Salmonella is a major foodborne pathogen that causes a variety of human diseases. Development of ligands directly and specifically binding to the Salmonella will be crucial for the rapid detection of, and thus for efficient protection from, the virulent bacteria. In this study, we identified a RNA aptamer-based ligand that can specifically recognize Salmonella Typhimurium through SELEX technology. To this end, we isolated and characterized an RNase-resistant RNA aptamer that bound to the OmpC protein of Salmonella Typhimurium with high specificity and affinity ($K_d$ ~ 20 nM). Of note, the selected aptamer was found to specifically bind to Salmonella Typhimurium, but neither to Gram-positive bacteria (Staphylococcus aureus) nor to other Gram-negative bacteria (Escherichia coli O157:H7). This was evinced by aptamer-immobilized ELISA and aptamer-linked precipitation experiments. This Salmonella species-specific aptamer could be useful as a diagnostic ligand against pathogen-caused foodborne sickness.
Zeolite is an ideal host material for encapsulating nano-size metal catalyst species because of its defined microporous structure, prominent adsorption/condensation properties, high surface area, chemical/thermal stability, and transparency to light. In this study, $TiO_2$ photocatalyst was incorporated in highly hydrophobic Y zeolite and its photocatalytic activity was examined in the photocatalytic oxidation of olefins under UV-light irradiation using molecular oxygen as an oxygen source. $TiO_2$ nanoparticles incorporated in hydrophobic Y zeolite exhibited a markedly enhanced photocatalytic activity compared with bare $TiO_2$ owing to its excellent affinity toward organic moieties, which facilitates the mass transfer of organic substrates and allows them to efficiently access to the neighboring active $TiO_2$ surface.
We theoretically consider blends of two monodisperse one-end-functionalized homopolymers (denoted by A and B) capable of forming clusters between functional groups (stickers) using weak segregation theory. In this model system resulting molecular architectures via clustering resemble star copolymers having many A- and B-arms. Minimizing the total free energy with respect the cluster distribution, the equilibrium distribution of clusters is obtained and used for RPA (Random Phase Approximation) equations as input. For the case that polymers are functionalized by only one kind of sticker, the phase diagrams show that the associations promote the macrophase separation. When there is strong affinity between stickers belonging to the different polymer species, on the other hand, the phase diagram show a suppression of the macrophase separation at the range of high temperature regime, as well as the phase coexistence between a disordered and a mesoscopic phase at the relatively lower temperatures.
Label-free optical methods for the monitoring of interactions between biological molecules have become increasingly popular within the last decade. A rising number of publications have demonstrated the benefits of direct biomolecular interaction analysis(BIA) for biology and biochemistry, such as antigen-antibody Interactions, receptor-ligand interactions, protein-DNA, DNA- intercalator, and DNA-DNA interactions. This article gives an overview of the historical development, principle and application of label-free optical biosensor to examine the functional characteristics of biospecific interaction, such as kinetics, affinity, and binding position of biomolecular between an immobilized species at the transducer surface and its dissolved binding partner.
In search of simple host molecules for uranyl ion which form 1: 1-type complexes with high formation constants that can be used either in extraction of uranium from seawater or in catalysis of biologically important organic reactions, the uranophile activities of dihydroxyazobenzene derivative 1 were studied. Uranyl ion and 1 form a 1: 1-type complex with a very large formation constant. The formation constant was measured at pH 7-11.6 by competition experiments with carbonate ion. From the resulting pH dependence, ionization constants of the two aquo ligands coordinated to the uranium of the uranyl complex of 1 were calculated. The ionization constants were also measured by potentiometric titration of the uranyl complex of 1. Based on these results, the pKa values of the two aquo ligands were estimated as 7.1 and 11.0, respectively. At pH 7.5-9.5, therefore, the complex exists mostly as monohydroxo species. Under the conditions of seawater, 1 possesses greater affinity toward uranyl ion compared with other uranophiles such as carbonate ion, calixarene derivatives, or a macrocyclic octacarboxylate. In addition, complexation of 1 with uranyl ion is much faster than that of the calixarene or octacarboxylate uranophiles.
To gain insight into the structure and function of repressor proteins of bacteriophages of gram-positive bacteria, repressor of temperate Staphylococcus aureus phage ${\phi}11$ was undertaken as a model system here and purified as an N-terminal histidine-tagged variant (His-CI) by affinity chromatography. A ~19 kDa protein copurified with intact His-CI (~ 30 kDa) at low level was resulted most possibly due to partial cleavage at its Ala-Gly site. At ~10 nM and higher concentrations, His-CI forms significant amount of dimers in solution. There are two repressor binding sites in ${\phi}11$ cI-cro intergenic region and binding to two sites occurs possibly by a cooperative manner. Two sites dissected by HincII digestion were designated operators $O_L$ and $O_R$, respectively. Equilibrium binding studies indicate that His-CI binds to $O_R$ with a little more strongly than $O_L$ and binding species is probably dimeric in nature. Interestingly His-CI binding affinity reduces drastically at elevated temperatures ($32-42^{\circ}C$). Both $O_L$ and $O_R$ harbor a nearly identical inverted repeat and studies show that ${\phi}11$ repressor binds to each repeat efficiently. Additional analyses indicate that ${\phi}11$ repressor, like $\lambda$ repressor, harbors an N-terminal domain and a C-terminal domain which are separated by a hinge region. Secondary structure of ${\phi}11$ CI even nearly resembles to that of $\lambda$ phage repressor though they differ at sequence level. The putative N-terminal HTH (helix-turn-helix) motif of ${\phi}11$ repressor belongs to the HTH -XRE-family of proteins and shows significant identity to the HTH motifs of some proteins of evolutionary distant organisms but not to HTH motifs of most S. aureus phage repressors.
HTLV-I 의 gag-pro 유전자 중첩영역내에서 -1 ribosomal frameshifting 이 일어나는 자리를 결정하기 위하여 gag-pro 중첩영역의 일부를 SP6 promoter 를 가진 백터내에 클로닝하였다. 그 결과 닭의 prelysozyme 에서 유래한 5개의 아미노산을 코드하는 합성유전자와 141 bp 로된 gag-pro 중첩영역의 뒤에 Straphylococcus aureus 의 protein A 유전자단편이 연결된 hybrid 유전자를 보유한 플라스미드를 제작하였다. 이 DNA 클론을 주형으로 SP6 RNA polymerase 의 작용에 의해 한종류의 mRNA 를 다량으로 합성하였다. Invitro 에서 합성된 mRNA 로 무세포계에서 단백질을 합성한 결과 21 kDal 의 단백질이 생성되었고 IgG-Sepharose 를 사용한 affinity chromatography 로 합성된 단백질을 순수하게 정제할 수 있었다. 본연구에서 설명한 in vitro 실험계는 Gag-Pro transframe 단백질의 신속한 정제 및 일차구조의 결정에 유익하게 사용될 것으로 보이며 이와 같은 실험의 결과 mRNA 에서 ribosomal frameshifting 이 일어나는 정확한 site 를 결정할 수 있을 뿐 같은 실험의 결과 mRNA 에서 ribosomal frameshifting 이 일어나는 정확한 site 를 결정할 수 있을 뿐 아니가 pro 유전자의 발현에 필요한 frameshift 를 유도하는 tRNA 의 동정도 가능하게 될 것이다.
Immobilon-AV Affinity membrane에 L-glutamate dehydrogenase를 고정하여 유리질 탄소전극에 부착시킨 전극을 사용하여 암모니아를 전류법으로 정량하였다. 이때 환원형의 NADH가 $NAD^+$로 산화될 때 전류를 +1.0 volt vs. Ag/AgCl에서 측정하였다. 효소 고정화된 membrane을 부착시킨 전극의 감응 특성은 다음과 같다. 곧 직선 감응 농도 범위는 $4.0\;{\times}\;10^{-5}\;{\sim}\;4.0\;{\times}\;10^{-4}$ M이었으며, 정량한계는 2.0 ${\times}\;10^{-6}$ M이었다. 또한 감응 시간은 2분이었으며 효소 고정화된 막의 최적 pH와 수명은 각각 pH 7.3∼7.6 (Dulbecco's buffer 용액)과 25일이었다. 그리고 다른 생리활성 물질의 방해는 없었다.
금속광산 일대의 비소오염 지중 복원기술로써 투수성 반응벽체의 흡착제로 철산화물인 적철석 피복 모래의 적용가능성을 평가했다. 이를 위해서 흡착곡선실험, 비소제거속도실험 및 컬럼내 비소 제거 실험을 통해서 철산화물 피복 모래에 의한 비소 3가와 비소 5가의 제거 효율 및 유동환경에서의 비소 제거능력에 대해 고찰하였다. 적철석 피복 모래는 1.0 mg/L 수준의 낮은 비소 농도에서 높은 흡착력을 보이는 선형 등온 흡착곡선을 보였다. 컬럼실험에서 높은 피복모래의 안은 비소제거효율을 높였으나, 비소 3가가 비소 5가보다 흡착력이 떨어지고 지하수의 유동적인 환경에서 비소의 물리적 확산 현상으로 흡착반응속도의 저하 때문에 제거양이 감소했다. 따라서, 유동적인 환경에서 피복모래의 상대적인 양, 비소화학종의 흡착력, 흡착반응속도가 제거 효율을 좌우했다.
현재 바이오 분야에서 분리에 대한 수요가 급증함에 따라, 투과율 및 결합능 측면에서 높은 성능을 띠는 막크로마토그래피가 수지 크로마토그래피의 대체 분리 공정으로 부상하고 있다. 실증을 기반으로 하여 막 소재가 결정되는 기존 분리막 공정과 달리, 막크로마토그래피의 경우 분리하고자 하는 목표 물질에 적합한 분리 메커니즘 이해 그리고 이를 기반한 공정 설계가 필요하다. 본 논문에서는 생특이성을 활용하여 선택적으로 거대 분자를 포집하는 친화성 작용, 전하를 활용하여 생분자와 결합하는 이온 교환 작용 그리고 소수성을 활용하여 생분자와 결합하는 소수성 작용과 같은 막크로마토그래피 주요 분리 메커니즘들에 대해 다루고자 한다. 또한 본 논문에서는 단계적 측면에서 또는 소재 측면에 막크로마토그래피 기술설계 시 고려해야할 변인들에 대해서 다루고자 한다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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