본 연구에서 18종의 한약재추출물을 제조하여 병원성세균에 대한 한약재의 항균활성을 측정하였다. 오배자, 오미자 및 소목 메탄올 추출물은 대부분 균주에 대해 5 mg/mL 수준에서 항균활성을 나타냈으나 15여 종의 한약재추출물들은 30 mg/mL 수준에서 항균활성을 나타냈다. 오배자의 S. epidermidis와 Bor. bronchiseptica에 대한 최소저해농도는 0.6 mg/mL로 나타났다. 우수한 항균활성이 확인된 오배자, 소목, 오미자, 황금을 대상으로 극성이 다른 5가지 용매로 순차 분획하여 항균활성을 검토한 결과 대부분의 균주에서 EtOAc층이 다른 분획층에 비해 성장억제효과가 높게 나타났다. 항균력이 우수한 한약재추출물의 미생물 증식억제 효과를 조사하기 위해 증식배지에 0, 100, 300 및 500 ppm의 메탄올 추출물을 첨가하였다. 한약재 추출물을 첨가하지 않은 대조구에서는 12시간 이후 급격한 균의 성장을 나타내고 있으나 오배자와 소목추출물의 첨가 농도가 높을수록 그람 양성균인 S. aureus, S. epidermidis 및 L. monocytogenes는 뚜렷한 억제효과를 나타냈다. 오배자추출물은 그람음성균인 Sal. Pullorum과 Sal. Choleraesuis의 성장을 저해하였고 Bor. bronchiseptica, E. coli serotype $O_8$은 오배자와 소목추출물은 낮은 농도에서 성장이 다소 저해되었음을 보여주었고, 추출물의 농도가 높을수록 균의 성장이 강하게 억제되었다.
향신료인 clove(Eugenia caryophyllata Thumb)를 액체배지에 첨가하여 2종류의 식중독세균(Listeria monocytogenes ATCC 7644, Salmonella typhimurium ATCC 13311)의 증식과 저온저장중 생존에 미치는 항균효과를 조사하였다. 저농도(0~0.5%, w/v)의 clove를 액체배지(TSB)에 첨가하여 L. monocytogenes와 Sal. typhimurium을 $10^{5}$~$10^{7}$ cell/ml 가 되게 접종한 후, 35$^{\circ}C$에서의 증식과 냉장(5$^{\circ}C$) 및 냉동(-2$0^{\circ}C$)저장중 생존억제효과를 생균수의 변화로서 조사하였다. 35$^{\circ}C$에서의 L. monocytogenes의 증식은 clove 0.1% 첨가시에 약 6시간의 유도기를 거친 후에 증식이 시작되었으나 0.3%에서는 1.4 log cycle, 0.5%에서는 3.3 log cycle 감소한 후에 거의 일정 수준을 유지하였다. 35$^{\circ}C$에서 Sal. typhimurium의 증식은 clove의 농도가 높을수록 생균수의 감소가 컸으며 긴 유도기를 거친 후에 증식하였다. 5$^{\circ}C$에서 냉장한 경우에, L. monocytogenes는 control과 0.1%의 clove농도에서는 6일간의 유도기를 거친 후에 증식하였으나 0.2%이상에서는 clove의 농도에 비례하여 생균수는 감소하였다. Sal. typhimurium을 5$^{\circ}C$에 냉장한 경우, clove의 농도에 비례하여 생존이 억제되고 0.2%이상의 농도에서는 저장중 사멸하였다. -2$0^{\circ}C$에 동결저장하였을 때, L. monocytogenes와 Sal. typhimurium은 저장초기의 3일간 4 log cycle 이상 급격히 감소하여 우수한 항균효과를 나타내었으며 첨가한 clove의 농도는 항균활성에 큰 영향을 미치지 아니하였다.다.
To elucidate the regulatory mechanism of virE operon from vir regions (virA, virB, virC, virD, virG, virE) of pTiA6 which have been known to be essential for efficient crown gall tumorigenesis in plants, the activity of the truncated virE, promoter was analyzed. pSM358cd, a recombinant plasmid in which virE :: Tn3-HoHo1 (Tn3-promoterless lacZ) was cloned into SalI site of pVK102, was digested with SalI, and virE :: Tn3-HoHo1 was seperated from pVK102. To construct the truncted virE recombinant plasmids (pJS031, pJS051, pJS102, pJS201, pJS301), 5'-end of vireE promoter was deleted with BAL31 and cloned into pVK102 and then transferred into a. tumefaciens A348(pTiA6). According to the activity of the truncated virE promoter in recombinant plasmids, they were classified into two groups, pJS031, pJS051, pJS101 and pJS201 belong to a functional group and pJS301 is a non-functional. The size of deleted nucleotides of pJS201 and pJS301 seemed to be about 130 nucleotides and about 250 nucleotides from 5'-end of virE promoter, respectively. Hence it was thought that the essential site of the virE promoter was located between about 130th nucleotide and 250th nucleotide from 5'-end of the virE promoter.
The objective of the present study was to investigate cloning, expression, and functions of the recombinant protein, Siva1. Siva1 gene was synthesized by RT-PCR from HCT116 cells. Plasmids were cleaved with the restriction endonuclease, BamH1/Sal1 and products were connected to pQE30, which underwent cleavage by BamH1/Sal1. The recombinant plasmid, pQE30-Siva1, was identified after digestion with restriction endonucleases followed by transformation into E. coli M15. Expression of Siva1 was induced by IPTG and identified by SDS-PAGE following purification with affinity chromatography. The results showed that size of Siva1 was 12 kDa, consistent with the molecular weight of the His-Siva1 fusion protein. Functional test demonstrated that Siva1 significantly inhibited the invasion and migration of HCT116 cells. It may thus find clinical application for control of cancers.
Lim, Jong Chul;Chae, Jong Chan;Kim Youngsoo;Kim, Hyong Bai;Kim Chi Kyung
Journal of Microbiology
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제34권4호
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pp.349-354
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1996
Pseudomonas sp. P20 is a natural isolate which is capable of degrading biphenyl and 4-chlorobiphenyl. From a clone of pCK1022 harboring pcbCD genes of Pseudomonas sp P20, a pcbD gene encoding 2-hydroxy-6-oxo-6-phenylhexa-2, 4-dienoic acid (HOPDA) hydrolase was subcloned in Escherichia coli XL-1-Blue by using pBluescript SK(+) vector. The 2.8-kb HindII fragment harboring the pcbD gene cloned in pCK 1024 had a single site for each of XhoI, SalI, BstXI, and XbaI restriction enzymes. Escherichia coli CK1024 had a single site for each of XhoI, SalI, BstXI, and XbaI restriction enzymes. Escherichia coli CK1024 carrying pCK0124 degraded HOPDA to benzoate and 2-hydroxypenta-2, 4-dienoate by HOPDA hydrolase encoded by pcbD gene as effectively as E coli CK 1022 HARBORING pcbCD genes.
A restriction endonuclease, PsyI, has been isolated from Pseudomonas syringae pv. pha- seolicola, and its catalytic properties have been studied. This enzyme was purified through strepto- mycin sulfate and ammonium sulfate fractionation, phosphocellulose Pll, DEAE-cellulose, hydroxy- apatite and Sephadex G-100 column chromatography. It's molecular weight was about 50,000 dalton as determined by 7.5% polyacrylamide gel electrophoresis containing 0.1% SDS. In catalytic proper- ties, PsyI shows stable at wide ranges of pH between 7.0 and 10.0, of temperature between 30$\circ$C and 37$\circ$C, and its thermal stability is between 25$\circ$C, and 45$\circ$C, at the presence Of 10 mM MgCl$_{2}$-PsyI essentially require Na salt for enzyme reaction, is rather inhibited in the high Na salt concent- ration. The presence of 2-mercaptoethanol is absolutely required for the enzyme activity. This endonuclease, PsyI was determined to be an isoschizomer of SalI from the results of the restriction mapping and DNA sequencing.
Free anino acid contents in alcohol extract of eight plants of Caryophyllaceae and their microbial activities were investigated. 1) Amino acid contents in both of the Pseudostellaria palibiniana and Stellaria media was the highest among them and the contents was less in the order of Cerastium caspitosum and Stellaria aquatica. 2) Of all free amino acids contained in eight plants, valine was the richest, and then glutamic acid, leucine in that order. On the other hand, no methionine was observed and cystine, lysine and histidine were found in small amounts. 3) Of eight plants exhibited good antibacterial action against Sarcina lutea, B. subtilis and Sal. typhi. 4) S.aquatica and Pseudostellaria palibiniana showed antibiotic actions against all bacteria except for fungus, Candida albicans. 5) C. caspitosum and C. brachypetalum showed inhibition zone against B. subtilis and Sal. typhi only. 6) Antibacterial activity against gram(+) bacteria was more potent than gram(-).
The cellabiase (${\beta}$-glucosidase) gene in a Cellulomonas sp. CS1-1 was cloned into E. coli HB101 using the vector plasmid pBR322, and the expression of the gene in E. coli studied. The chromosomal DNA of the cellulomonas was digested by seveal restriction enzymes, each of which has only one cleaving site in plasmid pBR322. The recombinant plasmid, pSB2, created with Sal I frament, was expressed for the cellobiase gene in E. coli. The recombiant plasmid was estimated to contain 6.4 Kb foreign DNA at the Sal I site of plasmid pBR322 and the inserted DNA was mapped by single and double digestion with several enzymes. E. coli HB101(pSB2) has slowly grown in a mineral liquid medium containing cellobiose as a sole carbon source. The cellobiase activity in the transformed E. coli was 132 units per liter, which is equivalent to one twenty fifth of that in doner strain Cellulomonas sp. CS1-1. The transforned cell with plasmid containing cellulase gene grow well in the LB mediuns. The synthesis of cellobiase in the strain, E. coli HB101 (pSB2), was inhibited by glucose and at high concentration of cellobiose, and induced by cellobiose at low concentration.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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