDL stem cells. At day 4, PDL stem cells exhibited a significant increase in proliferation (p < 0.05), reaching nearly double the proliferation rate of GFs. About $5.6{\pm}4.5%$ of cells in human PDL tissues were strongly STRO-1-positive. In osteogenic cultures, calcium nodules were observed by day 21 in PDL stem cells, which showed more intense calcium staining than GF cultures. In adipogenic cultures, both cell populations showed positive Oil Red O staining by day 21. Additionally, in chondrogenic cultures, PDL stem cells expressed collagen type II by day 21. Conclusions: The PDL contains multipotent stem cells that have the potential to differentiate into osteoblasts, chondrocytes, and adipocytes. This adult PDL stem cell population can be utilized as potential sources of PDL in tissue engineering applications.
Han, Su Young;Gupta, Mukesh Kumar;Uhm, Sang Jun;Lee, Hoon Taek
Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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제22권2호
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pp.187-193
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2009
The present study identified the favorable conditions for isolation, enrichment and in vitro culture of highly purified, undifferentiated pig spermatogonial stem cell (SSC) lines that proliferate for long periods of time in culture. The colonies displayed morphology similar to miceSSC and were positive for markers of SSC (PGP9.5), proliferating germ cell (PigVASA), pre-meiotic germ cell (DAZL) and pluripotency (OCT4, SSEA-1, NANOG, and SOX2) based on immuno-cytochemistry and RT-PCR. The purity of these colonies was confirmed by negative expression of markers for sertoli cell (GATA4 and SOX9), peritubular myoid cell (${\alpha}$-SMA), differentiating spermatogonial and germ cells (c-KIT). The colonies could be maintained with undifferentiated morphology for more than two months and passaged more than 8 times with doubling time between 6-7 days. Taken together, we conclude that pigSSC could be successfully isolated and cultured in vitro and they possess characteristics similar to miceSSC.
Pogostemonis and Agastachis Herba are the whole of Pogostemon cablin (BLANCO) BENTH or Agastache rugosa (FISCHER et MEYER) O. KUNTZE (family Labiatae) which is produced in all part of Korea and China. This drug is used for removing dampness by means of aromatics in oriental medicine. The standard formula of this drug is important from the viewpoint of the quality control. A characteristic discrimination of internal and external morphological standard in original plants and herbal states of Pogostemonis and Agastachis Herba are as follows. 1. The external characteristics: Pogostemon cablin has hairs and brown-like in stem, elliptical fruit. In the other hand, Agastache rugosa has no hairs and red-like in stem, obovatic trigone fruit. 2. The physical characteristics: Pogostemon cablin is gray in whole, has hairs in stem and numerous hairs of ash in leaf. In the other hand, Agastache rugosa is yellow-green in whole, has no hairs in stem. Specially the latter has deep-green colour and numerous hairs presenting mostly at lower epidermis in leaf. 3. The physical characteristics in currents: Pogostemon cablin is brown, has hairs and round-like stem. In the other hand, Agastache rugosa is green or yellow-green, has no hairs and tetragon in stem. 4. The internal characteristics: Pogostemon cablin has progressed spongy tissue in epidermal cell of leaf and many rank of epidermal cell in stem. In other hand, Agastache rugosa has 1 rank palisade tissue in leaf and few rank of epidermal cell in stem. In the external shape, it was possible that herbs were distinguished according to artificial classification and that same genus-degree of relatedness among herbs could be distinguished by more precise and active observation. In the shape of real herbs, I compared current herbs in market with original herbs which were just collected or were on the course of drying. In addition, it was possible that the internal shape could be identified by using microscope after butanol series. Though it was impossible to make distinction of herbs which are not current in my search contents, this search contents will be a standard for applying herbs in the future. An Additional standard establishment including physiochemical reaction and gene research is required in order to supplement the fault of this search.
Embryonic germ (EG) cells are undifferentiated stem cells isolated from cultured primodial germ cells (PGC). These cells share many characteristics with embryonic stem cells including their morphology and pluripotency. Undifferentiated porcine EG cell lines demonstrating capacities of both in vitro and in vivo differentiation have been established. (omitted)
Objectives: The aim was to confirm the stem cell-like properties of the dental pulp stromal cells and to evaluate the morphologic changes during in vitro chondrogenesis. Materials and Methods: Stromal cells were outgrown from the dental pulp tissue of the premolars. Surface markers were investigated and cell proliferation rate was compared to other mesenchymal stem cells. Multipotency of the pulp cells was confirmed by inducing osteogenesis, adipogenesis and chondrogenesis. The morphologic changes in the chondrogenic pellet during the 21 day of induction were evaluated under light microscope and transmission electron microscope. TUNEL assay was used to evaluate apoptosis within the chondrogenic pellets. Results: Pulp cells were CD90, 105 positive and CD31, 34 negative. They showed similar proliferation rate to other stem cells. Pulp cells differentiated to osteogenic, adipogenic and chondrogenic tissues. During chondrogenesis, 3-dimensional pellet was created with multi-layers, hypertrophic chondrocyte-like cells and cartilage-like extracellular matrix. However, cell morphology became irregular and apoptotic cells were increased after 7 day of chondrogenic induction. Conclusions: Pulp cells indicated mesenchymal stem cell-like characteristics. During the in vitro chondrogenesis, cellular activity was superior during the earlier phase (within 7 day) of differentiation.
Periodontal ligament stem cells (PDLSCs) are multipotent stem cells derived from periodontium and have mesenchymal stem cell (MSC)-like characteristics. Recently, the perivascular region was recognized as the developmental origin of MSCs, which suggests the in vivo angiogenic potential of PDLSCs. In this study, we investigated whether PDLSCs could be a potential source of perivascular cells, which could contribute to in vivo angiogenesis. PDLSCs exhibited typical MSC-like characteristics such as the expression pattern of surface markers (CD29, CD44, CD73, and CD105) and differentiation potentials (osteogenic and adipogenic differentiation). Moreover, PDLSCs expressed perivascular cell markers such as NG2, ${\alpha}-smooth$ muscle actin, platelet-derived growth factor receptor ${\beta}$, and CD146. We conducted an in vivo Matrigel plug assay to confirm the in vivo angiogenic potential of PDLSCs. We could not observe significant vessel-like structures with PDLSCs alone or human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) alone at day 7 after injection. However, when PDLSCs and HUVECs were co-injected, there were vessel-like structures containing red blood cells in the lumens, which suggested that anastomosis occurred between newly formed vessels and host circulatory system. To block the $SDF-1{\alpha}$ and CXCR4 axis between PDLSCs and HUVECs, AMD3100, a CXCR4 antagonist, was added into the Matrigel plug. After day 3 and day 7 after injection, there were no significant vessel-like structures. In conclusion, we demonstrated the perivascular characteristics of PDLSCs and their contribution to in vivo angiogenesis, which might imply potential application of PDLSCs into the neovascularization of tissue engineering and vascular diseases.
Human Hertwig's epithelial root sheath/epithelial rests of Malassez (HERS/ERM) cells are epithelial remnants of teeth residing in the periodontium. Although the functional roles of HERS/ERM cells have yet to be elucidated, they are a unique epithelial cell population in adult teeth and are reported to have stem cell characteristics. Therefore, HERS/ERM cells might play a role as an epithelial component for the repair or regeneration of dental hard tissues; however, they are very rare population in periodontium and the primary isolation of them is considered to be difficult. To overcome these problems, we immortalized primary HERS/ERM cells isolated from human periodontium using SV40 large T antigen (SV40 LT) and performed a characterization of the immortalized cell line. Primary HERS/ERM cells could not be maintained for more than 6 passages; however, immortalized HERS/ERM cells were maintained for more than 20 passages. There were no differences in the morphological and immunophenotypic characteristics of HERS/ERM cells and immortalized HERS/ERM cells. The expression of epithelial stem cell and embryonic stem cell markers was maintained in immortalized HERS/ERM cells. Moreover, immortalized HERS/ERM cells could acquire mesenchymal phenotypes through the epithelial-mesenchymal transition via TGF-${\beta}1$. In conclusion, we established an immortalized human HERS/ERM cell line with SV40 LT and expect this cell line to contribute to the understanding of the functional roles of HERS/ERM cells and the tissue engineering of teeth.
Peripheral blood-derived mesenchymal stem cells (PB-MSCs) have shown promise in cell-based therapy, as they can be harvested with ease through minimally invasive procedures. This study aimed to isolate PB-MSCs from foals and mares and to compare the proliferation and cellular characteristics of the PB-MSCs between the two groups. Six pairs of mares and their foals were used in this study. MSCs were isolated from PB by direct plating in a tissue culture medium, and cell proliferation (population doubling time [PDT], and colony-forming unit-fibroblast assay [CFU-F]), and characterization (morphology, plastic adhesiveness, colony formation, trilineage differentiation) were examined. There was no significant difference in the PB-MSC yield, CFU-F, and PDT between the mares and foals. PB-MSCs from both mares and foals showed typical MSC characteristics in terms of spindle-shaped morphology, plastic adhesive properties, formation of colonies, trilineage differentiation. These results suggest that PB-MSCs isolated from horses, both adult horses, and foals, can be used for equine cell-based therapy.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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