RAPD 분석을 통한 marker선별과 건조약재의 비교, 그리고 내부형태 특징을 통해 당귀3종(種)을 구별할 수 있는 결과를 요약하면 다음과 같다. 1. 50개의 primer중 5개의 primer에서 당귀류 3품종을 모두 구별할 수 있는 특이적인 band가 나타났다. 2. 유연관계 분석에서 중국당귀와 일당귀가 참당귀보다 더 근연관계임을 알 수 있었다. 3. 신선한 잎과 건조된 약재에서 RAPD 재현성이 확인되어 RAPD 분석법을 통해 당귀감별에 응용할 수 있을 것으로 사료된다. 4. 뿌리 내부구조에서 중국당귀는 정상적인 2기사부와 2기목부에 덧붙여 일부 이상비대생장을 보였고, 일당귀나 참당귀의 도관절에 비하여 더 넓고 짧아 계통학적으로 훨씬 더 진화된 것으로 여겨진다. 5. 일당귀는 현저하게 두꺼운 코르크층이 발달한 반면 참당귀의 코르크층 아래에 $5{\sim}7$층의 후각세포층이 환상으로 발달하여 뚜렷한 대조를 이루었다.
RAPD에 의한 지리산 내 산거울 집단의 유전자 빈도와 지리적 거리에 따른 공간적 상관관계를 분석하였다. 전체 102 DNA 분절(밴드)이 107 개체에서 탐지되었다. 102 밴드 중 48(47.1%)개 밴드는 다형성을 나타내었다. 분집단간 다형성의 비교에서 거리 구간 I와 V가 가장 낮은 변이(16.7%)를 나타내었고, 거리 구간 VIII이 가장 높은 변이를 나타내었다(22.6%). 전체 다양도는 0.076이었다. 구간 VIII이 가장 높은 다양도(0.093)를 나타내었고, 구간 I가 가장 낮았다(0.063). 구간 사이의 유전적 유사도는 60 m 거리까지는 유사하였다. 지리산 집단에서 산거울은 강한 공간구조를 나타내고 있음이 RAPD 마커로 알 수 있었다. 이는 지리산 집단에서 낮은 이주자수와 개체들이 덩어리 모양의 분포를 나타내기 때문으로 판단된다. 본 연구에서 RAPD 마커로 산거울의 공간구조와 유전적 구조를 파악하는데 유용하게 이용될 수 있음을 입증하였다.
홍화 수집종의 RAPD 분석을 통한 유전적 다양성 및 유연관계를 밝히고 품종군을 분류하여 품종육성의 기초자료로 활용코자 시험한 결과는 아래와 같다. RAPD 분석에 적용한 37개의 Primer 중 25개의 적정 primer를 선발하였고, 증폭원 PCR산물은 $0.1{\sim}4.0kb$에서 재현성있는 band를 보였으며 각 primer에 의해 증폭된 band의 수는 $1{\sim}9$개로 다양하였고 평균 4.8개였다. PCR 반응에 사용된 25개의 primer에서 120개의 band가 관찰되었으며 다형성을 보이는 band될 수는 23개(19.2%)였다. RAPD-PCR에 의해 얻어진 dendrogram에서 유연계수 0.042를 기준으로 합을 했을 때 6개 군으로 분류되었고 II군과 III군은 각각 12종(38%)씩 속하였다.
누에 RAPD-PCR 최적조건에 대해 실험한 결과, 중합효소 연쇄반응(PCR)의 최적조건은 반응액 25$\mu$l에 대해 주형 DNA 30ng, dNTP mixture 200$\mu$M, primer 300mM, Taq DNA Polymerase 1.0unit 및 Mg2+ 1.5mM로 판단되었으며, 또 상기의 실험조건을 기본으로 하여 annealing 온도를 탐색한 결과 35$^{\circ}C$-42$^{\circ}C$에서 DNA의 증폭이 안정적임이 밝혀졌다. 또한 동일한 품종내에서 개체간 및 암수간의 DNA 다형성은 인정되지 않았고, 품종간 DNA 다형성은 OPM 04 primer를 사용한 결과 5개의 RAPD 마커로 인정 되었다. 양친간 다형성이 인정된 primer를 사용하여 F2 33개체에 대해 DNA를 증폭시킨 결과 800 bp band가 3 :1 로 분리되었으므로 누에 품종간 유전적 유연관계 및 유전자 지도작성의 가능성을 제시했다.
Randomly Amplified Polymorphic DNA (RAPD) 기술을 이용하여 국내 식품으 로부터 분리한 Listeria sp. 분리균주에 대한 DNA polymorphism을 분석하고 유연환계를 비 교하며, 유용 marker를 개발할 목적으로 10가지 10-mer primer를 이용하여 PCR을 수행한 결과 5개의 primer(OPA-01, OP-26-01, OP-26-02, OPB-01, OP-26-10)가 선별되었고, 76개 의 DNA 단편이 증폭되었다. 이 중 OPA-01과 OP-26-10 promer에 의한 약 1.5 kb와 0.7 kb의 증폭 band는 모든 Listeria 분리균에서 관찰할수 있었으나, 이 증폭된 DNA 단편은 Listeria sp.에만 특이적인 것은 아니었다. NTSYS 프로그램을 이용해서 Listeria sp. 분리구 간의 유전적 유연관계를 알아본 결과 7개의 cluster로 나누어졌고 유사도는 대체로 0.54~ 0.93사이였으며, 특히, No.3과 No.20은 93%로 가장 높은 유사도를 나타내었고, No.7과 No.24 또는 No.7과 No.45는 54%로 가장 낮은 유사도를 나타내었다. 이러한 결과는 RAPS 기술을 이용하여 쉽게 Listeria sp.를 subspecies로 분류할 수 있음을 시사하였다.
Acinetobacter baumannii strains are emerging pathogens of the nosocomial infection with an increasing frequency in recent years. The therapeutic difficulty due to the wide spread of multiple resistant strains was major problem in A. baumannii infection. It seems likely that high frequency of A. baumannii infection will be increasing epidemiological importance in the future. However, the current limited understanding of the epidemiology of A. baumannii infections is caused by lack of a rapid and practical method for the molecular characterization of A. baumannii strains. This study was undertaken to determine molecular types and genetic similarity among A. baumannii strains isolated from four hospitals by RAPD analysis. Eighty-five strains, including 40 from Chunnam University Hospital, 27 from Dankook University Hospital, 15 from Yonsei University Hospital, and 3 from Seonam University Hospital, were classified into three molecular types. Molecular type II was the most common pattern and included 72 strains. All strains from Dankook University Hospital and 40 strains from Chunnam University Hospital belonged to molecular type I or II. A. baumannii strains form Yonsei University Hospital were very distant similarity values. The range of genetic similarity values among 85 strains of A. baumannii was 0.26 to 1.00. Although phenotypes including biotype and antimicrobial resistance pattern of A. baumannii strains were same or very similar to each other, their RAPD patterns were quite different. Typing with phenotypes was found to be less reliable than molecular typing by RAPD analysis. These results suggest that RAPD analysis provides rapid and simple typing method of A. baumannii strains for epidemiological studies. This work is the first epidemiological report of A. baumannii infections in Korea and it is hoped that results of this work may contribute to a better understanding of the clinical importance and epidemiology of A. baumannii strains.
본 연구는 국내의 경우 제주도의 일부지역에서만 자생하는 흑오미자(Schisandra nigra)를 RAPD법을 이용하여 자웅동주 및 자웅이주 식물의 특이적 Marker를 탐색하고저 실시 하였다. 10-mer로 구성된 80종류의 random primer를 사용하여 흑오미자를 분석한 결과 기존의 재배되고 있는 오미자(Schisandra chinensis) 또는 남오미자(Kadsura japonica)와는 다른 band pattern을 보여 주었다. 흑오미자의 자웅동주. 암그루, 숫그루의 3품종을 상기와 동일하게 80개의 primer를 사용하여 RAPD를 분석한 결과, 5종류의 random primer(OPA-17, OPA-19, OPB-3, OPB-9, OPB-16)에 대해서는 각 품종에 대한 특이적인 band가 검출되었다. 숫그루, 암그루 식물과는 다르게 자웅동주 식물은 3개체(1호 2호, 3호)간에도 서로 다른 band pattern을 보이는 특징을 갖고있다. 숫그루 특이적인 band pattern은 OPB-3 primer을 이용할 경우 750bp에서 검출되었고, 암그루는 OPA-19 primer에서 950bp, 1690bp와 OPB-3 primer의 경우 700bp에서 자웅동주 및 숫그루에서 나타나지 않는 band가 검출되었다. 이러한 결과는 흑오미자의 숫그루 및 암그루에서 나타난 특이적인 band가 유묘시기에 암ㆍ수 개체를 조기에 구별하는 genetic marker로 사용할 수 있으리라 기대된다.
백합과 화훼작물의 품종구분을 위하여 RAPD 방법이 사용되어졌다. Operon사에서 구입한 10개의 10-mer random primer를 이용한 RAPD 실험결과 모두 107개의 밴드가 관찰되었고, 관찰된 밴드는 300bp 에서 2kb의 범위에 속했으며, 같은 계통 내에서는 동일한 밴드양상을 나타내었다. 그러나 Casa Blanca와 Adelina는 동일계통 내 다른 품종들과 다른 밴드 양상을 보였다. L. longiflorum내의 품종들은 서로 다른 밴드 양상을 나타내었다. Random primers, OPA-02, 03, 04, 14, 16 그리고 17로 형성된 DNA 밴드들은 Lilium의 서로 다른 cultivar와 hybrid를 구분하는 marker로도 이용이 가능하리라 생각된다.
RAPD 방법을 이용하여 14의 돌산갓 품종의 유전적 다형성을 분석하였다. 39개의 random primer를 실험하여 그 중 7개의 다형성을 나타내는 primer를 선발 하였다. 증폭된 PCR 산물은 0.2~3.5 kb 사이에서 재현성 있는 밴드를 나타내었으며, 각 primer에 의해 증폭된 밴드의 수는 2~27개로 다양하였고, 평균 8.7개였다. UPGMA 분석에 의해 14개 품종은 3개의 그룹으로 나뉘었다. 이 결과들로부터 갓의 유전적 다양성 검토 및 $F_1$ 품종 생산을 위한 교배 조합 작성에 RAPD 분석은 유용하다는 것을 나타내었다.
본 연구는 RAPD PCR 분석을 통하여 한국의 서한아 수계(한강, 금강)와 남한아 수계(섬진강, 낙동강)에 서식하는 쉬리 집단들 간의 유전변이를 비교하였다. 4집단들 간의 유전적 변이를 분석한 결과, 사용한 12개의 random primer들 모두에서 서한아 수계 집단과 남한아 수계의 집단들을 구분하여 주는 특이적 PCR 단편들을 확인할 수 있었다. 유전적 유사도 분석에서 한강, 금강의 서한아 수계 집단들과 섬진강, 낙동강의 남한아 수계 집단들의 유전적 유사도는 0.49~0.53로 낮게 나타났고 유전적 거리는 0.63~0.71로 높게 나타났다. 유전적 거리에 기초한 UPGMA dendrogram 분석에서도 서한아 수계와 남한아 수계의 집단들이 명확하게 구분되었다. 따라서 서한아와 남한아 수계의 쉬리 집단은 유전적 구조에 있어 큰 차이가 있으며, 남한아 수계의 쉬리는 서한아 수계 쉬리와 진화적으로 뚜렷하게 구분되는 집단으로 판단된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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