The antimicrobial properties of extracts of Prunus mume were tested on Salmonella paratyphimurium and S. typhimurium. First, the Prumus mume was extracted with methanol at several temperatures, and then fractionation of the methanol extracts from Prunus mume was carried out by using petroleum ether, chloroform, ethyl acetate or butanol. Secondly, absorption column chromatoraphy (using a Diaion HP 20) was conducted to eliminate some water soluble materials that might inhibit the antimicrobial activity of some extracts. The antimicrobial activitry of each of the Prunus mume extracts was determined using a paper disc method against several food-borne pathogens, The growth inhibition curve was determine using butanol extracts of Prunus mume against Salmonella typhimurium. The extraction temperature did not have any significant effect on the yield of the extract or on the level of antimicrobial activity. The butanol extract of Prunus mume showed strong antimicrobial activity against Salmonella paratyphimurium and S. typhimurium; a 1,000 ppm of butanol extract of Prunus mume retared the growth of S. typhimurium up to 36 hours. (Korean J Nutrition 35(9) : 926~931, 2002)
A total of 28 Salmonella enterica serovar Typhimurium isolated from diseased pigs and swine carcasses between 2001 and 2003 were characterized by the antimicrobial resistance profiles, PCR for detection of S. Typhimurium DT104 and pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) with the restriction enzyme XbaI. All but one isolate presented multidrug resistance (MDR) to more than two antibiotics tested. A total of 11 resistance profiles were observed, and two phenotypes, ST and ASSuTG, were the most common among them. Two isolates were found to be S. Typhimurium DT104 isolates by PCR, and their resistance profile did not show the DT104 typical resistance type ACSSuT, but ACSSuTGK instead. PFGE identified 11 banding patterns in dendrogram, and three main clusters (designated A to C) were represented. Interestingly, sixteen of 19S. Typhimurium isolates belonging to cluster B showed an identical band pattern.
직ㆍ간법 변이원과 산화적 돌연변이원에 대한 송화분 추출물의 항돌연변이원성에 대하여 Ames test로 조사하였다. 메탄을 추출물을 이용하여, 10종의 돌연변이에 대한 돌연변이 억제효과를 검색한 결과 S. typhimurium TA98에서는 daunomycin, AFB$_1$과 Trp-P-1의 변이원성에 대해서만 각각 17.8, 82.2, 80.9%의 돌연변이 억제효과를, S. typhimurium TA100에서는 AFB$_1$의 변이원성에 대해서만 72.3%의 돌연변이 억제효과를 나타내었으며, S. typhimurium TA102, 104에서 t-과산화부틸과 $H_2O$$_2$의 돌연변이원성에 대한 메탄을 추출물의 돌연변이 억제 효과는 t-과산화부틸을 돌연변이원으로 한 S. typhimurium TA102에서 16.3%의 억제효과를 선택적으로 나타내었다. 따라서 메탄을 추출물을 클로르포름, 에틸아세테이트, 부탄올, 물 순으로 순차용매 분리한 다음, 이 분획물에 대한 항돌연변이원성을 검색하였다. 그 결과 S. typhimurium TA98에서 daunomycin, AFB$_1$과 Trp-P-1에 대해서 플로로포름 분획물은 각각 55.6, 93.7, 93.5%, 에틸아세테이트 분획물은 각각 11.4, 74.3, 85.2%, 부탄을 분획물에서는 10.9, -5.6, 6.8%, 물 분획물은 각각 -3.4, -3.8, 4.6%의 돌연변이 억제효과를 나타내었다. S. typhimurium TA100에서는 AFB$_1$에 대해 클로로포름 분획물과 에틸아세테이트 분획물이 각각 95.1, 62.5%의 억제효과를 나타내었으며, S. typhimurium TA102에서는 t-과산화부틸에 의해 유도된 산화적 돌연변이에 대해 클로로포름 분획물이 93.6%로 매우 강한 억제효과를 나타내었으며, 기타 분획물에서는 매우 낮은 억제효과를 나타내었다.
Porcine circovirus type 2 (PCV2) and porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) are known as significant immunosuppressive viruses in pigs. In this study, we investigated the correlation of PCV2 and PRRSV in enteric lesions of porcine salmonellosis. A total of 64 cases were classified into four pig groups as group A (24 cases, S. Typhimurium), group B (11 cases, S. Typhimurium+PCV2), group C (16 cases, S. Typhimurium+PRRSV) and group D (13 cases, S. Typhimurium+PCV2+PRRSV). Comparing with group A, ulcerative enteritis in large intestine was little more prevalent in the PCV2 infected pigs in group B and D. And lymphoid depletion in gut-associated lymphatic tissue (GALT) of large intestine was also detected in PCV2 positive group B (36.4%) and D (30.8%). According to the results of immunohistochemistry (IHC), PCV2 antigens (83.3%) were more prevalently distributed in the intestinal lesions of porcine salmonellosis than PRRSV antigens (10.3%). PCV2 were also detected in the lymphoid depleted GALT of the large intestine from 7 of the 8 pigs (87.5%), but PRRSV were not found in all cases. It may explain that PCV2 can play a certain immunological role to enhance secondary bacterial infection in porcine alimentary tracts.
감염성 Vibrio vulnificus에 의한 패혈증과 같은 질병의 원인을 알아보기 위하여 Vibrio vulnificus로 부터 세포벽 lipopolysaccharide를 추출한 후 지방산 조성을 분석하고 limulus gelation activity와 lethal toxicity를 측정하였다. 이 결과들을 비감염성 Escherichia coli LPS와 감염성 Salmonella typhimurium LPS의 것들과 비교하였다. V. vulnificus LPS의 주 지방산은 myristic acid 이었고 E. coli LPS는 lauric acid, S. typhimurium LPS는 capric acid 이었다. 세가지 LPS의 Limulus gelation activity는 같았으며(0.1ng/ml), V. vulnificus LPS의 lethal toxicity는 E. coli LPS와 S. typhimurium LPS의 것과 비슷하였다. LPS 이외에도 exotoxin과 같은 인자들도 V. vulnificus에 의한 세포 독성의 원인으로 고려해야 할 것이다
Salmonella spp. is of increasing public health concern as causative pathogens of food poisoning. The aim of this study was to investigate the serotypes and antimicrobial resistance pattern of Salmonella spp. isolated from duck farms in Daegu-Gyeongbuk province. Also, S. Enteritidis and S. Typhimurium isolates were further examined for plasmid analysis, phage typing and pulsed-field gel electrophoresis (PFGE). A total of 34 Salmonella spp. (16.4%) were isolated from duck farms and ten serotypes were identified. The predominant serotypes were S. Typhimurium (23.5%) S. Fyris (17.6%) and S. Haardt (11.8%), S. Agona and S. Enteritidis (respectively 8.8%). Of 34 Salmonella isolates, 15 (44.1%) isolates were resistant to at least one antimicrobial agent and multiple resistance (resistance to more than 4 drugs) was observed in 9 strains (26.5%). The high resistance was found to streptomycin (32.4%), tetracycline (29.4%), ampicillin, kanamycin and nalidixic acid (respectively, 26.5%), all Salmonella isolates were susceptible to cefoxitin, cefotaxime, gentamicin, amikacin and ciprofloxacin. All S. Enteritidis and S. Typhimurium isolates were found to contain only one plasmid (ca. 54 or 55kb, respectively). Among the S. Enteritidis isolates, two phage types were found, PT32a and PT1c, respectively, one isolates did not react with any of the phages used. Whereas, all S. Typhimurium isolates were RDNC (reacts but does not conform). PFGE showed to be a useful typing method better than plasmid analysis and phage typing for discrimination of isolates especially, S. Typhimurium isolates. Our results indicated that the serotypes of Salmonella isolates are widely distributed in duck farms, further epidemiological studies should be carried out.
본 연구에서는 한국 전통 식품에서 Salmonella Typhimurium와 Listeria monocytogenes의 검출에 대하여 LAMP에 기반한 3M Molecular Detection Assay 2 (3M MDA 2)와 식품공전에 등재된 분리배지, real-time PCR의 검출 성능을 비교하고자 하였다. 육회와 육사시미에 $10^0-10^4CFU/25g$의 수준으로 S. Typhimurium와 L. monocytogenes을 각각 접종하였다. Citrobacter freundii와 Listeria innocua는 S. Typhimurium와 L. monocytogene의 검출에 영향을 주는 균으로 사용하였다. S. Typhimurium와 L. monocytogenes만 $10^0-10^4CFU/25g$ 수준으로 접종한 모든 시료에서는 분리배지, real-time PCR과 LAMP에서 양성으로 검출되었다. C. freundii와 L. innocua를 같이 접종한 경우에서 부분적으로 양성이 나타났다. 육회와 육사시미에 대하여 real-time PCR 보다 3M MDA 2가 더 검출효율이 높음을 알 수 있었다. 분리배지가 가장 검출효율이 높았지만 3M MDA 2와 큰 차이가 없었다. 배지를 사용하는 방법은 최소 일주일의 시간이 소요되고 PCR의 경우 inhibitor의 영향을 많이 받아 정확한 검출이 어려운 점이 있다. 그러나 LAMP에 기반한 3M MDA 2는 enrichment 후 다음 날 간단한 protocol을 통해 25분 이내로 샘플의 양성 반응을 확인할 수 있어 식중독균에 대해 신속하고 정확한 검출이 가능한 것으로 판단되었다.
In this study, the genetic diversities of multi-resistant Salmonella typhimurium (ST) isolates were analyzed via the application of both pulsed field gel electrophoresis (PFGE) and Polymerase chain reaction (PCR) analysis methods, using 6 kinds of primers (REP, ERIC, SERE, BOX, P-1254 and OPB-17). And their discriminative abilities (DA) were also compared in order to determine the most effective and reliable analysis method. 118 S. typhimurium isolates, cultured from diverse animals and human patients in Korea beginning in 1993, were analyzed and subjected to a comparison of Simpson's index of diversity (SID), using both PFGE and PCR methods. PFGE by XbaI enzyme digestion allowed for discrimination into 9 pulsotypes, with high SID values (0.991) on the genomic DNA level. This shows that PFGE is a very discriminative genotypic tool, and also that multiple clones of S. typhimurium isolates had existed in domestic animals and humans in Korea since 1993. However, we could ultimately not to trace the definitive sources or animal reservoirs of specific S. typhimurium isolates examined in this study. Depending on the SID values, the combined method (7 kinds of method) was found to be the most discriminative method, followed by (in order) SERE-PCR, REP-PCR, ERIC-PCR, PFGE & OPB-17 (RAPD), P-1254 (RAPD), and BOX-PCR at the $80\%$ clone cut-off value. This finding suggests that the REP-PCR method (which utilizes 4 primer types) may be an alternative tool to PFGE for the genotyping of S. typhimurium isolates, with comparable cost, time, and labor requirement. The establishment of a highly reliable and discriminatory method for epidemiologic analysis is considered necessary in order for researchers to trace the sources of specific pathogens and, consequently, to control and prevent the spread of epidemic S. typhimurium isolates to humans.
We have established a SYBR Green-based realtime PCR method using AnyDirect solution, which enhances PCR from whole blood, for direct amplification of the virA gene of Shigella flexneri and the invA gene of Salmonella typhimurium from human feces without prior DNA purification. When we compared the efficiency of conventional or realtime PCR amplification of the virA and invA genes from the supernatant of boiled feces supplemented with S. flexneri and S. typhimurium in the presence or absence of AnyDirect solution, amplification products were detected only in reactions to which AnyDirect solution had been added. The detection limit of real-time PCR was $1{\times}10^4\;CFU/g$ feces for S. flexneri and $2{\times}10^4\;CFU/g$ feces for S. typhimurium; this sensitivity level was comparable to other studies. Our real-time PCR assay with AnyDirect solution is simple, rapid, sensitive, and specific, and allows simultaneous detection of S. flexneri and S. typhimurium directly from fecal samples without prior DNA purification.
본 연구의 목적은 Salmonella 표준균주 4(ATCC 3종, KCTC 1종)와 분리균주 2종 모두 6종을 대상으로 Thin aggregative fimbriae(박층 응집 섬모)에 해당하는 유전자 csgA와 csgB 를 각각 비교하여 아미노산 돌연변이와 염기서열 돌연변이를 유전자 서열분석법으로 관찰하는 것이었다. 균주들의 유전자 서열을 분석한 후에 분석한 결과는 비교적 적은 아미노산 돌연변이가 관찰되었다. Salmonella csgA 유전자에서는 Ser20→Gly(AGT→GGT), csgB 유전자에서는 Asp25→Ala(GAT→GCT)와 Lys66→Thr(AAA→ACA)으로 각각 아미노산 돌연변이와 뉴클레오티드 서열(nucleotide sequence) 돌연변이가 관찰되었다. Salmonella 6종의 균주에서 S. typhimurium - TH 균주에서 높은 비율인 2개의 아미노산 돌연변이가 관찰되었으며, 반면에 S. typhimurium ATCC 13311 균주와 S. typhimurium KCTC 1925 균주에서는 nucleotide sequence 변이가 관찰되지 않았다. 이상의 결과로 볼 때에 아미노산 돌연변이 탐색연구에 S. typhimurium - TH 균주의 csgA & csgB 유전자는 유전자서열 연구에 유용하다고 판단한다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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