• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제23권12호
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• pp.1708-1716
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• 2013

Conventional molecular detection methods cannot distinguish between viable and dead Escherichia coli O157 cells. In this study, the loop-mediated isothermal amplification (LAMP) method combined with propidium monoazide (PMA) treatment was developed to selectively detect viable E. coli O157 cells. Four primers, including outer primers and inner primers, were specially designed for the recognition of six distinct sequences on the serogroups (O157) of the specific rfbE gene of the E. coli O157 genome. PMA selectively penetrated through the compromised cell membranes and intercalated into DNA. Amplification of DNA from dead cells was completely inhibited by $3.0{\mu}g/ml$ PMA, whereas the DNA derived from viable cells was amplified remarkably within 1 h by PMA-LAMP. Exhibiting high sensitivity and specificity, PMA-LAMP is a suitable method for evaluating the inactivation efficacy of slightly acidic electrolyzed water in broth. PMA-LAMP can selectively detect viable E. coli O157 cells. This study offers a novel molecular detection method to distinguish between viable and dead E. coli O157 cells.

• 한국어병학회지
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• 제22권1호
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• pp.23-33
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• 2009

V. harveyi는 양식산업에서 중요한 해산 양식 어류와 새우류에 많은 폐사를 일으키는 병원체로 알려져 있다. 본 연구에서는 해산 양식어류에서 분리된 11개 strain의 Vibrio harveyi의 생화학적, 생리학적, 혈청학적, 면역학적 특성을 조사 하였다. 생화학적 특성과 TCBS agar에서 집락의 색깔이 달라 표현형의 차이가 있었고 V. harveyi 분리균주들은 편모항원에 의해 4개 이상의 혈청형으로 구분되었다. 어류에서 분리된 V. harveyi는 western blotting으로 26-34 kDa 사이에 동일한 크기의 major protein을 갖는 group A로 구분 되었고 넙치에 대하여 표준균주인 V. harveyi KCCM40866 보다 강한 병원성을 갖고 있었다. V. harveyi C05011로 면역 유도된 넙치는 다른 group A 균주를 인위감염 시켰을 때 높은 항병력을 나타내었다.

• Toxicological Research
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• 제28권4호
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• pp.225-233
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• 2012

The present study was carried out to examine the toxicity and target organs of oral cholera vaccine (OCV) after repeated oral administration in Sprague-Dawley rats for 6 weeks (3 administrations, once every 2 weeks). OCV is an inactivated oral cholera vaccine that contains Vibrio cholerae and confers protection against cholera caused by V. cholera serogroups O1 (Inaba and Ogawa serotypes) and O139 (strain 4260B). The animals were orally administered either OCV placebo (negative control) or OCV at a dose equivalent to 240 times the anticipated human dose. Throughout the administration period, no significant change was detected in clinical signs, body weight, food or water consumption, urinalysis results, hematological and clinical biochemistry test results, organ weights, necropsy, or histopathological examination results. Minor changes were found in hematological and clinical biochemistry tests; however, these changes were within normal ranges. The above results suggest that oral administration of OCV in rats did not induce any toxicologically meaningful changes, and the target organs could not be determined. This study was conducted in accordance with the guidelines established by Good Laboratory Practice (2009-183, KFDA, December 22, 2009) and the OECD Principles of Good Laboratory Practice (1997).

• 대한미생물학회지
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• 제22권2호
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• pp.147-153
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• 1987

Colonization factor antigen I(CFA I) has been shown to be one of several virulence factors that promote attachment of enterotoxigenic E. coli(ETEC) to small intestinal epithelial cells of humans. The ability of ETEC to produce mannose-resistant hemagglutination(MRHA) of human blood group A has been used to detect CFA I. To determine gastrointestinal carriage in Korean children of E. coli with MRHA and CFA I, 116 strains of E. coli from diarrheal children admitted to Hanyang University Hospital were examined for MRHA of human erythrocytes and the presence of CFA I. Of 45 ETEC strains, 18(40%) gave a positive MRHA($MRHA^+$) and eight(18%) were positive for CFA I(CFA $I^+$). ETEC with CFA I were all heat-stable enterotoxin(ST) producers and two of these strains were of serogroups $O_{25}$. Of 17 classic enteropathogenic E. coli(EPEC), 7(41%) were $MRHA^+$ but all were negative for CFA I(CFA $I^-$). Of 30 enteroadherent E. coli(EAEC) strains, 11(37%) were $MRHA^+$ and one was CFA $I^+$. Of 24 nonpathogenic E. coli, 4(17%) were $MRHA^+$ but all were CFA $I^-$. It was shown that MRHA was common in all strains of E. coli, CFA I was limited only to ST producing ETEC and EAEC; although MRHA is a useful screening procedure, serologic tests seem to be necessary to comfirm CFA I production. CFA I was associated with a lower proportion of ETEC isolates in Korea than has been reported for other locations.

• 대한수의학회지
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• 제38권4호
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• pp.793-802
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• 1998

Salmonellosis caused by a number of serotypes of Salmonella is an infectious, acute or chronic, zoonotic disease and characterized by enteritis and diarrhea, septicemia in animal. In these studies we investigated the prevalent serotypes of Salmonella causing animal salmonellosis in Korea and the 71 strains of Salmonella spp. were isolated from materials such as mesenteric lymph nodes, fecal samples from slaughtered animal. With the identification test results, the most prevalent serotypes were, in order, S stanley 31 strains (43.7%), S typhimurium 19 strains (26.8%) and S montevideo 11 strains (15.5%), respectively. And we could establish the method for detection of antibodies to broad variety of Salmonella serotypes. Lipopolysaccharide(LPS) antigen extracted from Salmonella was more sensitive and specific than outer membrane protein antigen from that for detection of Salmonella antibody by using an indirect ELISA. The optimal concentration of antigen was 100ng/ml of LPS, the dilutions of conjugate and serum were 1 : 1,000~2,000 and 1 : 200~400, respectively. The mix LPS-ELISA which was used by mixing LPS from S typhimurium (group B), S choleraesuis (group C) and S enteritidis (group D) were more rapid and effective than that used LPS from individual strain for detection of Salmonella serogroup O4, O7 and O9 antibody at the same time. We could obtain the high values of optical density ($0.73{\pm}0.32$) by mix LPS-ELISA on the farm which had occurred salmonellosis, but very low values of $0.17{\pm}0.06$ on the negative farm of salmonellosis. So, the mix LPS-ELISA may be used to monitor the serological surveillance for the presence of infection with a number of serotypes of Salmonella and would be useful for prevention and control of salmonellosis in animal.

• 한국식품과학회지
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• 제47권1호
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• pp.126-131
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• 2015

본 연구에서는 한국의 전통적인 식품인 비빔밥에서 2005년에서 2011년에 분리한 대장균에 대한 특성을 연구하였다. 전체 1,142건의 비빔밥에서 84 균주(7.4%)의 대장균이 분리되었다. 분리한 균주의 항생제 내성 분석 및 다제 내성 패턴은 ampicillin의 내성이 가장 높았으며 6 균주(7.2%)에서는 다제 내성을 보였다. 분리한 균주의 병원성 유전자 13종의 유무를 확인한 결과 5 균주(5.9%)에서 ent 유전자를 보유하여 STEC/EPEC 형의 대장균으로 분류되었다. 그러나 EIEC, EAEC, ETEC 형은 검출되지 않았다. 병원성 유전자가 검출되지 않은 대장균에 대한 혈청형은 O103 (1.2%), O91 (1.2%), O128 (6.0%)으로 확인되었고 O26, O157, O145, O111, O121 혈청형은 없었다. 동일한 O 혈청형 균주는 독소 유전자를 가지고 있는 것과 없는 것이 동시에 있다고 보고 되어 있고 혈청형으로 병원성 유전자를 구분하는 것은 균주의 특성에 따라 차이가 많이 나므로 향후 연구가 필요하다. 위해 요소가 있는 균주에 대해서 유전적 상동성을 시험한 결과 균주의 상동성이 낮아서 서로 다른 오염원에서 분리 되었음을 유추 할 수 있었다. 비빔밥은 다양한 재료를 사용하며 제조 과정이 복잡하기 때문에 대장균에 의한 오염의 가능성이 매우 높은 식품이다. 그러므로 원재료부터 완성까지 위생적으로 철저하게 조리해야 하며 교차 오염 방지 및 관리를 통해 안심하고 섭취할 수 있도록 해야 한다.

• 한국토양비료학회지
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• 제32권1호
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• pp.62-67
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• 1999

우리나라 밭토양에서 콩의 공중질소 이용량을 증대시킬 수 있는 기초자료를 얻고자 수원, 익산, 밀양, 고성, 남제주 지역 토착 B. japonicum의 콩 친화성과 혈청형을 조사하였다. 단원콩 등 8품종의 콩에서 B. japonicum의 공생적 친화성은 균주의 분포지역별로 큰 차이를 보였다. 지역별 B. Japonicum의 숙주 친화성은 고성 > 밀양 > 수원토양의 균주순으로 우수한 편이었다. 익산과 남제주토양 균주들츤 대체로 불량하였는데 특히, 단원콩과 장경콩, 은하콩 등에서 심한 경향이었다. 그러나, 근류무게와 콩 건물생산량 사이의 회귀식에서 본 결정계수값($R^2$)은 고성토양(0.51)에서 가장 높았고, 다음으로는 밀양토양(0.45), 익산토양(0.38), 남제주토양(0.28), 수원토양(0.24) 순이었다. B. japonicum의 혈청형은 YCK 117형(34.1%), YCK 141형 (6.5%), YCK 321형 (6.5%), YCK 445형 (4.7%), YCK 338형 (2.9%), YCK 150형 (1.2%). YCK 258형(0.6%) 등 7종 이상이었다. 그리고, YCK 117혈청형은 남제주토양에서 51.9%, 고성토양에서 45.8%, 익산토양에서 41.7%, 수원토양에서 34.2%, 밀양토양에서는 11.1%의 비율로 분포하였다.

• 한국토양비료학회지
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• 제21권2호
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• pp.141-148
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• 1988

본(本) 시험(試驗)은 우리나라 토착대두근류균(土着大豆根瘤菌)의 균주(菌株) 인식(認識)과 분류(分類)를 위하여 서울농대(農大) 시험포장(試驗圃場)의 13개(個) 대두품종근류(大豆品種根瘤)에서 순수분리(純粹分離)한 대두근류균(大豆根瘤菌) 27개(個)와 본(本) 실험실보유(實驗室保有) 대두근류균(大豆根瘤菌) 6개(個)에 대하여 혈청면역적(血淸免疫學的) 시험(試驗)을 행(行)하였으며 그 결과(結果)는 다음과 같이 요약(要約)된다. 1. 항원조성(抗原組成)이 상이(相異)한 4개(個)의 대두근류균(大豆根瘤菌)에 대하여 얻어진 4가지 항혈청(抗血淸)과 위 33개(個) 대두근류균(大豆根瘤菌)을 tube 응집반응(凝集反應), 응집소(凝集素) 흡착반응(吸着反應) 및 gel 면역확산반응(免疫擴散反應)을 실시(實施)한 결과(結果), 33개(個) 대두근류균중(大豆根瘤菌中) 25개(個)를 4가지 serogroup과 그에 속(屬)한 각(各) serotype으로 구분(區分)할 수 있었다. 2. 33개(個) 대두근류균중(大豆根瘤菌中) Hill, 밀양품종(密陽品種)에서 분리(分離)한 2가지 분리균(分離菌) 및 방사(放射), 장백품종(長白品種)에서 분리(分離)한 2가지 분리균(分離菌), 그리고 팔달(八達), 새알, 장백품종(長白品種)에서 분리(分離)한 4가지 분리균(分離菌)이 혈청면역학적(血淸免疫擧的) 검정(檢定)에 의하여 각각(各各) 동일균주(同一菌株)로 밝혀졌다. 3. 본(本) 실험결과(實驗結果), 혈청면역학적(血淸免疫學的) 방법(方法)에 의하여 우리나라 토착대두근류균(土着大豆根瘤菌)의 균주(菌株) 인식(認識) 및 체계적(體系的)인 분류(分類)와 아울러 균주(菌株)와 대두품종간(大豆品種間)의 친화성(親和性)을 밝히는 것이 가능(可能)하리라 생각된다.

• 한국식품과학회지
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• 제48권4호
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• pp.323-328
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• 2016

본 연구는 non-O157 EHEC의 혈청형별 증균 및 선택배지에서의 분리 조건 및 비교 시험을 하여 최적의 검출 방법을 제시하고자 하였다. EC medium with MUG broth, BRILA broth, mTSB broth with novobiocin 3종의 증균배지 성능 및 배양 조건의 비교 결과 EC-MUG 증균배지를 $42^{\circ}C$에서 24시간 배양하면 EHEC의 효율적인 증균이 이루어질 수 있을 것이라 생각된다. ENDO agar, Chromocult agar, TBX agar, CHROMagar$^{TM}$ STEC medium 4종의 선택배지에 가장 효과적인 배지를 확인결과 TBX agar가 검출율이 가장 높았으나 1종의 배지를 사용했을 경우 다양한 EHEC 혈청형 균를 검출 하기는 어렵다고 생각된다. 그러므로 EHEC를 효과적으로 검출하고자 할 경우 TBX agar와 보완이 가능한 그 외의 배지를 사용하여야 효과적인 검출이 가능할 것으로 생각된다. 또한, 각 배지가 혈청형에 따른 분리효율이 다르므로 본 연구 결과를 참조하여 가장 적합한 배지를 선택 해야 할 것으로 보인다. 향후 non-O157 EHEC의 적절한 기질을 사용하여 다양한 혈청형을 모두 검출 할 수 있는 효율적인 배지의 개발이 필요하다고 생각된다.

• 대한수의학회지
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• 제36권1호
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• pp.109-118
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• 1996

The Salmonella rfb gene encoding for the biosynthesis of the oligosaccharide-repeating units of the O-antigenic determinants was cloned and sequenced. A set of nucleotide primers(a forward and reverse) was selected to target a defined region of the guanosine diphospho-mannose(GDP-Man) pyrophosphorylase synthase gene : rfbM of Salmonella C serogroup. The primer set was used to develop a PCR-based rapid and specific detection system for Salmonella C1 serogroup. Amplification bands of predicted size(1,422bp) were generated from 11 different Salmonella C1 isolates. The bands were verified to be specific for the C1 serogroup by Southern blot analysis using reference homologous DNA specificity was further confirmed by the lack of reactivity with heterologous DNA derived from non-salmonella members of the family enterobacteriaeceae. A specificity of 100% was deduced along with a very high sensitivity shown by a detection limit of 1fg of a purified DNA template. The isolated DNA sequence was found to be 99.8% homologous to S montevideo but the related primers amplified with the predicted band sizes with all the Salmonella C1 serogroups tested. It is concluded that the PCR protocol based on the rfbM gene from S cholerasuis is optimal fast and specific for the detection of Salmonella C1 serogroup and also the corresponding probe is suitable for rapid detection of all Salmonella C1 serogroup DNA tested. This technology should facilitate the identification of contaminated pig products and for any other products contaminated with the Salmonalla C1 serogroup. The immediate impact of this developed method will be in the area of food safety of pig products with the potential prospect for adaptation to other food inspection technologies.