Certain types of somatic cells, as well as follicular cumulus cells associating with mammalian oocytes, are known to produce beneficial effects on in vitro fertilization and pre implantation development of mammalian eggs when they are present in oocyte culture medium. To investigate the nature of the effects of somatic cells, the resistance of mouse oocytes against chymotrypsin treatment was examined after culture within various cell conditioned media. When mouse oocytes matured for 17-18 hr in the presence of cumulus cells were treated with 1 % chymotrypsin, half of them remained still alive even after 240 min $(t_{50}>240.0)$. In contrast half of mouse oocytes cultured without cumulus cells underwent degeneration within 65.0 min $(t_{50}=65.0{\pm}13.2min)$ of the same treatment. To see if the effects were duc to the secretory products of cumulus cells, mouse cumulus cells were cultured for 20 hr in medium containing 0.4% BSA and the supernatant of culture medium (conditioned medium) was taken. After maturation in the cumulus cell conditioned medium, mouse oocytes exhibited $t_{50}=190.0{\pm}10.8$ min upon chymotrypsin treatment whereas half of oocytes cultured without conditioned medium degenerated within 25.5 min. Human granulosa cell conditioned medium gave similar effects such that oocytes matured in conditioned medium exhibited $t_{50}=183.3{\pm}19.1$ min while $t_50$ of control group oocytes was $60.0{\pm}6.8$ min, Oocytes matured in vero cell conditioned medium exhibited $t_{50}=196.7{\pm}8.8$ min. On the other hand, amniotic cell conditioned medium resulted in the chymotrypsin resistance of $t_{50}=80.0{\pm}8.4$ min which was not statistically different from the control value of $t_{50}=48.0{\pm}13.2$ min. Based upon these results, it is suggested that certain somatic cell types including cumulus cells might change the biochemical properties of mouse oocyte membrane during meiotic maturation as revealed by the enhanced resistance against chymotrypsin treatment. Such effects of somatic cells appear to be mediated via the secretory products rather than direct communication between somatic cells and oocytes.
Large quantities of high-quality recipient oocytes with uniform cytoplasm are needed for research in the promising field of somatic cell nuclear transfer (SCNT) and embryonic stem cell research. In canines, however, it is difficult to obtain large quantities of oocytes because each donor produces a limited number of mature oocytes in vivo. Although in vitro maturation (IVM) is considered an alternative approach to oocyte production, this technique is still too rudimentary to be used for the production of highquality, uniform oocytes in large quantities. One technique for overcoming this difficulty is to use oocytes obtained from different species. This technique is known as interspecies SCNT (iSCNT). This review provides an overview of recent advances in canine - porcine interspecies SCNT.
To find out the effect of oxytocin on somatic cell count and milk production, 12 primiparous and multiparous Murrah buffaloes were selected, immediately after the parturition, from the Institute's buffalo herd. These were divided into two groups of 6 each. Buffaloes of group I did not receive oxytocin injection (control); whereas, buffaloes of group II were administered oxytocin during early lactation (av. 42.50 days). The oxytocin injection was given in doses of 2.5 IU i.m. before the start of milking, to let down the milk, for a period of 5 days. Samples of milk from individual buffaloes were collected for 5 days before (Period I), during (Period II) and after (Period III) from both the group of buffaloes. Milk samples of A. M. and P. M. milking were composited in proposition to milk yields for analysis of milk constituents. Normal values of somatic cell counts in group I of buffaloes varied from 0.54 to $0.75{\times}10^{5}cells/ml$. Mean cytoplasmic particles and epithelial cells varied from 3.68 to $7.19{\times}10^{5}cells/ml$ and 0.13 to $0.54{\times}10^{5}cells/ml$. On percentage basis the epithelial and the total leucocyte count were 60 and 40. Total leucocyte count, in the study varied from 0.17 to $0.69{\times}10^{5}cells/ml$. The differential cell count of milk indicated presence of lymphocytes (16.50 to $61.16{\times}1000$), neutrophil (0.00 to $2.00{\times}1000$) and monocyte (0.00 to $18.16{\times}1000$). Somatic cell count (p<0.01) and epithelial cells (p<0.05) varied between buffaloes and between periods of study. Total leucocyte counts of milk were also significantly varied between periods (p<0.05). The change in fat, lactose, chloride, EC and NEFA concentrations during different periods of study, were highly significant, indicated diurnal variations in different buffaloes during different days of experiment. Administration of oxytocin resulted in increase in somatic cell counts of milk (p<0.01) due to the increases in total leucocyte count (p<0.01) during the treatment period. The differential cell count indicated that oxytocin administration increased lymphocyte number significantly (p<0.01). However, secretion of neutrophil, monocyte and cytoplasmic particles were not affected by oxytocin. Eosinophil and basophil cell, though present in few samples, remain unaffected by oxytocin administration. There was no effect of oxytocin on milk production, composition, pH, EC and NEFA concentration.
Since goat milk infant formula has been increased, it is expected that goat milk consumption would be increased. This review summarizes the characteristics of goat milk especially, milk fat, somatic cell count, and goaty flavor. Average milk fat content for one year of twelve goat milk farms was 3.6%, but $2.9{\sim}3.1%$ in summer, which means summer goat milk could not meet the 'Processing and Ingredient Standard for Animal Products'. More than 3.2% for goat milk fat content in 'Processing and Ingredient Standard for Animal Products' should be amended. In addition to, hygienic standard for goat milk should be newly established because goat milk has naturally higher somatic cell count with noninfectious factors. It is thought that 6-trans nonenal and some branched fatty acids are responsible for the goaty flavor. It is necessary to minimize goaty flavor from farm to table because goaty flavor is the most important factor for the promotion of goat milk industry.
The Somatic cell nuclear transfer (SCNT) method can be applied to various fields such as species conservation, regenerative medicine, farming industries and drug production. However, the efficiency using SCNT is very low for many reasons. One of the troubles of SCNT is that it is highly dependent on the researcher's competence. For that reason, four somatic cell nuclear injection methods were compared to evaluate the effect of hole-sealing process and existence of cytochalasin B (CB) on efficiency of murine SCNT protocol. As a results, the microinjection with the hole-sealing process, the oocyte plasma membrane is inhaled with injection pipette, in HCZB with CB was presented to be the most efficient for the reconstructed in SCNT process. In addition, we demonstrated that the oocytes manipulated in Hepes-CZB medium (HCZB) with CB does not affect the developmental rate and the morphology of the blastocyst during the pre-implantation stage. For this reason, we suggest the microinjection involving hole-sealing in HCZB with CB could improve SCNT process efficiency.
태백벼의 현탁배양세포주로부터 유도된 체세포배를 낱개로 알진산 캡슐화하여 인공종자화하였다. 인공종자는 1/2 MS 고체배지에서 73%의 발아율을 나타내었으며 알진산 캡슐은 체세포배의 발아율에 영향을 주지 않았다. 그러나 멸균되지 않은 여과지에서는 발아율이 60%로 낮아졌다. 캡슐화된 진정종자는 무균상태여부에 관계없이 높은 발아율을 나타내었다. 이상의 결과로 무균상태가 유지되지 않을 때 인공종자 발아율이 낮아지는 것은 체세포배가 진정종자의 접합자배보다 오염을 견디기 어렵기 때문인 것으로 사료된다.
본 실험은 사료 첨가제로써 Bromelain과 Zn-methionine의 급여가 착유우의 산유량 및 체세포 수 함량에 미치는 영향을 규명하고자 실시하였다. 홀스타인 착유우 8두(대조구 4두 및 처리구 4두)를 공시하여 대조구는 기본 사료를 급여하고 처리구에서는 Zn-methionine 133g/kg(Zn 20 및 methionine 46.7g)과 bromelain 50g/kg(br 30g/kg)을 경구투여하였다. 그리고 시험은 착유우의 비유초기에 8주간 실시하였다. 본 시험에서 얻은 결과는 다음과 같다. 두당 평균 유량은 대조구(29.6kg)에 비하여 처리구(30.2kg)에서 높게 나타났다(P<0.05). 우유내 체세포수는 대조구($260.8{\times}10^3/ml$)에 비하여 처리구($179.8{\times}10^3/ml$)에서 현저하게 낮게 나타났다(P<0.05). 따라서 이들 첨가물의 급여는 착유우의 산유량을 증가시키고 우유의 위생상 지표가 될 수 있는 체세포수의 감소를 가져오는 결과를 얻었다.
The present study was conducted for the production of transgenic cloned cows by somatic cell nuclear transfer (SCNT) that secrete human prourokinase into milk. To establish an efficient production system for bovine transgenic SCNT embryos, the offset was examined of various conditions of donor cells including cell type, size, and passage number on the developmental competence of transgenic SCNT embryos. An expression plasmid far human prourokinase (pbeta-ProU) was constructed by inserting a bovine beta-casein promoter, a green fluorescent protein (GFP) marker gene, and a human prourokinase target gene into a pcDNA3 plasmid. Three types of bovine somatic cells including two adult cells (cumulus cells and ear fibroblasts) and fetal fibroblasts were prepared and transfected using a lipid-meidated method. In Experiment 1, developmental competence and rates of GFP expression in bovine transgenic SCNT embryos reconstructed with cumulus cells were significantly higher than those from fetal and ear fibroblasts. In Experiment 2, the effect of cellular senescence in early (2 to 4) and late (8 to 12) passages was investigated. No significant differences in the development of transgenic SCNT embryos were observed. In Experient 3, different sizes of GFP-expressing transfected cumulus cells [large (>30 ${\mu}{\textrm}{m}$) or small cell (<30 ${\mu}{\textrm}{m}$)] were used for SCNT. A significant improvement in embryo development and GFP expression was observed when small cumulus cells were used for SCNT. Taken together, these results demonstrate that (1) adult somatic cells could serve as donor cells in transgenic SCNT embryo production and cumulus cells with small size at early passage were the optimal cell type, and (2) transgenic SCNT embryos derived from adult somatic cells have embryonic development potential.
The testis is composed of four cell types like supporting cells, steroid-producing cells, connective tissue cells and germ cells. Apoptosis is a common phenomenon during spormatogenesis. Apoptosis of germ cells can also be induced by exposure to radiation. Previous studies have shown that most types of germ cells are rather radiosensitive while somatic cells in testis are much more radio-resistant. The somatic cells in testis are divided to mainly Sertoli and Leydig cells. Though somatic cells are more radio-resistant than germ cells, radiation can induce the impairment of their function. This damaged function of somatic cells may accelerates degeneration of germ cell indirectly. Tn the present study, we have examined the apoptotic effect of mouse testis and irradiation effect of steroidogenesis of Leydig cells after irradiation.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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