Devices based on nanomaterials platforms are emerging as a powerful tool for ultrasensitive sensors for the direct detection of biological and chemical species. In this talk, we will report the preparation and the full characterization of electrochemical polymerization of biopolymers platforms and nano-structure formation for electrochemical detection of enzymatic activity and toxic compound in electrolyte for biosensor applications. Formation of an electroactive polymer film of two different compounds has been quantified by observing new redox peak at higher potentials in cyclic voltammogram measurements. RCT value of at various biopolymer concentration based hybrid films has been obtained from electrochemical impedance spectroscopy analysis and possible mechanism for formation of complexes during electrochemical polymerization on conducting substrates has been investigated. Biosensors developed based on these hybrid biopolymers have very high sensitivity.
Cho, Min Seok;Ahn, Tae-Young;Joh, Kiseong;Kwon, Oh-Sang;Jheong, Won-Hwa;Park, Dong Suk
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제22권8호
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pp.1113-1117
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2012
Shigella sonnei is a causal agent of fever, nausea, stomach cramps, vomiting, and diarrheal disease. The present study describes a quantitative polymerase chain reaction (qPCR) assay for the specific detection of S. sonnei using a primer pair based on the methylase gene for the amplification of a 325 bp DNA fragment. The qPCR primer set for the accurate diagnosis of Shigella sonnei was developed from publically available genome sequences. This quantitative PCR-based method will potentially simplify and facilitate the diagnosis of this pathogen and guide disease management.
Detection of mefenamic acid (M, non-steroidal anti-inflammatory drug, NSAIDs) and its metallodrug was investigated using electrospray ionization mass spectrometry (ESI-MS) and fluorescence spectroscopy. ESI-MS data (500 µL, 1×10-3 M) revealed high detection sensitivity for the drug and metallodrug. ESI-MS spectra revealed peaks at 242, 580, and 777 Da corresponding to [M+H]+, [63Cu(M-H)2(H2O)2+H]+, and [56Fe(M-H)3+H]+, respectively. The metal:mefenamic ratios of ESIMS spectra are in complete agreement with the fluorescence spectroscopy results (1:2 for Cu(II) and 1:3 for Fe(III)). ESI is a soft ionization technique that can be used on labile metallo-mefenamic acids and is promising for the detection of these species in environmental samples and biological fluids.
A new improved PCR method has been developed for the rapid, reliable, and sensitive detection of Venturia nashicola, a destructive pathogen of scab disease in Japanese pear. The translation elongation factor-1 alpha gene-derived PCR primers specifically amplified a 257-bp-sized DNA band of the target gene from the genomic DNA of V. nashicola. No amplicon was produced from the genomic DNA of other Venturia spp. and reference fungal species tested. With the high detection limit of 10 fg DNA content, our real-time method could be used for the quarantine inspection and field monitoring of V. nashicola.
The detection of virulence factors of Aeromonas is a key component in determining potential pathogenicity because these factors act multifunctionally and multifactorially. In this study water samples were collected from a trout farm on a seasonal basis, and diseased fish and Aeromonas species were isolated and identified. For rapid detection of six virulence factors of isolated Aeromonas, a hexaplex-polymerase chain reaction (hexaplex-PCR) assay was used. The detected virulence factors include aerolysin (aer), GCAT (gcat), serine protease (ser), nuclease (nuc) lipase (lip) and lateral flagella (laf). The dominant strain found in our isolates was Aeromonas sobria, and the dominant virulence factors were aer and nuc for all seasons. We confirmed that A. sobria and two of the virulence genes (aer and nuc) are related. We proposed a method by which one can identify the major strains of Aeromonas: A. hydrophila, A. sobria, A. caviae, and A. veronii, using hexaplex-PCR.
우리 나라 주변어장에서의 주요 어자원중 조기류가 수동어탑을 위한 대표적 어종으로 부각되었다. 음원수준을 150~180dB로 가정했을 때 선배열 형의 수동어탐기에 탐지될 수 있는 거리는 최저 3km에서 최대 20km 이상으로 추정되어 어탐거리의 획기적 증대가 기대된다. 뿐만 아니라 조기류가 내는 700~800Hz 사이의 tocal noise의 특성은 수동형 어탐기에 의한 어종식별 거리 및 정밀도를 보다 향상시킬 것임이 분명하다. 다만, 이 수동소나를 조기류외에 대형어군을 이루는 멸치, 칼치, 명태류, 쥐취류, 오징어 등에 적용 여부를 가늠하기에는 보다 많은 정량적 자료가 수집된 연후에 가능할 것으로 믿어진다.
Outbreaks of foodborne diseases associated with Vibrio species such as V. parahaemolyticus, V. vulnificus, and V. cholerae frequently occur in countries having a dietary habit of raw seafood consumption. For rapid identification of different Vibrio species involved in foodborne diseases, whole-cell protein pattern analysis for 13 type strains of 12 Vibrio species was performed using SDS-PAGE analysis. Pathogenic Vibrio species such as V. parahaemolyticus, V. vulnificus, V. cholerae, V. alginolyticus, V. fluvialis, and V. mimicus were included in the 12 Vibrio species used in this study. Each of the 12 Vibrio species showed clearly specific band patterns of its own. Two different strains of V. parahaemolyticus showed two different SDS-PAGE whole-cell protein patterns, giving the possibility of categorizing isolated strains in the same V. parahaemolyticus species into two subgroups. The 36 Vibrio isolates collected from sushi restaurants in Busan were all identified as V. parahaemolyticus by comparing their protein patterns with those of Vibrio type strains. The identified isolates were categorized into two different subgroups of V. parahaemolyticus. The whole-cell protein pattern analysis by SDS-PAGE can be used as a specific, rapid, and simple identification method for Vibrio spp. involved in foodborne diseases at the subspecies level.
Park, Yong Hyun;Uzzaman, Md. Rasel;Park, Jeong-Woon;Kim, Sang-Wook;Lee, Jun Heon;Kim, Kwan-Suk
한국축산식품학회지
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제33권6호
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pp.696-700
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2013
A quick and reliable method for identifying meat origin is developed to ensure species origin of livestock products for consumers. The present study examined the identification of meat sources (duck, chicken, goat, deer, pig, cattle, sheep, and horse) using PCR by exploiting the mitochondrial 12S rRNA and mitochondrial cytochrome b genes. Species-specific primers were designed for some or all mitochondrial 12S rRNA nucleotide sequences to identify meat samples from duck, chicken, goat, and deer. Mitochondrial cytochrome b genes from pig, cattle, sheep, and horse were used to construct species-specific primers, which were used to amplify DNA from different meat samples. Primer sets developed in this study were found to be superior for detecting meat origin when compared to other available methods, for which the discrimination of meat origin was not equally applicable in some cases. Our new development of species-specific primer sets could be multiplexed in a single PCR reaction to significantly reduce the time and labor required for determining meat samples of unknown origin from the 8 species. Therefore, the technique developed in this study can be used efficiently to trace the meat origin in a commercial venture and help consumers to preserve their rights knowing origin of meat products for social, religious or health consciousness.
DNA hybridization assay using probes prepared from liver was carried out to identify species characterization of the domestic animals. Gel electrophoresis showed that the target DNA extracted from raw muscle were 1kb and uniform pattern while fragments size of heated muscle were irregular. Hybridization was performed by adding 200ng/ml probe in hybridization solution and incubating for 12 hours at $68^{\circ}C$. To obtain good discrimination, applied washing buffer and washing step differently depending on the species. The probes of pig, horse and dog formed the specific hybrids with each target DNA respectively. Although cross reaction was detected in cattle, goat and sheep but signal intensity among these species made the discrimination possible each other. Such pattern was the same in the cases of chicken, turkey and duck. The hybridization pattern of heated muscle was similar to that of raw muscle in general, but the signal intensity was inferior to that of raw muscle. Species identification between closely related animal species, hybridized using the target DNA of such closely related animal species as a blocking agent, remarkable increase of discrimination from the evident decrease of non specific reaction compared with the control group. In addition, in the admixture where certain meat was included in the beef, pork, chicken meat, we could find whether any unjust meat was admixed or not. In this case, detection limit of certain meat in admixture was 1%.
치아우식중의 원인균 중 하나인 Streptococcus mutans를 종 수준에서 동정할 수 있는 중합효소연쇄반응 프라이머를 개발하기 위하여 본 연구를 시행하였다. 표준균주인 S. mutans ATCC $25175^T$및 본 연구에서 이용된 S. mutans 균주들의 16S rRNA 유전자 핵산염기서열을 바탕으로 S. mutans 종-특이 중합효소연쇄반응 프라이머(ChDC-SmF2와 ChDC-SmR2)를 설계 및 제작하였다. 프라이머의 특이도는 S. mutans 11균주와 구강 내 존재하는 12세 균 종(22균주)을 대상으로 실시하였다. 프라이머의 민감도는표준균주인 S. mutans ATCC $25175^T$의 유전체 DNA를 추출하여 실시하였다. 프라이머의 특이도 실험결과 10균주의 S. mutans 유전체 DNA에서만 종-특이 중합효소 연쇄반응 산물이 증폭되었고, 다른세균종의 유전체 DNA에서는 증폭되지 않았다. 또한 감수성 실험 결과 본 연구에서 사용된 프라이머는 direct PCR에 의해 S. mutans ATCC $25175T\^T$ 유전체 DNA 100 pg까지 검출 할 수 있었다. 또한 27F와 1492R 프라이머로 16S rDNA를 먼저 증폭한 다음, 이 증폭물 10배 회식한 것을 표적으로 해서 nested PCR을 시행한 결과 S. mutans ATCC $25175^T$ 유전체 DNA를 2 fg까지 검출할 수 있었다. 이상의 결과를 종합할 때, ChDC-SmF2와 ChDC-SmR2 프라이머들은 S. mutans 균주 유전체 DNA에 대한 높은 민감도를 가지고 있으며, 종-특이적으로 동정 및 검출하는 데 이용될 수 있을 것으로 생각된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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