Bradyrhizobium japonicum 은 콩과 식물의 뿌리에 감염하여 뿌리흑을 형성 질소를 고정하는 독특한 능력을 갖는 토양 세균이며 미생물 비료제로 사용되고 있다. 본 연구에서는 저온에서 전처리한 B . japonicum 균주를 여러 가지 환경스트레스 조건에 노출하였을 때 생균수의 변화를 확인하였다. 저온 전처리는 16시간 동안 $4^{\circ}C$의 조건을 유지했다. 다양한 스트레스(알콜, 과산화수소, 고온, 건조)에 노출하였을 때, 저온 전처리한 것이 그렇지 않는 것보다 10~1,000배 정도 높은 생균수를 유지하였다. 이러한 내성중진 현상에 전처리 동안 새로운 단백질 합성이 수반되는 것을 단백질 합성 저해제 인 chloramphenicol을 전처리 과정에 포함하여 확인하였다. 저온 스트레스 내성에 관여하는 유전자를 B. japonicum genome 으로부터 중폭하였고 염기서열 분석을 실시하였다. 실험에서 확인된 B . japonicum의 CSP (Cold shock protein) 단백질의 부분적 아미노산 서열은 이미 확인된 다른 균주의 Csp 단백질과 유사함을 확인하였다.
오차드그라스와 라디노클로버의 경합관계를 밝히기 위하여 기존초지에서 분주하여 동일한 밀도로 단·혼파조합을 조성하고 경합구로서 지상 및 지하를 투명아크릴판으로 격리처리하고 질소 및 인산비료를 시용하여 시비에 따른 반응을 조사하였다. 년4회 예취를 통한 목초수량에서 라디노클로버는 오차드그라스에 비하여 현저히 낮았고 LAI, 초고, 분얼력에서도 약세였다. 특히 혼파시에는 라디노클로버가 하부에 위치하며 수평엽의 초형을 가져 광리용 이 불량하였고 경합이 진행됨에 따라 점차적인 수량감소가 있었다. 이들의 경합상태를 지상부 경합과 지하부 경합으로 나누어 보았을 때 지하교 경합에서 라디노의 상대적 열세가 더욱 심하였고 이는 오차드그라스의 왕성한 근군확장과 양수분리용에서 유리하였기 때문이었다. 질소의 시비는 오차드의 경합력을 더욱 촉친하였고 인산의 시용은 라디노의 생육에 유리하게 작용하였으나 오차드에 미치지 못하였다. 혼파구의 수량은 오차드그라스의 단파수량보다 적었으나 두 초종의 평균인 'Expected Yield' 보다는 높아 혼파는 유리하였고 경합의 형태는 오차드그라스에 의한 '과잉보상'으로 오차드그라스는 라디노에 비하여 23.5% 가량 우점도를 나타내었다.
A potent protein degrading bacterium was isolated from soil samples of different environments. Polyphasic taxonomic studies and phylogenetic 16S rRNA sequence analyses led to identify the isolate IB No. 11 as a strain of Bacillus subtilis. The isolated strain was recognized to produce protease constitutively, and the maximum production (1.64 units/ml) was attained in a shake flask culture when the isolate was grown at $40^{\circ}C$, for 32 h in basal medium supplemented with starch (0.25%) and gelatin (1.25%) as sole carbon and nitrogen source, respectively. The optimum pH and temperature for the protease activity were determined to be pH 7.0 and $50^{\circ}C$, respectively. $Ca^{2+}$ and $Mn^{2+}$ enhanced remarkably the protease activity but neither showed positive effect on the protease's thermal stability. In addition, it was observed that the protease was fairly stable in the pH range of 6.5-8.0 and at temperatures below $50^{\circ}C$, and it could be a good candidate for an animal feed additive. The inhibition profile of the protease by various inhibitors indicated that the enzyme is a member of serine-proteases. A combination of UV irradiation and NTG mutagenesis allowed to develop a protease hyper-producing mutant strain coded as IB No. 11-4. This mutant strain produced approximately 3.23-fold higher protease activity (6.74 units/mg) than the parent strain IB No. 11 when grown at $40^{\circ}C$ for 32h in the production medium. The protease production profile of the selected mutants was also confirmed by the zymography analysis.
In order to identify the growth characterization, the yield and chemical composition of Jeju barnyard grass (Echinochloa crusgalli var. fiurnentacea(Roxb) Wight) based on seeding date in Jeju region, seeding carried out the 10-day intervals from March 27 to September 30 in 2000, respectively. Plant height was 143.2 cm, showing the highest on seeding date, April 6 among that of any other seeding date. On the other hand, those of early and late seeding gradually decrease. Plant height was 119.2 an in May 16 seeding. The results of stem diameter, number of withering leaves, number of leaves and fresh weight per plant were similar to those of the plant heights. The yield of fresh, dry matter forage, crude protein and TDN found the highest on April 6 seeding, 63.5 MT/ha, 13.9 MTha, 1.1 MT/ha, and 7.6 MT/ha, respectively. In early and late seeding, the yield was gradually decreased. In seeding May 16, the yield found .38.2 MTIha in fresh forage, 6.2 MTha in dry matter forage, 0.7 MT/ha in crude protein and 3.7 MTha in TDN, respectively. According to delaying the seeding date, March 27 to May 16, the contents of crude protein (from 7.9 to 10.8%), ether extract (from 4.6 to 6.0%), nitrogen free extract (from 45.1 to 46.5%), and TDN (from 54.2 to 60.8%) were gradually increased, respectively. On the other hand, those of crude fiber (from 28.9 to 25.6%) and crud ash (from 13.5 to 11.2%) were decreased. These results showed that April 6 was the optimum seeding date with the sole object of feed production of Jeju barnyard grass under the environmental condition like as atmospheric phenomena and soil in Jeju region. (Key words : Jeju barnyard grass, Seeding date, Forage yield, Chemical composition)
토양으로부터 분리한 균주 중 항진균 활성이 우수한 균주를 선발하여 B-1이라 명명하였다. B-1의 항균성 물질 생산에 대한 배양조건을 검토하기 위해 최적배지, 탄소원, 질소원, pH, 온도별로의 영향을 조사하였다. PDB 배지에서 항균력이 우수하였으며 탄소원$.$질소원에는 별다른 영향이 없었다. pH와 온도에서는 각각 pH 5.0, 28$^{\circ}C$에서 항균력이 우수하였다. 항균 활성은 진균에서 강하게 나타났으며 일부 세균에서도 항균력을 나타내었다. 항진균성 물질은 산, 알칼리 처리 후 잔존 활성은 70∼80%로 나타났으며 열처리시 완전히 실활되어 열에 대해 상당히 불안정하다는 것을 확인하였다. 항균성 물질위 용매 전용성을 위해 TLC를 통하여 분석하였으며 plate assy를 실시하여 항균성물질을 확인하였다. 항진균성 물질의 대량생산을 위해 기본배지인 PDB를 직접 실험실 내에서 제조하였으며 시판의 PDB와 비교하였을때 항균성 물질 생산면에서나 가격면에서 더 나은 결과를 보였다.
A new streptothricin family antibiotic producing Streptomyces spp. SNUS 8810-111 was isolated from a soil sample. Study of its morphological and physiological characters indicated that the antibiotic producing organism was a Streptomyces spp. Taxonomical studies suggested that the organism might belong to the genus streptomyces gougeroti. The organism produced antibiotics most in calcium carbonate-tryptic soy broth. The active principles were recovered from the broth with a cation exchange resin and eluted from the resin with HCI. Cellulose column chromatography gave two active principles.$^1H-^1H$ Homo-COSY study on the first compound revealed four structural components. Total hydrolysis of the antibiotic with HCI allowed isolation of $\beta-lysine$. From these data the antibiotic was found to be streptothricin D. The other compound showed one additional signal in the .$^1H$NMR and the $^{13}C$ NMR spectra. The signal was from a methyl group attached to a nitrogen atom. Comparison of the NMR signals with those of streptothricin D suggested that the compound was N-methyl-streptothricin D which was a new compound in the family of streptothricin antibiotics.
전국 각지의 토양 800점에서 총 1,506주의 균을 분리하였고 이들중에서 응유효소 생산균으로 20주의 균을 선정하였으며 교실보존 균들 중의 응유효소 생산균을 선정하여 응유효소 생산력을 비교하였으며 이들중 보존균 중의 Dothiorella ribis가 비교적 우수한 응유효소생산균임을 알고 이것을 밀기울에 배양할 때의 배양조건을 검토한 결과 밀기울에 대한 산수량은 $60{\sim]80%$ 산수의 pH는 4.0 정도, 질소원으로는 $(NH_4)_2SO_4$ 0.5%, 탄소원으로는 sucrose 3%정도, 무기염으로는 0.03%, 배양온도는 $30{\sim}35^{\circ}C$, 배양기간은 4일 정도가 적당함을 알 수 있었고 보다 장기간 배양하면 생성된 응유효소의 활성이 감퇴됨을 알수 있었다.
고분자 중합체를 생산 능력이 있는 균주를 토양에서부터 분리하여 형태학적 및 생화학적인 특성을 확인하고 Bacillus 속 균주를 동정하는 API-50CH/B kit를 사용하여 동정한 결과, Bacillus coagulans로 확인되어 B. coagulans DL-1으로 명명하였며 고분자 중합체를 생산하여 체외로 분비하는 균주임을 확인하였다. 플라스크 실험을 통하여 고분자 중합체 생산을 위한 B. coagulans DL-1의 최적 탄소원과 질소원 및 각각의 최적 농도는 2% (w/v) 포도당과 0.25%(w/v) yeast extract임을 확인하였다. 플라스크 실험에서 확립한 최적 배지조건과 1.0 vvm의 통기량 및 500 rpm의 교반속도로 $7\ell$ 생물배양기를 사용하여 수행한 회분식 배양에서의 최대 고분자 중합체 생산량은 5.00$\pm$0.15 g/$\ell$이었다. 가스 크로마토그라피를 사용하여 B. coagulans DL-1이 생산한 고분자 중합체의 구성 성분을 분석한 결과, 포도당과 람노오스로 구성되어 있으며 포도당과 람노오스의 구성 비율은 약 9 : 1 이었다. 또한 평균 분자량을 gel permeation chromatography로 측정한 결과, 2.80$\times$$10^5$이었다.
토양으로부터 tyrosinase 저해제를 생산하는 방선균 F-97을 분리하여 이 균주로부터 tyrosinase 저해제 생산을 위한최적 조건을 검토하였다. 그 결과는 다음과 같다. 탄소원으로는 soluble starch가 가장 좋았으며, 그 최적 농도는 3.0%였다. 질소원으로는 유기질소원인 peptone이 가장 좋았으며 최적 농도는 0.36%로 나타났다. 무기염으로 K$_2$HPO$_4$가 가장 좋았으며 최적농도는 0.1 mM이었다. 최적온도 30${\circ}$C와70시간의 jar fermentor 내에서 배양 시 최고의 tyrosinase 저해제생산성을 나타내었다.
토양으로부터 diaminododecane 자화균 DAD2-3주를 분리하여 Coryηebacterium속으로 동정하였다. DADZ2-3의 alkane유도체에 대한 생육특성조사에서 putrescine, dodecane, laurylamine 등은 탄소원으로 이용되었으나 dod-ecanethiol, thioanisole, decanedithiol, dicyanooctane, laurylcyanide, dichlorodecane등은 이용되지 못하였으며, emulgen 첨가에 의한 diaminododecane 자화촉진 효과는 미세하였다. DAD2-3림에 의해 diaminododecane 자화시 생성되는 중간생성불은 $\alpha$-ketoglutaric acid로 동정되었다. 그러나 d diaminododecane을 탄소원 뿐만 아니라 질소원으로도 이용하었을 경우 $\alpha$-ketoglutaric acid와는 상이한 중간 생성 풍을 생성하였으며, 탄소원으로 diaminododecane 대신 glucose, putrescine, n-dodecane을 사용하였을 경우와 또한 resting cell을 이용하여 여러가지 다른 alkane유도체를 co-oxidation시키는 과정에서도 $\alpha$-ketoglutaric acid와는 상이한 생성물이 생성되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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