Mouse ficolin A is a plasma protein with lectin activity, and plays a role in host defense by binding carbohydrates, especially GlcNAc, on microorganisms. The ficolin A subunit consists of an N-terminal signal peptide, a collagen-like domain, and a C-terminal fibrinogen-like domain. In this study, we show that ficolin A can be synthesized and oligomerized in a cell and secreted into culture medium. We also identify a functionally relevant signal peptide of ficolin A by using MS/MS analysis to determine the N-terminal sequence of secreted ficolin A. When the signal peptide of mouse ficolin A was fused with enhanced green fluorescent protein (EGFP), EGFP was released into HEK 293 cell medium, suggesting that the signal peptide can efficiently direct ficolin A secretion. Moreover, our results suggest that the signal peptide of ficolin A has potential application for the production of useful secretory proteins.
Kim, Jong-Hyun;Kim, Jung-Hoe;Kim, Sun-Chang;Nam, Soo-Wan
Journal of Microbiology and Biotechnology
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v.10
no.4
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pp.551-553
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2000
A strong constitutive $P_{JH}$ promoter from Bacillus was applied to overexpress the endoxylanase gene in B. subtilis. The expression plasmid, pHJKJ4, was designed to contain the $P_{JH}$ promoter and endoxylanase promoter ($P_B$), and introduced into B. subtilis DB104. Through batch fermentation of the trasformant cell on a maltose medium, endoxylanase was produced in a growth-associated manner as the predominant protein. The total activity reached about 600 unit/ml at the end of the cultivation, which corresponded to 698 mg endoxylanase protein/l with a specific activity of 860 unit/mg protein. It was also found that the segregational plasmid instability was less than 30% and most of the endoxylanase activity was detected in the culture medium. This result suggests that the secretory production of endoxylanase can be significantly enhanced with the use of the $P_{JH}$ promoter and high-cell density culture techniques, quantitatively as well as qualitatively.
Plasmodesmata (PDs) are specialized intercellular channels that facilitate the exchange of various molecules, including sugars, ribonucleoprotein complexes, transcription factors, and mRNA. Their diameters, estimated to be 2.5 nm in the neck region, are too small to transfer viruses or viral genomes. Tobacco mosaic virus and Potexviruses are the most extensively studied viruses. In viruses, the movement protein (MP) is responsible for the PD gating that allows the intercellular movement of viral genomes. Various host factors interact with MP to regulate complicated mechanisms related to PD gating. Virus replication and assembly occur in viral replication complex (VRC) with membrane association, especially in the endoplasmic reticulum. VRC have a highly organized structure and are highly regulated by interactions among the various host factors, proteins encoded by the viral genome, and the viral genome. Virus trafficking requires host machineries, such as the cytoskeleton and the secretory systems. MP facilitates the virus replication and movement process. Despite the current level of understanding of virus movement, there are still many unknown and complex interactions between virus replication and virus movement. While numerous studies have been conducted to understand plant viruses with regards to cell-to-cell movement and replication, there are still many knowledge gaps. To study these interactions, adequate research tools must be used such as molecular, and biochemical techniques. Without such tools, virologists will not be able to gain an accurate or detailed understanding of the virus infection process.
In mammals there are two distinct cellular units of the gastric glands which are responsible for the secretion of acid and pepsin respectively, namely, the parietal cells for acid and the peptic or chief cells for pepsin. On the other hand, the bird does net have separate parietal and chief cells in the glandular stomach. There exist only a single cell type in the asian gastric secretory-glands. In spite of this single cell type, however, variation in pepsin and acid secretion can he seen. Present study was conducted to know distribution, secretion and formation of the pepsinogen granules in chicken and rat stomach which observing by light and electron microscope. 1. In chicken, the pepsinogen granules are distributed in all submucosal gland cells and yet there are no distinction of parietal and chief cells. In rat, the pepsinogen granules are distributed in chief cells which lined the lower two-thirds of the gastric tubles and the parietal cells occupy upper third of the tuble. 2. Carbachol markedly stimulates the secretion of pepsinogen granules in chiken and rat, but Histamine is slightly. 3. After Histamine and Carbachol treatment, the pepsinogen granules are formated continuously and reaccmulated as control after 3 to 4 hours.
When subjected to hyperosmotic pressure by NaCl addition, H69K-NGD transfectoma, like KR12H-2 transfectoma, displayed decreased specific growth rate (${\mu}$) and increased specific antibody productivity ($q_{Ab}$): Elevation of medium osmolality from 280 mOsm/kg to 415 mOsm/kg decreased ${\mu}$ by $79\%$ in batch cultures of H69K-NGD transfectoma, while it increased $q_{Ab}$ by $103\%$. However, unlike KR12H-2 tranfectoma, enhanced $q_{Ab}$ of H69K-NGD transfectoma at hyperosmolalities was not due to elevated levels of Ig mRNAs. In hyperosmotic cultures of H69K-NGD transfectoma, heavy-chain mRNA per cell was not enhanced with increasing osmolality. Hyperosmotic pressure was found to preferentially enhance immunoglobulin (Ig) translation rates of H69K-NGD transfectoma. However, under hyperosmotic pressure, the translation rate of Ig polypeptides was not enhanced as much as $q_{Ab}$. This result suggests that hyperosmotic pressure also influences the post-translational process. Taken together, the results obtained show that intracellular response of transfectomas to hyperosmotic pressure, in regard to the main intracellular steps of the antibody secretory pathway, is cell-line dependent.
Londonkar, Ramesh L.;Sharangouda, Sharangouda;Patil, Saraswati B.
Advances in Traditional Medicine
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v.8
no.1
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pp.67-72
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2008
Adult male albino rats were treated with 0.5 mg and 0.75 mg morphine/100 g body weight intraperitoneally for 30 days. All the animals were autopsied on $31^{st}$ day. Epididymis and vas deferens were dissected out, weighed and processed for histological and biochemical studies. Morphine has caused a reduction in the weight of epididymis and vas deferens in both the doses of drug treated groups. The total cholesterol content is increased while protein, DNA and RNA contents and epididymal sperm counts are decreased. The acid phosphatase content is decreased 10.12 $\pm$ 0.11 in caput, 9.26 $\pm$ 0.30 in cauda of epididymis and in vas deferens 8.14 $\pm$ 0.15 in 0.5 mg treated groups and in 0.75 mg treated rats shows 9.52 $\pm$ 0.27 in caput, 9.14 $\pm$ 0.18 in cauda of epididymis and in vas deferens 7.84 $\pm$ 0.11is decreased, whereas alkaline phosphatase is increased. The surface epithelial cell height of these ducts is reduced and secretory activity is inhibited with the disruption of epithelial cell projections. The gravimetric and histometric changes of epididymis and vas deferens may be due to non-availability of androgens in morphine treated rats.
The fine structure of the hemocytes in Wolf spider, Pardosa astrigera, is discribed and compared with that of similar cells in other spider species and insects. Five hemocyte types are identified in the hemolymph: prohemocyte, plasmatocyte, granulocyte, spherulocyte and adipohemocyte. Prohemocytes are small with a relatively undifferentiated cytoplasm. The nucleus is comparatively large and has a perinuclear space. Plasmatocytes and granulocytes are pinocytotic function in the hemolymph of the body. The plasmatocytes have some coated pits on the plasma membrane and well developed Golgi complex, The granulocytes appear sequence of events in the formation of coated vesicle from a coated pit on its plasma membrane. Golgi complex become well expressed and give rise to small secretory vesicles which fuse to large bodies. The spherulocytes are larger in cell size than other hemocytes. Their cytoplasm is filled with spherules. The spherules contain the floccurent materials and the helical structured materials, which are 220nm in length and 80nm in width. The adipohemocytes are oval shaped and have a number of lipid droplets.
Several types of the epithelial cells were classified by ultrastructural observation through transmission electron microscope in the rat epididymis. Ultrastructural studies showed that the principal cells, basal cells and narrow cells are located in all the regions of the epididymis and the light cells are present only in the corpus and cauda epididymis. It was observed that the columnar epithelial cells like the principal cells, light cells and narrow cells contain several secretory vesicles and there are halo cells migrating in the several regions. The basal cells showed the elliptical forms in the caput and corpus region and the global forms in the cauda region.
Endoplasmic reticulum (ER) plays formation of disulfide bonds and proper folding of secretory proteins. Cellular responses to ER stress enhances the stress-activated kinase pathway and the induces a lot of immediate-early genes. Among of them, the early growth response-1 (Egr-1), a transcription factor, which plays an important role in cell growth, development, differentiation, apoptosis and various types of injury. For that reason, we have tested the expression of Egr-1 against ER stress inducible drugs (tunicamycin, DTT, A23187 and BFA) to understand what kind of aspect occurred by ER stresses.
A fermentation study of the recombinant Escherichia coli system has been tired to overproduce a recombinant Paragonimus westermani cysteine proteinase, rPwCP1. Using the modified LB media, main cultures and chemical induction with IPTG were carried out to examine the possibility of secretory protein overproduction at high cell density culture. As a result, the target protein of rPwCP1, purified by metal affinity chromatography and gel filtration, has been shown at 50.8 kDa on SDS-PAGE, and its final concentration turns out to be 350mg/L.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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