• Applied Biological Chemistry
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• 제47권4호
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• pp.430-433
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• 2004

Lilium cv. Casablanca pollen grains stored at $-70^{\circ}C$ were grown in pollen germination medium with Agrobacterium tumefaciens LBA4404 cells harboring pBI121 for 18 hr at $27^{\circ}C$. Following this, cefotaxime (250 mg/L) was treated for 6 hr to eradicate the bacterial cells. Histochemical GUS analysis revealed that the transgenic pollen displayed deep blue color mostly from 12 hr after the co-cultivation. Presence of $200\;{\mu}M$ acetosyringone was determined not to be more effective for GUS transformation than its absence. GUS DNA integration in the transgenic pollen genomic DNA was clearly demonstrated by Southern blot analysis.

• 한국동물학회지
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• 제38권2호
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• pp.177-185
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• 1995

두 지역에서 채집한 초파리 자연집단에 대하여 난소발생이상 실험에 의한 P 인자 활성과 세포질형을 분석하여 P 전이인자의 계통형을 조사하였다 전체 238 isofemale line을 조사한 결과 strong P와 true M은 존재하지 않았고, 0(weak P)와 M'(pseudo M) strain이 전체의 98.74%를 차지하여 가장 우세하게 분포하고 있었다. P$\pi$25.1 probe를 이용한 in situ hybridization을 행하여 P 전이인자의 copy수를 조사한 결과 평균 42.12개로 나타났으며, 0와 M'의 계통형 간에 유의적인 차이는 없었다 그러나 염색체 firm당 COPy수는 X염색체가 상염색체의 좌 우 각 arm보다 다소 높게 분포하고 있었고. 염색체상 P 전이인자의 삽입부위에 대한 특이적 좌위는 존재하지 않았다 P 전이인자의 분자구조에 대한 변이형을 조사하기 위하여 southern blot hybridization을 행한 결과 2.9kb의 완전한 크기의 분자를 포함하여 여러종류의 단편들이 확인되었다 조사한 모든 isofemale line에서 KP(1. 15kb)인자를 포함하고 있었으며 이들 KP인자가 P-M System의 난소발생이상을 표현하는데 있어 억제적 작용을 하는 것으로 판단되었다.

• 한국초지학회:학술대회논문집
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• 한국초지조사료학회 2005년도 학술심포지엄, 제43회 학술발표회
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• pp.194-195
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• 2005

• Journal of Plant Biotechnology
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• 제32권4호
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• pp.263-268
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• 2005

Porcine epidemic diarrhea virus (PEDV)는 돼지의 급성장염을 유발하여 설사 증상을 일으키는 바이러스이다. 본 연구에서는 고구마 저장뿌리 고발현 sporamin 프로모터 및 CaMV 35S promoter를 이용하여 PEDV 항원단백질을 생산하는 고구마 식물체를 개발하고자 하였다. 형질전환 벡터를 제작하기 위하여 PEDV에서 항원성이 알려진 스파이크 단백질의 일부분을 암호화하는 유전자를 PCR로 합성하였다. 고구마 [Ipomoea batatas (L.) Lam] 율미 품종의 배발생 캘러스를 재료로 하여 Agrobacterium tumefaciens을 매개로 형질전환하였다. 선발배지 (MS medium, 1 mg/L 2,4-D, 100 mg/L kanamycin, and 400 mg/L claforan)에서 배발생 캘러스를 3주 간격으로 4개월 동안 계대배양하여 카나마이신 저항성 캘러스를 선발하였다. 선발된 배발생 캘러스를 호르몬을 제거한 배지로 옮겨 체세포배를 유도하였으며 이후 shoot과 뿌리가 형성되었다. 재분화된 소식물체를 대상으로 PCR 분석으로 카나마이신 저항성 재분화 개체의 50% 이상이 도입 유전자를 가지고 있었으며 이들 식물체를 대상으로 Southern blot 분석하여 PEDV 유전자가 고구마 식물체의 게놈으로 안정적으로 도입되었음을 확인하였다. 형질전환 식물체에서 도입유전자의 발현을 RT-PCR로 분석한 결과 PEDV의 spike 유전자가 높은 수준으로 발현하였다.

• Journal of Plant Biotechnology
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• 제46권3호
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• pp.180-188
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• 2019

옥신은 식물의 생장과 발달 과정에서 중요한 조절자로서 기능한다. 옥신 신호전달 과정은 3개의 주요 옥신 반응 전사인자인 Auxin/indole-3-acetic acid (Aux/IAA), Gretchen Hagen 3 (GH3), 그리고 small auxin up RNA (SAUR) 유전자에 의해 조절된다. 특히, Aux/IAA는 옥신 신호에 반응하여 빠르게 축적되는 수명이 짧은 핵 단백질이다. 이 실험에서 우리는 현사시 나무(Populus alba ${\times}$ P. glandulosa)로 부터 PagAux/IAA1 유전자를 분리하고 발현 특성을 분석하였다. PagAux/IAA1 cDNA는 4개의 보존된 도메인과 2개의 nuclear localization sequence (NLS)을 포함한 200개의 아미노산을 암호화하고 있다. Southern blot 분석으로 현사시나무 genome에 PagAux/IAA1 유전자가 single copy로 존재하는 것을 확인하였다. PagAux/IAA1 유전자는 잎과 꽃에서 특이적으로 발현되었다. 그리고 PagAux/IAA1 유전자는 현탁배양세포의 생장 과정에서 초기 지수생장기에 발현되었다. PagAux/IAA1 유전자의 발현을 분석한 결과, 건조와 염 스트레스 및 식물호르몬인 ABA 처리에 의해 발현이 감소된 반면 저온 스트레스, 형성층의 세포 분열 과정 그리고 식물호르몬인 GA와 JA 처리에서 발현이 증가하였다. 따라서 PagAux/IAA1 유전자가 현사시나무에서 저온 스트레스 반응뿐 아니라 생장 과정에 관여할 것으로 판단된다.

• 생명과학회지
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• 제20권2호
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• pp.176-182
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• 2010

벼의 생산에 있어 가장 큰 문제 요인 중 하나인 벼도열병의 발생 원인균인 벼도열병균은 다양한 기작에 의해 방제 약제에 대한 내성을 가지는 것으로 알려져 있다. 막 운반단백질인 ABC transporter의 경우 환경으로부터의 다양한 독성 물질들을 배출하는 것으로 알려져 있다. 이미 알려진 벼도열병균의 게놈 서열로부터 생물정보학적 분석을 통하여 ABC transporter 단백질의 도메인 특성을 보이는 33개의 유전자군 서열을 예측하였다. 이중 3개의 경우는 이미 알려진 유전자로 판명되었다. Southern Hybridization 분석에 적용한 20개의 유전자들이 모두 게놈상에 단일 copy로 존재함을 확인하였다. 새로 예측된 30개의 유전자중 11개는 RT-PCR을 통하여 전사단계에서의 유전자 발현이 확인되었다.

• 식물조직배양학회지
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• 제21권4호
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• pp.187-192
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• 1994

밀의 조직절편을 직접 유전자 전이에 의해서 형질전환시켰다. 기계적으로 잘려진 뿌리조직 절편은 pBl 121 plasmid DNA와 electroporation 방법으로 형질전환시켰으며 300mg/L kanamycin을 함유하는 MS 배지에서 배양하였다. 형질전환된 캘러스는 배양한 지 5-7일이내에 개시되었으며 4주 후 선발되었다. 형질전환 효율의 최적수준은 200 V/ 800uF이었으며 2.5%로 형성되었다. GUS 분석과 southern 분석은 뿌리절편과 절편유래 캘러스로부터 외래유전자의 발현과 안정한 형질전환이 이루어졌음을 보여주었다.

• 한국초지조사료학회지
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• 제21권3호
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• pp.151-156
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• 2001

내열성 유전자인 BcHSP17.6를 갖도록 제작한 발현벡터 pBKH4를 Agrobacterium tumefaciens LBA 4404에 도입후, Agrobacterium과 알팔파 캘러스의 공배양을 통해 감염시킨 캘러스를 $100{\mu}g/m{\ell}$의 kanamycin과 $500{\mu}g/m{\ell}$의 cefotaxim을 첨가한 SH-kc배지에서 배양하며 형질전환된 캘러스를 선발하였다. 식물체 재분화는 SH- nk-c, SH-sp-c, SH-11b-c, SH-1BA 배지에서 약 4개월간 배양하여 재분화를 완성하였으며, 재분화된 알팔파의 genomic DNA를 분리한 후, PCR 분석 및 Southern blot 분석을 실시하여 알팔파의 형질전환을 확인하였다.

• 생명과학회지
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• 제21권5호
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• pp.671-677
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• 2011

대두의 세포막에 존재하는 SCA1은 칼모듈린에 의해서 조절된다는 내용을 이전에 보고하였다. 본 연구에서는 대두의 $Ca^{2+}$-ATPase인 SCA2에 관한 특성을 연구하였다. SCA2는 SCA1과 아미노산 서열 비교에서 78%로 높은 유사성을 나타내며, 10개의 transmembrane 도메인이 존재하는 것을 확인하였다. CaM overaly assay로부터, SCA2는 칼슘에 의존적인 방법으로 칼모듈린과 결합한다는 것을 보여주었으며, Southern blot 분석 결과, 대두의 genome에는 두 종류의 $Ca^{2+}$-ATPase가 존재하는 것으로 보인다. SCA2의 $Ca^{2+}$-ATPase 효소활성을 확인하고자 yeast mutant를 이용하여 complementation assay를 수행해 보면, SCA2가 $Ca^{2+}$-ATPase의 효소활성을 가지는 것을 보여 주었다. 이러한 결과들은 SCA2가 식물에 존재하는 type IIB $Ca^{2+}$-ATPase들과 구조적으로 높은 유사성을 가진다는 것을 시사한다.

• Journal of Plant Biotechnology
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• 제38권1호
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• pp.42-48
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• 2011

고등식물의 엽록체 유전공학은 핵 형질전환과 비교해 볼때 여러 가지 독특한 장점을 가진다. 높은 transgene 발현율, 상동 재조합에 의한 site-specific transgene의 삽입으로 인해 유전자의 position effect가 없으며, 단일 형질전환으로 동시에 여러 유전자의 도입이 가능하고 모계 유전으로 인해 화분 방출 위험을 감소시킬 수 있다. 담배 specific한 pCtVG (trnI-Prrn-aadA-mgfp-TpsbA-trnA) 벡터를 이용하여 안정적인 감자 엽록체 형질전환 시스템을 개발하였다. 감자 엽록체 게놈으로 외래유전자의 삽입과 homoplasmic level은 PCR과 Southern blot 분석으로 확인하였다. Northern과 immunoblot 분석 및 GFP fluorescence imaging을 통하여 엽록체 형질전환체의 잎에서 GFP 유전자가 강하게 발현, 축적됨을 알 수 있었다. 본 연구에서 확립된 감자 엽록체 형질전환 시스템을 이용하여 유용 유전자를 도입함으로써 농업적 형질을 개선하거나 고부가가치 단백질을 대량 생산하는 감자를 보다 효율적으로 개발할 수 있을 것이다.