• 한국가축번식학회지
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• 제20권1호
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• pp.43-52
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• 1996

본 연구는 생쥐의 고게정관내에 존재하는 분화단계의 정자세포를 발생단계별로 분리하여, 체외에서 단기간 배양체계를 확립하기 위하여 실시하였다. 8주령 이상된 생쥐의 정소로부터 정소막을 제거시킨 후, collagenase (1mg/ml), trypsin(2.5mg/ml)를 처리하여 곡세정관을 간질세포와 분리하여 배양액에 부유시켰다. 부유세포는 Celcep장치를 이용하여 세포크기와 밀도 차이에 의해 분화 단계별로 분리하였다. 회수된 세포의 균질성은 haematoxylin/eosin 또는 orcein으로 염색한 후, 광학현미경하에서 확인한 결과 약 85% pachytene spermatocyte와 round spermatid을 성공적으로 분리해냈다. 따라서 sedimentation velocity에 의해서 생쥐의 spermatogenic cell의 발달단계별 분리가 가능함을 알 수 있었다. 이러한 방법으로 분리된 pachytene spermatogenic cell들은 DMEM 배양액에서 6일 이상 배양한 결과 약 36%의 생존율을 보였다. 따라서, 분화단계별 정자 세포의 분리 및 배양체계의 확립은 웅성생식세포의 발생과정에 따른 생리 또는 분자생물학적 현상을 규명함은 물론 세포융합기술의 이용에 의한 형질전환동물 생산에의 응용을 통해 가축에 있어서의 형질전환 생산효율의 개선에 기여할 수 있으리라 사료된다.

• Anatomy and Cell Biology
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• 제56권4호
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• pp.508-517
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• 2023

In cancer patients, chemo/radio therapy may cause infertility by damaging the spermatogenesis affecting the self-renewal and differentiation of spermatogonial stem cells (SSCs). In vitro differentiation of stem cells especially mesenchymal stem cells (MSCs) into germ cells has recently been proposed as a new strategy for infertility treatment. The aim of this study was to evaluate the proliferation and differentiation of SSCs using their co-culture with Sertoli cells and conditioned medium (CM) from adipose tissue-derived MSCs (AD-MSCs). Testicular tissues were separated from 2-7 days old neonate Wistar Rats and after mechanical and enzymatic digestion, the SSCs and Sertoli cells were isolated and cultured in Dulbecco's modified eagle medium with 10% fetal bovine serum, 1X antibiotic, basic fibroblast growth factor, and glial cell line-derived neurotrophic factor. The cells were treated with the CM from AD-MSCs for 12 days and then the expression level of differentiation-related genes were measured. Also, the expression level of two major spermatogenic markers of DAZL and DDX4 was calculated. Scp3, Dazl, and Prm1 were significantly increased after treatment compared to the control group, whereas no significant difference was observed in Stra8 expression. The immunocytochemistry images showed that DAZL and DDX4 were positive in experimental group comparing with control. Also, western blotting revealed that both DAZL and DDX4 had higher expression in the treated group than the control group, however, no significant difference was observed. In this study, we concluded that the CM obtained from AD-MSCs can be considered as a suitable biological material to induce the differentiation in SSCs.

• 한국동물번식학회:학술대회논문집
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• 한국동물번식학회 2004년도 춘계학술발표대회
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• pp.213-213
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• 2004

Exogeneous DNA can reproducibly be delivered by co-injected spermatozoa and this transgenesis method is very efficient protocol. But, mosaic patterns of transgenic embryos and offspring were shown frequently. Whole blastomere integration is important in transgenic animal economics. (omitted)

• 한국가축번식학회지
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• 제25권4호
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• pp.305-315
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• 2001

본 연구의 목적은 외래 EGFP 유전자를 분화이전의 웅성생식세포에 도입한 후 이를 난모세포내에 미세주입하여 형질전환동물을 생산하는 기술을 개발하는 데에 있다. 이를 위하여 반수체 정자세포에서 특이적으로 발현하는 생쥐의 mTP1과 햄스터의 hPrm2 유전자 발현 시기를 RT-PCR로 조사한 결과 그시기는 생쥐와 햄스터에서 각각 18일령과 20일령으로 확인되었다. 이에 따라 외래 유전자의 침입이 용이한 감수분열 직전단계인 17일령의 생쥐와 19일령의 햄스터 정자세포를 EGFP 유전자가 포함된 배양액에 부유시킨 다음, 전기자극을 부여한 결과 0.18 ㎸/cm의 전기자극을 가한 후 72시간 배양한 정자세포의 28.5%와 32.1%에서 EGFP 유전자가 발현되는 것으로 확인되었다. EGFP유전자가 도입된 반수체 정자의 수정 및 발달 능력을 검증하기 위하여, 이들 정자세포를 햄스터 난자 내에 미세주입 하였으나, 형광현미경하에서는 EGFP유전자의 발현은 관찰할 수 없었다. 이에 이들 난자를 공시하여 PCR분석을 실시한 결과, 약 44%의 수정란에서 EGFP 유전자의 존재가 확인되었다. 이러한 결과로 보아 반수체 정자세포는 외래 유전자를 난자 내에 도입하기 위한 운반체로 이용될 수 있을 것으로 생각된다.