A novel bacterium isolated from Cheonggukjang was identified as a glutamate-dependent Bacillus subtilis HA with 98.3% similarity to Bacillus subtilis Z99104. Optimization of poly-$\gamma$-glutamic acid ($\gamma$-PGA) production by modulating fermentation factors including carbon sources, nitrogen sources, inorganic salts and fermentation time was investigated. Optimum culture broth for $\gamma$-PGA production consisted of 3% glutamate, 3% glucose and various salts, resulting in the PGA production of 22.5 g/L by shaking culture for 72 hr at $37^{\circ}C$. Average molecular weight of $\gamma$-PGA was determined to be 1,220 kDa through MALLS analysis. The $\gamma$-PGA solution showed a typical pseudoplastic flow behavior, and a great decrease in consistency below pH 6.0 regardless of the same molecular weight of $\gamma$-PGA. The molecular weights of isolated $\gamma$-PGA were drastically decreased by heat treatment in various acidic conditions, resulting in different hydrolysis of $\gamma$-PGA. The consistency of $\gamma$-PGA solution was greatly decreased with increase heating time in acidic conditions.
In the course of studies on the production of thermostable amylases by thermophilic actinomycetes isolated from soils the investigation was carried out on the production of $\alpha$-amylase by G-1011 strain which had presented the most remarkable $\alpha$-amylase formation ability among 128 amylolytic isolates. The results were as follows : 1. Characteristics of G-1011 strain were compared with those descriptions of thermophilic actinomycetes given in Bergey's Manual. The strain was identical to these species of actinomycetes. The details of physiological properties of the strain luould he published in near future. 2. The optimum temperature for incubation of the cell growth of G-1011 strain and $\alpha$-amylase production by the strain was revealed to 5$0^{\circ}C$. 3. The effective medium for $\alpha$-amylase formation by the strain was consisted of 3.0%, soluble starch, 1.0%, peptone, 0.5%, yeast extract, 0.5%, NaCl, 0.1%, MgSO$_4$ㆍ7$H_2O$ 0.02%, $K_2$MPO$_4$and 0.002% FeSO$_4$ㆍ7$H_2O$. The pH of the medium was ajusted to 7.0 with phosphate buffer solution. 4. The maximum production of $\alpha$-amylase (3420 D. U/ml) by G-1011 strain resulted when it was grown for 16 hours with the culture of reciprocal shaking.
A microorganism capable of producing high level of extracellular cyclodextrin glucanotransferase(EC 2.4.1.19 ; CGTase) was isolated from Kimchi. 2-O-$\alpha$-D-glucopyranosyl L-ascorbic acid(AA-2G) was synthesized by transglycosylation reaction of CGTase using starch as a donor and L-ascorbic acid as an acceptor. The isolated strain S-6 was identified as Bacillus sp. S-6. The maximal CGTase production was observed in a medium containing 0.5% soluble starch, 1% yeast extract, 1% NaCO3, 0.1% K2HPO4, and 0.02% MgSO4 with initial pH 8.0. The strain was cultured at 37$^{\circ}C$ for 40 hr with reciprocal shaking. Using the culture supernatant as crude enzyme, the optimal pH and temperature of the CGTase activity of this strain were 7.0 and 4$0^{\circ}C$. In the effects of pH and temperature on the stability of the enzyme, the enzyme was stable in the range of pH 6.0~10.0 and up to 45$^{\circ}C$, respectively.
방사선 중합체로 고정화한 Rhizopus oryzae의 유산생성 방사선 공중합 고분자로 Rhizopus oryzae를 흡착 고정화하였다. 이 고정화 균체는 고정화하지 않은 생균체보다 반응시간도 짧았으며 제품수율도 아주 높았다. 즉 글루코스를 주 탄소원으로 한 경우 고정화 하지 않은 균체 배양은 반응후 96시간에 탄소원을 거의 소비하고 유산생성 수율이 약60%에 다다랐으나 고정화 균체는 반응후 48시간 안에 수율이 약 88%이상으로 되었다. 또 중합체 중 모노머의 비율이 5-10%의 것이 고정화에 좋은 결과를 보였다.
A strain capable of producing thermostable chitinase suitable for chitooligosaccharide production was isolated from high temperature environment and identified as Bacillus licheniformis. The chitinase from Bacillus licheniformis KFB-Cl4 was only induced by addition of colloidal thitin into the basal medium as carbon source, showing the decrease of the chitinase production by supplernental addition of other carbon sources into the medium containing 1.0% colloidal chitin. Among organic and inorganic nitrogen sources, yeast extract was the most effective for the increase of total activity and specific activity, and had high affinity for the enzyme production. The optimum temperature of cell growth and thermostable chitinase production was 55$\circ$C. The optimum culture medium was composed of 1.2% colloidal chitin, 0.15% K$_{2}$HPO$_{4}$, 0.05% KH$_{2}$PO$_{4}$, 0.01% MgSO$_{4}$-7H$_{2}$O, 0.1% yeast extract (pH 6.5). Bacillus licheniformis KFB-C14 produced the thermostable chitinase of 3.89 units per ml culture fluid and 7.4 units per mg protein under rotary shaking at 150 rpm for 40 hr.
A chitinase-producing bacterium was isolated from seashore mud around Beobseongpo in Chunmam province through the use of a selective enrichment culture. The best chitinase producing strain was isolated and identified as Serratia marcescens KY from its characteristics. For effective production of chitinase, optimum pH, temperature, and agitation speed were investigated in flask cultures. The optimum pH using Serratia marcescens KY was between pH 6 and 7 and the chitinase produced was 37.9 unit/mL. On the other hand, the optimal pH of the Serratia marcescens ATCC 27117 was 7.5, and the produced amount of chitinase was 35.2 unit/mL. The optimal temperature for chitinase production for Serratia marcescens KY and Serratia marcescens ATCC 27117 was $30^{\circ}$. The cell growth pattern at different temperature was almost identical to the chitinase production. To investigate the optimal shaking speed under optimal culture, speeds were varied in the range of 0∼300 rpm. The maximum production of chitinase was carried at 200 rpm although the cell growth was the highest at 150 rpm. It indicates that oxygen adjustment is required for the maximum chitinase production. Using optimal conditions, batch cultures for comparing Serratia marcescens KY and Serratia marcescens ATCC 27117 were carried out in a 5 L fermentor. The oxygen consumption was increased with the increase of culture. Especially, at 120 h of culture Serratia marcescens KY and Serratia marcescens ATCC 27117 produced 38.3 unit/mL, and 33.5 unit/mL, respectively.
Saccharomyces cerevisiae CY 균주에 의한 phytase의 생성은 진탕배양인 경우가 정치배양에 비하여 약 2배의 생성도를 보였다. CY 균주의 phytase는 세포내 효소활성이 세포외 효소활성에 비하여 약 3-4배 높게 나타났으나, 포도당이 1%로 저농도로 첨가된 배지에서는 세포내 효소활성과 세포외 효소활성의 분포비율이 1 : 1 정도로 유사한 비율로 나타났다. 세포내외로 생성된 총 phytase 활성은 포도당의 첨가농도에 상관없이 대략 1,000 mU/ml에 이르렀으며, 건조균체당 효소활성은 지수성장 말기에 170-190 mU/mg-DCW 범위에서 최대활성을 보였다. CY 균주의 세포내 효소의 최적 반응pH는 3.5이었으며, 최적 반응 온도는 $37-40^{\circ}C$이었다. 배양액에 존재하는 phytate는 성장하는 CY 균주에 의하여 배양 36시간째 4.3 mM phytate의 약 95%가 분해되었으며, 0.4 mg-DCW/ml의 균체농도를 갖는 현탁균체 반응액에서는 분해반응 12시간째 phytate의 약 90% 이상이 효율적으로 분해되었다.
나프탈렌 분해균주인 Pseudomonas aeruginosa CZ6을 오염된 토양에서 분리하였으며 분리된 균주는 결정상태의 나프탈렌에 부착하고 그 주변에 extracellular polymeric substance를 분비하는 특성을 가졌다. LB, YM과 MSM 배지를 사용하여 배지의 종류에 따른 biofilm 생성량을 측정한 결과, LB 배지에서 biofilm이 가장 많이 생성되는 것으로 나타났다. 나프탈렌을 기질로 한 배양조건에서 균주는 기질의 농도 영향을 크게 받지 않고 0.10% 기질, 150 rpm 조건에서 최적 배양조건은 $30^{\circ}C$, pH 7로 나타났다. 두 가지 토양에서 배지의 종류에 따른 나프탈렌의 분해특성을 관찰한 결과 초기에는 MSM 배지에서 나프탈렌이 가장 많이 분해가 되었다. 그러나 생물이용성이 제한을 받는 조건에서 LB 배지의 나프탈렌이 가장 빨리 제거가 되었다. 이런 결과는 biofilm의 형성과 extracellular polymeric substance 생성이 토양에 흡착된 잔류 나프탈렌의 생물학적 이용성을 향상시키기 때문인 것으로 사료된다.
하늘타리 (Trichosanthes kirilowii)로부터 조직배양 기법을 이용하여 약리작용을 나타내는 생리활성물질인 trichosantin을 생산하기 위한 연구로 Agrobacterium rhizogenes ATCC15834 의 감염을 통하여 기내 배양된 유묘의 잎절편으로부터 형질전환 모상근을 유도하였다. 유도된 모상근 clones으로부터 성장속도와 분지화 정도가 빠르며 단백질 합성능이 가장 우수한 TR-03 clones을 선발하였으며, 이를 사용하여 생체량과 배지내 가용성 단백질의 생산을 최대로 높일 수 있는 최적 배양조건을 조사하였다. TR-03 clone을 4% sucrose가 첨가된 MS 배지에 초기 접종농도 2 g (생중량)을 접종하여 100 rpm으로 배양시 생중량과 배지내 가용성 총단백질의 함량이 플라스크당 약 2.4 g (건중량)과 $28.3ug/\ell$으로 최대치를 나타내었다. 한편, 배지내 가용성 단백질에 대한 RIP활성 검정에서 배양 4주 후 21.3 unit로 최대치를 보였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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