• 대한의생명과학회지
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• 제6권4호
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• pp.237-244
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• 2000

정자의 원형질막은 삼투압에 의해서 영향을 받는다고 보고되고 있다. 이중 세포막내 분자구조의 변화 특히 막지질 구조의 변화와 동반되는 이온채널의 변화 그리고 $Ca^{2+}$과 HCO$^{-}_{3}$의 유동성과도 밀접한 관련이 있는 것으로 보고되고 있다. 지금까지의 연구보고에 의하면, 정자의 첨체반웅 (acrosome reaction)이 일어날 경우 protein tyrosine phosphorylation이 증가되는데 이것은 cAMP, protein kinase A 둥을 통하여 작용되는 것으로 보고되고 있다. 막의 지질변화를 유도하는 물질로 일종의 sterol acceptor인 BSA가 알려져 있는 바, 실제로 BSA가 막지질 성분에 미치는 영향을 관찰한 결과 cholesterol이 유출되고 이온 둥의 유동성 변화가 일어나, 이 유동성 변화가 정자의 adenylyl cyclase를 활성화시켜 cAMP를 증가시키고, PKA가 활성화되어 결과적으로 protein tyrosine phosphorylation이 유도된다고 보는 것이다. 첨체반응과 protein tyrosine phosphorylation과는 밀접한 관계가 있는 것으로 사료되고 있다. 본 연구는 정자 원형질막에서 cholesterol이 유출되어 protein tyrosine phosphorylation이 유도될 때, BSA와 같은 sterol acceptor가 작용할 것이라는 전제하에, 고삼투압 하에서 탈수로 인해 원형질막이 위축되더라도 sterol acceptor가 존재한다면 막지질 성분의 구조적 변화가 억제될 수 있을 것이라는 가설을 설정하였다. 실험결과, 저온 및 고삼투압 하에서 정자운동은 감소되지만 원형질막의 구조적 변화는 없고, 삼투압에 대한 반응정도는 원형질막을 통한 수분이동과 세포공적 변화에 따라 비례적으로 일어난다고 하는 사실을 발견하였다. 이 결과는 정자보존에 있어서 저온변화에 영향을 미치는 여러 인자들 특히 protein tyrosine phosphorylation의 증가와 밀접한 관계가 있음을 시시해 준다. 또한 sterol acceptor로 알려진 BSA는 삼투압이 변화되더라도 역시 중요한 인자로 작용할 수 있음을 알 수 있었으며, 특히 고삼투압으로의 변화는 cAMP와 protein kinase A를 거치는 신호전달과정에 있어서 중요한 요인이라는 사실을 확인할 수 있었다.

• 한국산학기술학회논문지
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• 제21권4호
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• pp.490-496
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• 2020

가축유전자원으로서 동결정액을 생산하는 가장 쉬운 방법은 스티로폼박스를 이용한 간이동결법으로 알려져 있다. 본 연구에서는 스티로폼 동결박스를 제작하여 가축의 동결정액 생산에 활용하는 방법을 검토하였으며 칡소 동결정액 생산을 최적화 할 수 있는 방법을 제시하고자 박스의 크기, 액체질소와 노출된 정액 스트로와 거리, 노출시간 및 생산량을 검토하였다. 2가지 동결박스를 비교하여 자료를 확보하였으며 내부 크기는 세로×가로×높이가 23.5×30.5×22.5 cm와 25.5×46.5×26.5 cm로 측정되었다. 액체질소를 5cm 높이로 채우고 액체질소 위 2, 5 및 8cm 높이에서 동결하여 융해 후 생존성을 조사하였다. 칡소 정액을 동결할 경우, 액체질소와의 노출시간은 모두 10분이 적절하였으며 25.5×46.5×26.5 cm 크기의 상자가 높은 생존율을 보여주었다(60.4±5.3% 대 67.2±3.1%). 동결 상자의 최적화 공간은 정자 동결에 가장 중요한 요소로 판단되며 1회 동결 시 최대 생산 가능한 칡소 동결정액은 60개 이상으로 증가시킬 수 있었다. 이러한 정보를 활용하면, 축종에 따라 동결 정액 생산량 결정하고 목적에 맞는 용기를 활용하여 효율적인 동결정액 생산이 가능할 것으로 판단된다.

• 한국가축번식학회지
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• 제14권3호
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• pp.183-190
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• 1990

These studies were carried out ot investigate the effects of estrous cow serum(ECS), fetal calf serum(FCS), bovine follicular fluid(BFF) and matured cumulus cell(MCC) on in vitro maturation and fertilization of bovine follicular oocytes. The ovaries were obtained from slaughtered Korean native cows. The follicular oocytes surrounded with cumulus cells were recovered by aspirating follicular fluid from the visible follicles of diameter 3-5mm. The follicular oocytes were cultured in TCM-199 medium containing hormones, FCS, ECS, BFF and MCC for 24~48 hrs. in a incubator with 5% CO2 in air at 38.5$^{\circ}C$ and then matured oocytes were again cultured for 18$^{\circ}C$20 hrs. with motile capacitated sperm in the TCF(Tyrode calcium-free) solution containing 200$\mu\textrm{g}$/ml of heparin. The results obtained in these experiments were summarized as follows : 1. The oocytes classified as "A, B, C, D and Degenerative" depending morphological integrity and those were 61.4%, 12.1%, 19.2%, 4.2% and 3.0% of the total oocytes harvested, respectively. The maturation and fertilization rate of the A, B, C class follicular oocytes, cultured in the TCM-199 medium supplemented with 10% FCS were 89.1%, 78.0%, 52.6% and 78.1%, 33.3%, respectively. 2. The maturation and fertilization rate of the follicular oocytes cultured in TCM-199 medium supplemented with 5%~20% ECS and FCS were 74.0%~80.6, 26.2%~30.0% and 71.7%~76.9%, 51.9%~58.0%, and those values were higher the supplement of ECS than FCS. 3. The maturation rate(68.0%~64.6%) and fertilization rate(59.6%~60.4%) of follicular oocytes cultured in TCM-199 medium supplemented with 10% FCS and 20~30% BFF were higher than those of follicular oocytes cultured TCM-199 medium supplemented with 10% FCS and 10% and 50% BFF. 4. The maturation rate(76.5%) and fertilization rate(61.7%) of follicular oocytes cultured in TCM-199 medium supplemented with 10% FCS and 1$\times$106/ml cumulus cells were higher than those of follicular oocytes cultured in TCM-199 medium supplemented with 10% FCS and 1$\times$104~5/ml and 1$\times$108/ml cumulus cells.lus cells.

• Reproductive and Developmental Biology
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• 제35권2호
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• pp.137-141
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• 2011

These study was to investigate the in vitro fertilization and viability of fresh and vitrified oocytes. Also, the developmental capacity of IVF and intracytoplasmic sperm injection (ICSI) oocytes were investigated. Then vitrification was performed with the use of 20% ethylene glycol + 20% DMSO + 0.5 M sucrose + 10% FCS + TCM-199 medium. Vitrification immature oocytes are cultured in vitrification solution for 10 min afterwards transferred to expose at room temperature for 5 min. and transferred to the ice water for 5 min. The oocytes were sealed in a 1.0 mm straw and placed in a $LN_2$ container. Frozen oocytes were rapidly thawed in a water bath at $30{\sim}35^{\circ}C$, and then placed in TCM-199 medium containing 0.5 M sucrose for 5 min each, respectively, at $38^{\circ}C$. After being washed for 2~3 times, using fresh medium the oocytes were cultured in TCM-l99 medium supplemented with 5% FCS at $38^{\circ}C$ in 5% $CO_2$ and air. The normal morphology of fresh and vitrified-thawed oocytes were $87.1{\pm}2.1%$ and $54.8{\pm}2.5%$, respectively. The viability rates of fresh and vitrified-thawed oocytes were $70.0{\pm}2.2%$ and $41.9{\pm}2.6%$, respectively. Viability rates of vitrified-thawed oocytes were lower than that of fresh follicular oocytes (p<0.05). The in vitro maturation rates of fresh and vitrified oocytes were $45.1{\pm}3.6%$ and $28.9{\pm}4.4%$, respectively. The IVF rates of fresh follicular and vitrified-thawed oocytes were 34.00.2% and $20.2{\pm}2.6%$, respectively. The in vitro maturation and fertilization rates of vitrified-thawed oocytes were lower than those of the fresh follicular oocytes (p<0.05). A total of 350 oocytes were fixed and stained after co-incubation with spermatozoa, of which 88 had identifiable nuclear material. After IVF for 20 hrs, $25.1{\pm}3.4%$ of the oocytes found to have been penetrated by spermatozoas. Oocytes were fixed and stained after ICSI, and 105 oocytes contained identifiable nuclear material. After IVF and ICSI for 20 hrs, $34.3{\pm}3.4%$ and $59.0{\pm}2.0%$ of the oocytes were found to have been penetrated by spermatozoas. The developmental rates upon ICSI were significantly higher than those of the IVF method (p<0.05).

• Applied Microscopy
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• 제33권1호
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• pp.25-39
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• 2003

큰발웃수염박쥐 (Myotis macrodactylus)의 세정관 정상피의 분화과정과 미세구조적 특징들은 알아보기 위하여 광학 및 전자현미경을 이용하여 조사하였다. 정자형성 과정은 4월부터 9월까지로 나타났다. 정자형성세포의 미세 구조적 특징에 있어서, A형 (Ad, Ap)의 정원세포는 기저막 위에 위치하며, Sertoli cell에 의해 둘러싸여져 있고, 대부분의 세포는 타원형이다. Ad형은 Ap형 보다 핵과 세포질의 전자밀도가 높은 것이 특징적인 반면에, B형의 정원세포는 구형의 세포로서 A형 정원세포 보다 세포가 크며, Ap형과 마찬가지로 세포질이 밝고, 거의 핵소체가 핵막에 인접되어 있다. 정모세포는 크고 구형이지만, 제 1 정모세포가 제 2 정모세포보다 다소 크다. 정자변태는 골지, 두모, 첨체, 성숙 및 이탈기로 구분하였고, 세포구조물의 특징들에 의해 각각 전 후기로 다시 세분하여 전과정을 9 (기)로 나누었다. 핵질의 변화는 골지후기부터 서서히 응축하기 시작하여, 이탈기에서 완전한 핵을 형성하였다. 정자꼬리의 형성시기는 골지전기에서 형성하기 시작하여 이탈기에서 완성되었다. 동면직전 10월부터 동면기 (11월, 12월, 이듬해 1, 2, 3월)까지는 정자형성 세포의 퇴화과정이 일어났다. 즉 미분화 정자형성 세포들은 세르톨리 세포의 식작용에 의해 포식되어졌는데 이는 동면을 위한 에너지 효율적 이용과 번식조절을 위한 적응 메카니즘이라 여겨진다.

• 대한수의학회지
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• 제30권4호
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• pp.361-371
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• 1990

The present observations were focussed mainly on the morphological findings of the utero-vaginal(U-V) glands in normal laying domestic hens and the storage of cock spermatozoa in the U-V glands at various times after artificial insemination(AI). These domestic hens were assigned to three group of PMS-treated, GnRH-treated before last AI, and control group. The hens were sacrified at intervals of 1,3,7,12 and 19 days after AI. Histological sections of U-V junctions were prepared and the morphological structures of the U-V glands were observed and then were scored about the spermatozoa presence in the U-V gland. 1. The U-V glandular tubules were mostly unbranched with single columnar epithelium. Also these tubules were occassionally observed as one circular-rotated tubules or 2 to 3 branched convoluted tubules in special shapes. The numbers of the convoluted curves per tubule were $4.3{\pm}3.3$ and the ranges of convoluted curve number were straight to 16 curves. 2. The inside and outside diameters of the glandular tubules were $6.5{\pm}3.5{\mu}m$, and $35.2{\pm}4.7{\mu}m$, respectively, and the tubular lengths of the U-V glands were $219.3{\pm}115.7{\mu}m$. 3. Storaged spermatozoa in the U-V glands of all three group hens were intensively stained by hematoxylin, and packed in tight, longitudinally parallel bundles within the tubules. In addition, numbers of completely spermatozoa-filled glands were tend to increase or decrease in proportion to the numbers of partially spermatozoa-filled glands. Also U-V glands containing spermatozoa tend to be present collectively in the any zone of U-V junction. 4. In the control group, the numbers of glands containing spermatozoa in the hens at 1,3,7,12, and 19 days after AI were found to be 22.9, 33.3, 35.8, 8.6, and 0% respectively. 5. In the PMS-treated group, the numbers of glands containing spermatozoa in the hens at 1,3,7,12, and 19 days after AI were found to be 33.6, 29.7, 26.8, 8.2 and 0% respectively. 6. In the GnRH-treated group, the numbers of glands containing spermatozoa in the hens at 1,3,7,12, and 19 days after AI were found to be 19.7, 40.8, 20.4, and 0% respectively.

• 한국수정란이식학회지
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• 제16권2호
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• pp.99-106
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• 2001

본 연구에서 도축된 한우 난소를 aspiration법과 면도날 장착으로 제작된 기구를 이용해서 slicing 법으로 난포란을 회수하여 그에 따른 난포란의 회수율과, 난포란을 체외에서 22시간 성숙시킨 후 난포란의 핵 성숙을 및 체외수정 후 수정율과 발달율을 요약하면 다음과 같다. 1. 난포란의 회수율에 있어서 각 난소당 회수는 aspiration법이 6.7개. slicing법이 15.1개의 결과를 나타내어 난소에 대한 난포란의 회수율은 slicing법이 유의적 (P<0.05)으로 높은 결과를 나타내었다. 2 Aspiration법과 slicing법으로 채란된 난자를 체외에서 22시간 성숙시킨 후, 제 2감수분열 중기까지의 핵 성숙율은 각각 83%와 62%로 유의적인(P<0.05) 차이를 보였으나, 난소 한 개당 제 2감수분열 중기까지 성숙된 난포란수는 aspiration과 slicing법이 각자 5.6개와 9.4개로 slicing법에 의해서 유의적 (P<0.05)으로 많았다. 3. Aspiration법과 slicing법으로 채란된 난포란의 발달을 조사결과를 살펴보면 분할율과 배반포기까지의 발달율에서 aspiration법이 유의적 (P<0.07)으로 높게 나타났으나, 이와 상반되게 난소 한 개당 생산된 배반포기 수정란의 수는 slicing법에 있어서 2.8개로 aspiration법의 2.1개보다 유의적인 (P<0.05) 증가를 보였다. 이상의 결과에 따라 많은 난자를 이용하기 위한 목적과 혹은 이식 가능한 다수의 수정란 생산을 위해서는 본 연구에서 고안 제작된 기구를 이용하여 slicing법으로 난포란을 채란하는 것이 효과적인 방법이 될 것으로 사료된다.

• 대한수의학회지
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• 제15권2호
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• pp.207-213
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• 1975

Skimmed goat milk heated at $92^{\circ}C$ for 10 minutes was used as a basal extender for bull semen. The extenders for liquid semen were prepared by adding simultaneously at various ratio of 5% dextrose solution and egg yolk to skimmed goat milk. After bull seven was diluted with the extenders at the rate of 20 million spermatozoa per ml of the extenders. The extenders were stored at $5^{\circ}C$ and the survival rates of spermatozoa were examined at 4 and 24 hours, and 3, 5 and 7 days after dilution. The extenders for frozen semen were prepared by adding various ratlo of glycerol to skimmed goat milk containing 20 parts of 5% dextrose solution and 3 parts of egg folk to 77 parts of skimmed goat milk. After bull semen was diluted with the extenders at the rate of 40 million spermatozoa per ml of the extenders, the extenders were frozen in liquid nitrogen tank. The frozen extenders were thawed at $40^{\circ}C$ for 2 minutes, and the revival rates of the spermatozoa in the extenders were examined. These thawed extenders were stored at $5^{\circ}C$ and the survival rates of the spermatozoa were examined at 10 minutes and 24 hours and 3 and 5 days after thawing. The results obtained were as follows: 1. Among the extenders stored at $5^{\circ}C$, the survival rate of the sperm was the highest in the extender including 20 parts of 5% dextrose solution and 3 parts of egg yolk to 77 parts of skimmed goat milk, and the survival rate was significantly higher that of the spermatozoa in egg folk-2.9% sodium citrate (1 : 4) extender. (P<0.05) 2.Among the extenders frozen in liquid nitrogen tank, the revival rate of the spermatozoa was the highest in the extender containing 7ml of glycerol per 100ml of the extender with consisted of 77 parts of skimmed goat milk, 20hparts of 5% dextrose solution and 3 parts of egg yolk, and the revival rate was significantly higher than that of the spermatozoa in egg yolk-2.9% sodium citrate (1 : 4) extender containing 8ml of glycerol per 100ml of the extender (p<0.01). 3. Among the extenders stored at $5^{\circ}C$ after thawing, the survival rate of the spermatozoa was the highest in the extender containing 7ml of glycerol per 100ml of extender which consisted of 77 parts of skimmed goat milk, 20 parts of 5% dextrose solution and 3 parts of egg yolk, and the survival rate was significantly higher than that of the spermatozoa in egg yolk -2.9% sodium citrate (1 : 4) extender containing 8ml of glycerol per 100ml of the extender (p<0.01).

• 대한수의학회지
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• 제34권1호
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• pp.165-172
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• 1994

DA-125는 새로운 안트라사이클린계 항암성 항생제로서 아드리아마이신의 유도체이다. Sprague-Dawley 랫트를 이용하여 DA-125의 배아 및 태자독성발현능력을 조사하였다. 교미확인(정충확인일=0일)된 120마리의 랫트를 4개군으로 나눈후 0, 0.1, 0.3 및 1.0mg/kg의 용량으로 임신 7일 부터 임신 17일까지 1일 1회 연속 정맥투여 하였으며 임신 20일째에 제왕절개를 하여 태자를 적출하였다. 1mg/kg 투여군에서는 모동물의 사료섭취량의 감소, 체중감소 및 비장중량의 감소와 배아 흡수율의 증가 및 태자체중의 감소가 관찰되었다. 또한 여러가지 종류의 외표, 내부장기 및 골격기형들이 각각 11.9, 41.8 및 14.5%의 빈도로 출현했다. 그중 특이 기형소견으로는 뇌탈출증, 복벽파열, 외측 및 제3뇌실의 확장, 늑골유착 등을 들 수 있다. 0.1 및 0.3mg/kg 투여군에서는 어떠한 배아 및 태자 독성증상도 나타나지 않았다. 이상의 결과에서 DA-125는 랫트에 있어서 경미한 모독성 용량에서 배아 및 태자독성효과를 나타냄을 알 수 있었다.

• Applied Microscopy
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• 제39권1호
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• pp.9-15
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• 2009

경골어류 시클리드과에 속하는 Cichlasoma managuense의 수정란 난막구조를 광학현미경과 전자현미경을 이용하여 관찰하였다. 수정란은 약황색의 불투명한 부착성 및 침란성란으로 장타원형이었으며 크기는 장축 $1.43{\pm}0.04\;mm$, 단축 $1.85{\pm}0.03\;mm$였다. 수정란의 동물극쪽에서 수정을 위한 정자의 통로로 생각되는 난문이 위치하고 있었고 위란강은 잘 발달되어 있지 않았다. 수정란 난막의 표면에는 부착성 망상구조물들이 덮고 있었고 난문의 형태는 깔때기 형태였다. 수정란 난막의 단면을 관찰한 결과 2층으로 구성되어 있었으며 외층은 부착성 층, 내층은 전자밀도가 서로 다른 $13{\sim}15$층의 층상구조를 하고 있었다. 수정란의 외형은 전형적인 시클리드과에 속하는 다른 어류와 동일한 형태를 하고 있어 과의 특성을 보이며 이들 수정란 난막에서 표면과 단면의 미세구조는 Cichlasoma managuense만이 가지고 있는 종특이성이 될 수 있기 때문에 경골어류의 종을 분류하는데 형태학적 형질로 사용될 수 있을 것으로 사료된다.