In this study, we reported the morphogenetic analysis and genome sequence by genomic analysis of the newly isolated staphylococcal phage SMSAP5 from soil of slaughterhouses for cattle. Based on transmission electron microscopy evident morphology, phage SMSAP5 belonged to the Siphoviridae family. Phage SMSAP5 had a double-stranded DNA genome with a length of 45,552 bp and 33 % G+C content. Bioinformatics analysis of the phage genome revealed 43 open reading frames. A blastn search revealed that its nucleotide sequence shared a high degree of similarity with that of the Staphylococcus phage tp310-2. In conclusion, this study is the first report to show the morphological features and the complete genome sequence of the phage SMSAP5 from soil of slaughterhouses for cattle.
Lysogenic conversion of Staphylococcus aureus to loss of ${\beta}-hemolysin$ production by serological group F phages is always associated with gain in staphylokinase production. In this study, the new phages belonging to serotype F were detected during the course of isolation of phages from Staph aureus of bovine origin and some characteristics of the new phages isolated were investigated. The new phages, ${\phi}470$ and ${\phi}499$, isolated from Staph aureus producing ${\beta}-hemolysin$ and staphylokinase(${\beta}^+\;K^+$) were found to convert ${\beta}^+\;K^+$ strain to ${\beta}^+K\;^+$, Staph aureus strains lysogenized by this serotype F single-converting phage ${\phi}470$ or ${\phi}499$ could be again lysogenized with serotype F double-converting phage ${\phi}506$. The frequency of lysogenization of indicator strains by serotype F single-converting phage was 100%, whereas the frequency for serotype F double-converting phage ${\phi}506$ varied from 4.2% to 97.6% according to the indicator strains. The indicator strain lysogenized with phage ${\phi}470$ was resistant to phage ${\phi}499$, and vice versa, but not to phage ${\phi}506$. Therefore, phage ${\phi}470$ and ${\phi}499$ were shown to be identical by immunity test.
본 연구는 황색포도상구균 박테리오파지를 물리화학적 방법을 통해서 제어하기 위해 황색포도상구균을 대상으로 하는 SAP 84 와 SAP 89를 신규 분리하였다. 그리고, 황색포도상구균 박테리오파지에 대해 물리적 방법으로 $55^{\circ}C$ 및 $60^{\circ}C$ 열처리와 pH 4, pH 7, pH 10 처리하였다. 그 결과 SAP 84는 $60^{\circ}C$에서 급격히 감소하였고 SAP 89는 $60^{\circ}C$에서 25 분 만에 모두 활성을 잃었다. SAP 84는 pH 4 ~ 10에서 매우 안정적이었고 SAP 89는 pH 10 이상에서 비교적 불안정해지는 것을 보였다. 화학적 방법으로는 에탄올과 차아염소산나트륨 및 FAS 처리를 하였다. SAP 84가 50%, 70% 에탄올에서 급격히 감소하였다. 살균력이 좋은 100 ppm의 차아염소산 나트륨에서도 SAP 84와 SAP 89는 상당히 안정적인 상태를 유지하고 있다. Virucidal agent로 사용되는 FAS를 10% 농도로 처리하였을 때 SAP 84와 SAP 89 모두 처리 직후부터 제거되는 것을 확인할 수 있었다. 따라서 본 연구를 통해 SAP 84와 SAP 89 모두 화학적 처리 방법인 FAS 처리를 통해서 제어 가능함을 보여주었다. 이외에도 SAP 84는 물리적 방법인 열처리의 저감화 효과가 좋았으며 SAP 89는 화학적 방법인 에탄올 처리의 저감화 효과가 비교적 좋았다. 이렇듯 물리화학적 처리방법으로 황색포도상구균 박테리오파지를 제어 가능할 것으로 사료된다.
A total of 211 strains of Staphylococcus aureus which included 118 strains isolated from various clinical specimens of admitted patients of University Hospital with systemic or severe cases of infection and 93 strains from infected skin diseases of out-patients of dermatology clinic located in rural area, were tested for the antimicrobial susceptibility to the 12 drugs of common use and the phage typing. An these were subjected to the study of plasmid profile analysis for the molecular epidemiology of nosocomial infections. University Hospital(UH) isolates showed higher frequency of resistance than local clinic(LC) isolates against 10 drugs excluding tetracycline(Tc), and trimethoprim(Tp). The MIC of UH isolates were above than $128{\mu}g/ml$ against 9 drugs except Tc, gentamicin(Gm), and Tp, but LC isolates did not show such a high level of MIC. There was difference of MIC needed to inhibit 90% of strains(MIC90) against each drugs tested between two groups of UH and LC isolates. UH isolates showed 2 to 4 times higher value of MIC90 by two-fold serial dilution of drug concentration than LC isolates. Tp was considered as an effective drug in treatment of staphylococcal infections whereas ampicillin and Gm were appeared to be ineffective. Seventy-three strains(61.9%) of UH isolates and 70(69.9%) of LC were typable with phages from Colindale Reference Laboratory. The prevailing phage type of UH isolates belonged to lytic group II were 27 strains(22.9%) and those of LC isolates belonged to lytic group II were 23 strains(24.7%). Thirteen strains(11.0%) of UH isolates were multiply resistant to more than 5 drugs to 10 drugs but none of LC isolates. Through the lysis method of Kado and Liu followed by agarose gel electrophoresis, none of 211 strains showed plasmid profile. These results were confirmed by re-examination through the method of Birnboim and Doly.
Outbreaks of staphylococcal food poisoning (SFP) causing serious human diseases and economic losses have been reported globally. Furthermore, the spread of Staphylococcus aureus with increased resistance to multiple antimicrobial agents has become a major concern in the food industries and medicine. Here, we isolated an endolysin LysSAP8, as one of the peptidoglycan hydrolases, derived from the bacteriophage SAP8 infecting S. aureus. This endolysin was tagged with a 6×His at the C-terminal of the target protein and purified using affinity chromatography. LysSAP8 demonstrated lytic activity against a broad spectrum of bacteria, which included a majority of the staphylococcal strains tested in this study as well as the methicillin-resistant S. aureus (MRSA); however, no such activity was observed against other gram-positive or gram-negative bacteria. Additionally, LysSAP8 could maintain bactericidal activity until 0.1 nM working concentration and after heat treatment at 37℃ for 30 min. The ability of LysSAP8 to lyse cells under varying conditions of temperature (4-43℃), pH (3-9), and NaCl concentrations (0-1,000 mM), and divalent metal ions (Ca2+, Co2+, Cu2+, Mg2+, Mn2+, Hg2+, and Zn2+) was examined. At the optimized condition, LysSAP8 could disrupt approximately 3.46 log CFU/ml of the planktonic cells in their exponential phase of growth within 30 min. In this study, we have suggested that LysSAP8 could be a potent alternative as a biocontrol agent that can be used to combat MRSA.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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