개에서 설사를 일으키는 주요 원인이 되는 장내 병원균으로 Salmonella spp., Shigella spp., Campylobacter spp., Clostridium spp.가 있다. 이들 세균은 배양으로 검출이 어렵다. 본 실험에서는 Salmonella spp., C. coli, C. jejuni, 그리고 Cl. perfringens를 신속하고 민감하게 검출할 수 있는 방법을 고안하였다. 정상견 71마리와 설사증상이 있는 66마리에서 수집한 분변 시료에서 장내 병원균의 유병률을 알아보고자 하였다. 장내 병원균은 실시간 중합효소 연쇄 반응 분석을 이용하여 검출하였다. 설사변에서 Salmonella spp., C. coli, C. jejuni, Cl. Perfringens는 정상변보다 검출률이 높았다. 개발한 다중실시간 중합효소연쇄반응은 분변시료의 병원균 존재 및 양 또는 기타 고유 서열을 확인하는데 유용하였다.
This study was performed to determine the antibiotic susceptibility profiles of Salmonella spp., coliforms, Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus and Vibrio spp. isolated from broiler carcasses, aquacultured flounders, hamburgers, and lettuce, which are foods consumed in large quantities in Korea. Salmonella spp. and L. monocytogenes were isolated only from broiler carcasses and Salmonella spp. had a high multidrug resistance rate of 61.1%. Meanwhile, coliforms and S. aureus were isolated from all four foods tested in this experiment. The multidrug resistance rate of coliforms from broiler carcasses was 50%, and that of Vibrio spp. from flounders was 71.4%. The resistance to tetracycline, streptomycin, ampicillin or carbenicillin was common regardless of the kind of food or isolate.
RAPD 분석은 한 개의 primer를 이용하여 임의의 DNA조각을 증폭하는 것이다. 이때 만들어지는 여러 형태의 DNA band유형을 이용하여 살모넬라를 분류할 수 있다. 살모넬라를 효과적으로 RAPD typing할 수 있는 primer들을 엄선하기 위하여 살모넬라 표준군주 16종을 대상으로 총 20가지 primer들의 RAPD 분리력을 비교하여 보았다. 결과는 재현성이 높았으며 이중 primer A, OPG04, OPG10, OPL-03을 16가지 균 모두를 다른 유형으로 분리하였고 primer OPB-17, OPB-6, OPG08, OPL-02는 15가지 유형으로 분리하였다. 이들은 discrimination index, band의 숫자, band scoring의 난이도 등을 고려해 볼 때 나머지 primer 들에 비해 우수한 분리력을 보였다. 이들 primer들은 장창 살모넬라의 RAPD typing에 이용될 수 있을 것으로 보이며, 현재는 이들을 이용하여 돈육 공장의 오염원 구명을 위한 연구를 수행 중이다.
본 연구에서는 real-time PCR(SureTectTM kit와 PowerChekTM kit), LAMP(3M MDS), 선택 배지를 이용하여 즉석섭취식품에 존재하는 Salmonella spp.와 L. monocytogenes의 검출 능력을 비교 및 평가하고 식품 매트릭스가 real-time PCR의 결과에 미치는 영향을 조사하였다. 4가지 서로 다른 농도로 접종된 식품을 동일한 증균배지를 이용하여 증균 후 세 가지 방법으로 검출한 결과, real-time PCR, LAMP, 선택 배지에서 모두 양성으로 검출되어 인위적으로 접종된 식품에서의 검출 성능은 동등한 것으로 나타났다. 또한, 식품 매트릭스가 real-time PCR의 신속 검출에 미치는 영향을 조사한 결과, Salmonella spp.의 검출에서 샐러드가 다른 식품에 비해 Ct value가 유의적으로 높은 것으로 나타나, 섬유질이 풍부한 식품에 존재하는 Salmonella spp.의 검출을 위해서는 충분한 균질화와 균체의 탈리, 그리고 효율적인 DNA의 증폭이 필요함을 알 수 있었다. 반면, L. monocytogenes의 검출은 식품 매트릭스마다 상이하며 혼합적인 양상을 보였다. 현재의 식품공전 규정에서 식품에 존재하는 식중독균의 신속 검출을 위한 장비와 시약의 사용은 대부분 사용자의 선택에 의존하고 있다. 본 실험에서 real-time PCR로 사용된 SureTectTM kit와 PowerChekTM kit는 기존 real-time PCR kit의 대체재로서 사용이 가능할 것으로 판단되며, 또한, LAMP도 우수한 검출 성능을 보였기에 식품안전 관리 수단으로 활용될 가능성이 있음을 시사하고 있다.
The PBM ${BioSign}^{TM}$ Salmonella (PBMS) test kit based on an mmunochromatographic method was evaluated for the screening of Salmonella spp. in pure cultures, and 80, 15, and 10 artificially and naturally contaminated, and negative controlled food samples, respectively. The PBMS test involves presumptive qualitative procedures, detecting the presence of Salmonella spp. in foods within 26 h total testing period and allowing the user to release negative products 70 h earlier than the conventional methods. The PBMS test using Buffered Peptone Water and Rappaport-Vassiliadis broth was evaluated for 10 different food types for various Salmonella spp. It showed detection limits of 1 to 25 colony forming units (CFU)/25 g. No cross-reaction was observed, particularly to other gramnegative bacteria. These results indicate the PBMS test is a rapid and inexpensive procedure for the screening of Salmonella spp. present at low concentrations (1 to 25 CFU/25 g) in foods.
This study's objective was to determine the prevalence of Salmonella spp. in pigs and their farm environments in Korea, and to investigate the relationship between the strains based on their phenotypic and genotypic characteristics. A total of 36 Salmonella spp. were isolated in this study: 18 isolates from 492 pigs (3.7%) and 18 isolates from 418 (4.3%) farmhouse environmental samples from 16 different pig farms. Of the Salmonella strains isolated from the numerous environmental samples, the highest prevalence was observed in slurry or manure, followed by partitions, farmer's hands, floors, water/nipples, ventilation sources, and feed, respectively. All the Salmonella isolates originating from different farms were genetically distinct. In three farms, however, identical phage types and pulse-field gel electrophoresis patterns were observed among Salmonella isolates from pig feces and environmental samples. This study suggests that environments contaminated with Salmonella could pose an infection risk to pigs on pig farms.
Huynh Van Chuong;Nguyen Minh Tuan;Nguyen Thi Nhu Anh;Le Thi Lan Phuong;Nguyen Xuan Hoa
대한수의학회지
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제63권2호
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pp.16.1-16.6
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2023
Salmonella spp. are pathogens involved in most salmonellosis in rabbits. This study examined Salmonella disease in rabbits raised in Thua Thien Hue, Vietnam. Two hundred and 56 rectal swabs of rabbits were taken, and a carrier rate of 33.98% was found. In addition, all the isolated Salmonella spp. strains were 100% motile; positive for H2S, catalase, Voges Proskauer, coagulase, citrate, maltose, and dextrose; and negative for indole, methyl red, urease, oxidase, sucrose, and lactose. The Kirby-Bauer method showed that these Salmonella strains were susceptible to doxycycline (93.2%), tetracycline (84.1%), and levofloxacin (65.9%). On the other hand, they were highly resistant to streptomycin (95.5%), ampicillin (93.2%), colistin (40.9%), and gentamicin (34.1%). Furthermore, polymerase chain reaction used to screen for virulence and specific genes of Salmonella strains showed that all Salmonella strains isolated carried InvA, fimA, and Stn.
본 연구에서는 수산물 시료 중 Salmonella spp. 검출을 위해 단시간의 전배양(2시간 이내)과 탈염과정을 포함한 DNA 추출법을 사용하여 분자생물학적 검출을 위한 수산물 전처리 방법에 대해 연구하였다. 배양 시간에 따른 증균 효율을 탐색하기 위해 100, 101 및 102 CFU/mL농도의 Salmonella spp. 5종을 NB 0.5에 접종하여 증균 전, 1시간 및 2시간 동안의 증균 효율을 비교하였다. 그 결과, 2시간 동안 모든 농도에서 약 1 log CFU/mL가 증균되어 초기 농도와 유의적인 차이가 나타났다. 또한 지역별 패류시료에 S. Typhimurium을 인위적으로 감염시킨 뒤 DNA를 추출하여 염농도를 측정한 결과, 모든 시료의 염농도가 0%로 DNA 추출과 동시에 탈염이 이루어진 것을 확인하였다. 이후 추출한 DNA를 사용하여 PCR을 수행한 결과 모든 시료에서 S. Typhimurium의 특이적 양성밴드가 확인되었다. 다음으로 수산물 시료 중 Salmonella spp. 검출을 위한 증균 과정과 탈염을 포함한 DNA 추출방법의 검증을 위해 멸균 홍합시료 및 비멸균 홍합시료에 Salmonella spp. 5종을 인공적으로 약 100, 101, 102 CFU/g의 농도로 오염시켜 전배양과 DNA를 추출하여 PCR로 특이적 증폭 밴드의 여부를 확인한 결과, 모든 농도의 Salmonella spp. 5종에서 특이적 밴드가 확인되었다. 결과적으로 본 연구에서 제시한 전배양 및 DNA 추출방법을 포함한 전처리 방법과 PCR을 사용하여 수산물 시료에서 10 CFU/g 미만의 Salmonella spp.를 검출하였으며, 시간과 비용면에서 효율적이며 과정이 복잡하기 않기 때문에 수산물의 처리 현장에 활용될 수 있을 것으로 기대된다.
Kim, Hyobi;Lee, Jiyoung;Jang, Yangho;Chang, Byungjoon;Kim, Aeran;Choe, Nonghoon
대한수의학회지
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제56권2호
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pp.91-95
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2016
This study was conducted to investigate the prevalence and antimicrobial resistance of Salmonella spp. and Escherichia (E.) coli isolated from ducks in Korea. A total of 400 cecal content samples were collected from 40 duck farms in Korea. Isolated Salmonella spp. and E. coli strains were 83 and 364 of the 400 cecal samples, respectively. The most prevalent serotype among the 83 Salmonella isolates was Salmonella Typhimurium (51 isolates: 61.45%). Resistance to the tested antimicrobial agents by Salmonella isolates was low except for erythromycin, while the resistance of the E. coli isolates to the other tested antimicrobial agents was high and 90.9% (331/364) of E. coli isolates showed multi-antimicrobial resistance. Antimicrobial resistance in duck zoonotic pathogens should be of concern to the Korean duck industry, as these pathogens exhibit a high rate of antimicrobial resistance and pose a potential hazard to public health.
식품에 극소량 존재하는 Salmonella spp.를 real-time PCR로 검출 시 필요한 최소시간을 구하고자 하였다. Sal-F, Sal-R 서열이 primer로 사용되었으며 sal-P 서열이 probe로 사용되었다. BPW에서 산출된 검출한계는 $3.77{\times}10^2\;cfu/mL$로 측정되었다. BPW에 인위적으로 Salmonella spp.를 접종하였으며 성장곡선을 구하였다. 성장곡선은 y=$0.0127x^2$+0.5927x-0.4317($R^2$=0.99) 식을 나타내었다. 25 g 시료에 1 cell의 Salmonella spp.가 존재한다고 가정할 경우, 시료처리 과정에서 10배로 희석되므로 초기 균 농도는 0.004 cfu/mL 이며 이 농도에서 검출한계까지의 균수 증가가 발생해야 real-time PCR로 검출이 가능할 것으로 판단되었다. 성장곡선에서 균수 증가에 필요한 시간을 측정해 본 결과 7시간20분으로 산출되었으며 따라서 PCR 수행시간을 포함하여 10시간이면 검출이 가능함을 알 수 있었다. 식품에서의 실증실험을 위하여 시중에서 판매되고 있는 신선편이 양배추를 구하여 25 g에 1~10 cfu의 수준으로 S. Typhimurium을 인위접종한 후 real-time PCR 방법과 식품공전방법으로 검출하였을 때 두 방법 모두 동일하게 30개중 29개 시료에 대하여 음성을 나타내었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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