Hang Dao Thi;Choo, Ho-Yul;Lee, Dong-Woon;Lee, Sang-Myeong;Kaya Harry K.;Park, Chung-Gyoo
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제17권3호
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pp.420-427
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2007
We investigated the temperature effects on the virulence, development, reproduction, and otility of two Korean isolates of entomopathogenic nematodes, Steinernema glaseri Dongrae strain and S. longicaudum Nonsan strain. In addition, we studied the growth and virulence of their respective symbiotic bacterium, Xenorhabdus poinarii for S. glaseri and Xenorhabdus sp. for S. longicaudum, in an insect host at different temperatures. Insects infected with the nematode-bacterium complex or the symbiotic bacterium was placed at $13^{\circ}C,\;18^{\circ}C,\;24^{\circ}C,\;30^{\circ}C,\;or\;35^{\circ}C$ in the dark and the various parameters were monitored. Both nematode species caused mortality at all temperatures tested, with higher mortalities occurring at temperatures between $24^{\circ}C\;and\;30^{\circ}C$. However, S. longicaudum was better adapted to cold temperatures and caused higher mortality at $18^{\circ}C$ than S. glaseri. Both nematode species developed to adult at all temperatures, but no progeny production occurred at $13^{\circ}C\;or\;35^{\circ}C$. For S. glaseri, nematode progeny production was best at inocula levels above 20 infective juveniles/host at $24^{\circ}C\;and\;30^{\circ}C$, but for S. longicaudum, progeny production was generally better at $24^{\circ}C$. Steinernema glaseri showed the greatest motility at $30^{\circ}C$, whereas S. longicaudum showed good motility at $24^{\circ}C\;and\;30^{\circ}C$. Both bacterial species grew at all tested temperatures, but Xenorhabdus sp. was more virulent at low temperatures $(13^{\circ}C\;and\;18^{\circ}C)$ than X. poinarii.
최근 곤충병원성 선충은 생물학적 살충제로서 크게 주목을 받고 있다. 이러한 곤충병원성 선충의 in vitro배양, 저장, 수송 과정에서는 낮은 용해도와 물질전달 문제 때문에 적절한 산소 공급이 매우 중요하다. 4종의 서로 다른 Steinernema 곤충병원선충에 대하여 5L 생물반응기를 이용하여 온도를 변화시키면서 산소요구도(OUR)들을 측정하였다. 13~17$^{\circ}C$범위에서는 모든 Steinernema종의 산소 요구도는 0.5$\times$${10}^{-3}$ mmolO$_2$/L.min 이하였다. S. glaseri Dongrae와 S. carpocapsae Pocheon의 경우 산소요구도(mmolO$_2$/L.min)는 21$^{\circ}C$에서는 각각 0.4$\times$${10}^{-2}$와 0.75$\times$${10}^{-2}$, $25^{\circ}C$에서는 $1.5\times$${10}^{-2}$와 3.2$\times$${10}^{-2}$, 29$^{\circ}C$에서는 2.8$\times$${10}^{-2}$와 5.8$\times$${10}^{-2}$였다. 그러나 50~150rpm의 교반속도에서는 산소 요구도의 변화가 그다지 크지 않았다. S. glaseri NC, S. glaseri Dongrae, S. glaseri Mungyeong 그리고 S. carpocapsae Pocheon종의 비산소 요구도(${qo}_{2}$)는 $25^{\circ}C$에서 각각 0.3$\times$${10}^{-8}$, 0.5$\times$${10}^{-9}$, 0.3$\times$${10}^{-9}$, 그리고 0.2$\times$${10}^{-9}$mmolO$_2$/cell.min였다. 곤충병원성 선충의 크기와 온도가 증가됨에 따라 ${qo}_{2}$ 또한 증가하였다.
복숭아심식나방, 사고애모무늬잎말이나방 그리고 왕풍뎅이 는 전국에 퍼져있는 주요 사과원 해충들이다. 본 연구에서는 국내에서 분리된 고충병원성 성충인 Steinernema carpocapsae 와 Steunernema glaseri종을 이용하여 이들 사과원 병해충에 대한 방제효과를 조사하였다. 복숭아심식나방의 경우 S.carpocapsae를 유충 한 마리당 80마리의 농도로 처리했을 때 24시간 후에 100%의 치사율을 보였으나 S. glaseri의 경우 유충 한 마리당 50마리의 농도로 처리했을 때 48시간 후에도 $83.3\pm5.8$%의 치사율을 보였다. 사과애모무늬잎말이나방의 경우 50마리/mL 선충농도로 처리하였을 때 48시간 후에 S.carpocapsae와 S.glaseri의 처리구는 각각 100%와 43.3$\pm$5.8%의 치사율을 보였다. 그러나 왕풍뎅이 5~6령충의 경우 유츙 한 마리당 200~800마리까지 S.carpocapsae와 S.glaseri를 처리하였으나 병원성이 없는 것으로 나타났다. 선충의 토양 침투력은 유충 한 마리당 선충 접종농도가 증가할수록, 그리고 온도가 높을수록 증가되어 $25^{\circ}C$, 50마리/mL 처리구에서 S.carpocapsae가 10cm 깊이까지는 100%의 치사율을, 16~15cm깊이에서는 56.7$\pm$5.8%의 치사율을 보였다.
Asymbiotic bacterium with highly effective toxins was isolated from entomopathogenic nematode Steinernema glaseri which has been widely used against various soil-inhabiting pests. The symbiont of S. glaseri was identified as Xenorhabdus nematophilus sp. by using several biochemical and physiological tests. When this strain was released into the hemolymph of insect larva, it produced highly toxic substances and killed the larva within 2 days. Two colony forms that differed n some biochemical characteristics were observed when cultures in vitro. Phase l colonies were mucid and difficult to be dispersed in liquid. Phase II was not mucoid and was easily dispersed in liquid. It did not adsorb neutral red or bromothymol blue. Rod-shaped cell size was highly variable between two phases, ranging 2-10 ${\mu}{\textrm}{m}$. It was also found that only infective-stage nematodes can carry only primary-phase Xenorhabdus in their intestine.
Steinernematid와 heterorhabditid 선충은 쥐며느리에 침입하여 치사시킬수는 있었지만 효과는 없었다. Steinernema carpocapsae 포천 strain과 S. glaseri 동래 strain이 S. carpocapse All strain과 Heterorohabditis bacteriophora보다 효과가 있었으며, 병원성 발현에서 선충의 접종농도가 기주의 밀도보다 중요한 요인이었다.
곤충병원성 선충의 이용 효율을 높이기 위하여 곤충병원성 선충 상호간 또는 선충과 곤충병원성 곰팡이와의 상호관계를 알아보았다. Steinernema glaseri는 기주의 무게에 따라 성충수에서는 차이가 없었으나 침입태 유충수에서는 차이가 있었다. 선충의 접종 농도에 따른 침입 발육된 성충수는 기주당 20마리 이하의 접종에서는 차이를 보였으나 40마리 이상 1,000마리 접종구에서는 차이가 없었고, 증식된 유충수도 기주당 1,000마리 접종구에서 현저히 적은 것을 제외하고는 차이가 없었다. 동일 기주에서의 선충 상호간 관계에서는 steinernematid 선충에 의한 기주 치사율이 heterorhabditid 선충에 의한 것보다 높았다. 즉, 서로 다른 종의 곤충병원성 선충을 동일 기주에 접종하였을 때, S. carpocapsae 포천에 의한 기주 치사율은 $76.2\pm$4.8%였고 Heterorhabditis bacteriophora 함양에 의한 치사율은 $23.8\pm$4.8%였다. 또한 S. carpocapsae 포천에 의한 기주치사율이 각각 $90.5\pm$4.8%와 $80.9\pm$4.8%, H. bacteriophora NC 1에 의한 것은 9.5$\pm$4.8%였다. S. glaseri NC와 H. bacteriophora 함양 및 H. bacteriophora NC 1을 동시 접종하였을 때는 S. glaseri NC에 의한 것이 각각 $61.9\pm$9.65%와 $80.9\pm$4.8%, H. bacteriophora 함양에 의한 것이 $38.1\pm$9.5%, H. bacteriophora NC 1에 의한 것이 $19.1\pm$4.8%였다. 그러나 두 선충의 동시 감염은 관찰되지 않았다. 그리고 S. carpocapsae All과 곤충병원성 곰팡이인 Beauveria brongniartii를 동시 또는 곰팡이를 먼저 처리했을 때는 곰팡이 12시간 전 처리부터 선충과 곰팡이의 동시 감염이 관찰되었고, H. bacteriophora NC 1는 곰팡이 6시간 전 처리부터 동시 감염이 관찰되었다. 선충에 의한 감염과, 곰팡이에 의한 감염, 선충과 곰팡이 동시 감염은 곰팡이 48시간 전 처리부터 관찰되었다. 그러나 유충 증식수는 선충 단독 감염보다 동시 감염충에서 현저히 떨어졌다.
Kim, Chang-Hoon;Nam, Uk-Ho;Synn, Dong-Su;Park, Jae-Sung
한국생물공학회:학술대회논문집
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한국생물공학회 2003년도 생물공학의 동향(XIII)
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pp.730-735
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2003
본 실험에서는 분리된 곤충병원성 선충 6종의 온도에 따른 trehalose의 농도와 병원성의 상관관계를 조사하였으며 온도 적응, oil, glycerol을 이용하여 trehaolse 생성량 조절에 대하여 조사하였다. 저온에서는 S. longicaudum G1 종이 $81.92{\mu}g/mg$로 가장 높게 나타났으며, 고온에서는 S. glaseri Agr B3 $71.22{\mu}g/mg$로 가장 높게 나타났다. 또한 S. longicaudum G1을 저온에서 적응 시켰을 경우 병원성과 trehaolserk 향상되었으며 S. glaseri Agr B3 종일 경우 고온에 적응 시켰을 경우 역시 향상되었다. glycerol 20%과 oil 전 농도에서 처리하였을 경우 도 종 모두 다소 향상되는 것으로 나타났다.
곤충병원성 선충으로부터 각각 공생박테리아를 분리하여 flask 상에서 7일간 배양하여 공생박테리아의 성장정도, 단백질 분해 효소의 생성, 배양상등액의 꿀벌부채명나방 유충에 대한 살충성 및 지방산 함량에 관한 연구를 수행한 결과 XR-PC 및 XR-MK의 성장 및 살충성이 가장 우수한 것으로 나타났으며 protease 활성은 XR-DR이 배양 4일째 최대 활성을 보였으며, 지방산 함량의 경우 XR-PC 및 XR-HY가 다른 종의 지방산 함량에 비해 12:0, 14:0, 13:0 iso, 16:1 cis 5, 17:0 cyclo에서 함량의 차이를 나타내었다.
The toxic effects of four pesticides on the entomopathogenic nematodes. Heterorhabditis bacteriophora NC strain, Steinernema glaseri NC and Dongrae strain were tested by checking the mortality of infective juveniles(Ijs) in aqueous solution of pesticide. Mortality of Ijs was influenced by pesticide and concentration and soaking time. The herbicide alachlor and insecticide fenitrothion were toxic to Ijc of three entomopathogenic nematodes. But, the fungicides mepronil and tolclofos-methyl were nontoxic to Ijs. Tolclofos-methyl showed significantly very week toxicity at 28 days after soaking for S. glaseri NC strain. H. bacteriophora NC strain was more highly sensitive to high temperature condition then were the other nematodes.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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