An increase in seawater temperature owing to global warming is expected to substantially limit the growth of marine algae, including Pyropia yezoensis, a commercially valuable red alga. To improve our knowledge of the genes involved in the acquisition of heat tolerance in P. yezoensis, transcriptomes sequences were obtained from both the wild-type SG104 P. yezoensis and heat-tolerant mutant Gy500. We selected 1,251 differentially expressed genes that were up- or downregulated in response to the heat stress condition and in the heat-tolerant mutant Gy500, based on fragment per million reads expression values. Among them, PyHRG1 was downregulated under heat stress in SG104 and expressed at a low level in Gy500. PyHRG1 encodes a secretory protein of 26.5 kDa. PyHRG1 shows no significant sequence homology with any known genes deposited in public databases to date. However, PyHRG1 homologs were found in other red algae, including other Pyropia species. When PyHRG1 was introduced into the single-cell green alga Chlamydomonas reinhardtii, transformed cells overexpressing PyHRG1 showed severely retarded growth. These results demonstrate that PyHRG1 encodes a novel red algae-specific protein and plays a role in heat tolerance in algae. The transcriptome sequences obtained in this study, which include PyHRG1, will facilitate future studies to understand the molecular mechanisms involved in heat tolerance in red algae.
Diabetes mellitus, commonly known as diabetes, comprises a group of metabolic disorders characterized by a high blood sugar level over a prolonged period of time. Diabetes is classified into type 1 diabetes and type 2 diabetes, and the incidence and prevalence of diabetes, mostly type 2, have increased remarkably in recent decades. A diagnosis of type 2 diabetes is greatly influenced by heredity, and it is important to prevent diabetes in people with a family history by improving lifestyle and environmental factors. Controlling overeating, obesity, lack of exercise, and stress is effective to prevent diabetes. The patient in this case report had impaired fasting glucose and mild hyperlipidemia. The patient experienced improvements in these sequelae after the administration of herbal medicine (Yangkyuksanwha-tang) for 12 weeks and the implementation of a plant-based diet. The complete blood count, XXXX, fasting blood sugar, HbA1c, insulin, and C-peptide levels were measured, and the Homeostatic Model Assessment for Insulin Resistance (HOMA-IR) and HOMA-β were calculated according to the FBS and fasting insulin levels. Total cholesterol, triglyceride, FBS, and HbA1c levels all decreased after 12 weeks compared with baseline measures. There was no change in the insulin secretory ability; the C-peptide level did not change as a result of β-cell function; and the HOMA-β level reflected an improved insulin secretory ability.
In Trichinella spiralis infection, type 2 helper T (Th2) cell-related and regulatory T ($T_{reg}$) cell-related immune responses are the most important immune events. In order to clarify which Toll-like receptors (TLRs) are closely associated with these responses, we analyzed the expression of mouse TLR genes in the small intestine and muscle tissue during T. spiralis infection. In addition, the expression of several chemokine- and cytokine-encoding genes, which are related to Th2 and $T_{reg}$ cell mediated immune responses, were analyzed in mouse embryonic fibroblasts (MEFs) isolated from myeloid differentiation factor 88 (MyD88)/TIR-associated proteins (TIRAP) and Toll receptor-associated activator of interferons (TRIF) adapter protein deficient and wild type (WT) mice. The results showed significantly increased TLR4 and TLR9 gene expression in the small intestine after 2 weeks of T. spiralis infection. In the muscle, TLR1, TLR2, TLR5, and TLR9 gene expression significantly increased after 4 weeks of infection. Only the expression of the TLR4 and TLR9 genes was significantly elevated in WT MEF cells after treatment with excretory-secretory (ES) proteins. Gene expression for Th2 chemokine genes were highly enhanced by ES proteins in WT MEF cells, while this elevation was slightly reduced in MyD88/$TIRAP^{-/-}$ MEF cells, and quite substantially decreased in $TRIF^{-/-}$ MEF cells. In contrast, IL-10 and $TGF-{\beta}$ expression levels were not elevated in MyD88/$TIRAP^{-/-}$ MEF cells. In conclusion, we suggest that TLR4 and TLR9 might be closely linked to Th2 cell and $T_{reg}$ cell mediated immune responses, although additional data are needed to convincingly prove this observation.
COPI vesicles are essential to the retrograde transport of proteins in the early secretory pathway. The COPI coatomer complex consists of seven subunits, termed ${\alpha}-$, ${\beta}-$, ${\beta}^{\prime}-$, ${\gamma}-$, ${\delta}-$, ${\varepsilon}-$, and ${\zeta}$-COP, in yeast and mammals. Plant genomes have homologs of these subunits, but the essentiality of their cellular functions has hampered the functional characterization of the subunit genes in plants. Here we have employed virus-induced gene silencing (VIGS) and dexamethasone (DEX)-inducible RNAi of the COPI subunit genes to study the in vivo functions of the COPI coatomer complex in plants. The ${\beta}^{\prime}-$, ${\gamma}-$, and ${\delta}$-COP subunits localized to the Golgi as GFP-fusion proteins and interacted with each other in the Golgi. Silencing of ${\beta}^{\prime}-$, ${\gamma}-$, and ${\delta}$-COP by VIGS resulted in growth arrest and acute plant death in Nicotiana benthamiana, with the affected leaf cells exhibiting morphological markers of programmed cell death. Depletion of the COPI subunits resulted in disruption of the Golgi structure and accumulation of autolysosome-like structures in earlier stages of gene silencing. In tobacco BY-2 cells, DEX-inducible RNAi of ${\beta}^{\prime}$-COP caused aberrant cell plate formation during cytokinesis. Collectively, these results suggest that COPI vesicles are essential to plant growth and survival by maintaining the Golgi apparatus and modulating cell plate formation.
Mesenchymal stem cells (MSCs) are useful candidates for tissue engineering and cell therapy. Physiological cell environment not only connects cells to each other, but also connects cells to the extracellular matrix that provide mechanical support, thus exposing the entire cell surface and activating signaling pathways. Hydrogel is a polymeric material that swells in water and maintains a distinct 3-dimensional (3D) network structure by cross linking. In this study, we investigated the optimized cellular function for canine adipose tissue-derived MSCs (cAD-MSCs) using hydrogel. We observed that the expression levels of Ki67 and proliferating cell nuclear antigen, which are involved in cell proliferation and stemness, were increased in transwell-hydrogel (3D-TN) compared to the transwell-normal (TN). Also, transforming growth factor-${\beta}1$ and SOX9, which are typical bone morphogenesis-inducing factors, were increased in 3D-TN compared to the TN. Collagen type II alpha 1, which is a chondrocyte-specific marker, was increased in 3D-TN compared to the TN. Osteocalcin, which is a osteocyte-specific marker, was increased in 3D-TN compared to the TN. Collectively, preconditioning cAD-MSCs via 3D culture systems can enhance inherent secretory properties that may improve the potency and efficacy of MSCs-based therapies for bone regeneration process.
이 연구에서는 살아있는 질편모충의 단백질녈해효소가 인체 면역글로불린을 분해하는지 알아보고 질편모충에 의한 조직세포 독성에 있어서 단백질분해효소의 역할을 시험관내에서 관찰하였다 실험에 사용한 질편모충은 질염환자로년터 분리한 KT9 분리주이었으며 세포독성을 알아보기 위한 표적세포로는 HeLa 세포를 사용하였다 질편모충 단백질분해효소가 인체 면역글로불린을 분해하는지 관찰하고자 인체의 분비 IP. 혈청 IgA 및 IgG를 살아있는 원충. 원충의 용출액 및 분비-배설 액과 DTT를 넣어 반응시켰다. 여러 계열의 단백질분해효소 저해제(aminopeptidase, serine, metallo, cystelrle계열)를 살아있는 질편모충과 미리 반응시킨 후 세척하고 면역글로불린의 분해 단백질분해효소 활성 및 조직세포독성에 미치는 영향을 관찰하였다 살아있는 질편모충은 인체의 분비 IgA. 혈청 IgA 및 IgG를 분해하였는데 질편모충 수가 증가할수록 반응시간이 길수록 분해가 더 잘 이루어졌다 질푄모충의 용출액과 분비-배설액도 분비 IgA. 혈청 IgA 및 IgG를 분해하였다. Cysteine, serine계 열의 단백질분해효소 저해제 (I-64 antipain, iodoacetic acid, iodoacetamide, TLCK)를 처리한 질편닐충은 분비 IgA의 분해를 저해하였으며. 단백질분해효소저해제로 처리한 경우 질편모충의 단백질븐해효소 활성은 감소하였고 HeLa세포에 대한 독성이 감소하였다. 이상의 성적을 종합하면 질편모충에서 분비되는 단백질분해효소는 시험관내에서 조직세포에 세포독성을 나타내며 또한 인체면역글로불린을 분해하여 숙주의 방어기전에 대한 도피물질로 작용하는 것으로 생각된다.
We demonstrated previously that a disintegrin and metalloproteinase 15 (ADAM15) is released into the extracellular space as an exosomal component, and that ADAM15-rich exosomes have tumor suppressive functions. However, the suppressive mechanism of ADAM15-rich exosomes remains unclear. In this study, we show that the ADAM15 ectodomain is cleaved from released exosomes. This shedding process of the ADAM15 ectodomain was dramatically enhanced in conditioned ovarian cancer cell medium. Proteolytic cleavage was completely blocked by phenylmethylsulfonyl fluoride, indicating that a serine protease is responsible for exosomal ADAM15 shedding. Experimental evidence indicates that the ADAM15 ectodomain itself has comparable functions with those of ADAM15-rich exosomes, which effectively inhibit vitronectininduced cancer cell migration and activation of the MEK/extracellular regulated kinase signaling pathway. We present a tumor suppressive mechanism for ADAM15 exosomes and provide insight into the functional significance of exosomes that generate tumor-inhibitory factors. [BMB Reports 2015; 48(5): 277-282]
Mouse ficolin A is a plasma protein with lectin activity, and plays a role in host defense by binding carbohydrates, especially GlcNAc, on microorganisms. The ficolin A subunit consists of an N-terminal signal peptide, a collagen-like domain, and a C-terminal fibrinogen-like domain. In this study, we show that ficolin A can be synthesized and oligomerized in a cell and secreted into culture medium. We also identify a functionally relevant signal peptide of ficolin A by using MS/MS analysis to determine the N-terminal sequence of secreted ficolin A. When the signal peptide of mouse ficolin A was fused with enhanced green fluorescent protein (EGFP), EGFP was released into HEK 293 cell medium, suggesting that the signal peptide can efficiently direct ficolin A secretion. Moreover, our results suggest that the signal peptide of ficolin A has potential application for the production of useful secretory proteins.
Kim, Jong-Hyun;Kim, Jung-Hoe;Kim, Sun-Chang;Nam, Soo-Wan
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제10권4호
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pp.551-553
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2000
A strong constitutive $P_{JH}$ promoter from Bacillus was applied to overexpress the endoxylanase gene in B. subtilis. The expression plasmid, pHJKJ4, was designed to contain the $P_{JH}$ promoter and endoxylanase promoter ($P_B$), and introduced into B. subtilis DB104. Through batch fermentation of the trasformant cell on a maltose medium, endoxylanase was produced in a growth-associated manner as the predominant protein. The total activity reached about 600 unit/ml at the end of the cultivation, which corresponded to 698 mg endoxylanase protein/l with a specific activity of 860 unit/mg protein. It was also found that the segregational plasmid instability was less than 30% and most of the endoxylanase activity was detected in the culture medium. This result suggests that the secretory production of endoxylanase can be significantly enhanced with the use of the $P_{JH}$ promoter and high-cell density culture techniques, quantitatively as well as qualitatively.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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