An endophytic bacterial strain was isolated from kimchi, a Korean traditional fermented Brassica campestris and identified as Bacillus subtilis MJMP2 based on the 16S rRNA sequence. This strain showed strong antagonistic activity against Xanthomonas oryzae pv. oryzae (Xoo) KACC10331, the pathogen of bacterial rice blight disease, as well as activity against some other rice phytopathogenic fungi. The active compound was purified through size-exclusion chromatography and preparative High-performance liquid chromatography. The molecular weight was determined as m/z 1043 by mass spectroscopy, which is identical to that of iturin A. Furthermore, a crude extract from the culture supernatant of Bacillus subtilis MJMP2 showed inhibitory activity against rice blight disease in both a rice leaf explant assay and a pot assay. The crude extract also enhanced the length of roots of Arabidopsis thaliana. These results suggest that the strain Bacillus subtilis MJMP2 could be used as a biological agent to control rice blight disease.
Rice blast, caused by Magnaporthe oryzae, is one of the most destructive rice diseases worldwide. The aim of this study was to screen bacterial isolates to efficiently prevent the occurrence of rice blast. A total of 232 bacterial isolates were extracted from nonrhizospheric rice soil and were screened for antifungal activity against M. oryzae using a leaf segment assay. Strains S170 and S9 showed significant antagonistic activity against M. oryzae in vitro and in leaf disk assays, and controlled M. oryzae infection under greenhouse conditions. The results showed that strains S170 and S9 could effectively control rice leaf blast and panicle neck blast after five spray treatments in field. This suggested that the bacterial strains S170 and S9 were valuable and promising for the biocontrol of rice disease caused by M. oryzae. Based on 16S rDNA, and gyrA and gyrB gene sequence analyses, S170 and S9 were identified as Bacillus amyloliquefaciens and B. pumilus, respectively. The research also demonstrated that B. amyloliquefaciens S170 and B. pumilus S9 could colonize rice plants to prevent pathogenic infection and evidently suppressed plant disease caused by 11 other plant pathogenic fungi. This is the first study to demonstrate that B. amyloliquefaciens and B. pumilus isolated from nonrhizospheric rice soil are capable of recolonizing internal rice stem tissues.
Effects of Bacillus subtilis and Rhizopus oryzae on chitooligosaccharides (COS) content of doenjang (soybean paste) and kanjang (soy sauce) were investigated using kojis made with the two strains. Competitive direct enzyme-linked immunosorbent assay (cdELISA) system using anti-COS mixture (COSM) antibody was applied for COS detection ranging from 0.001 to $1{\mu}g/mL$, and the recoveries of COSM spiked to doenjang and kanjang were 102 and 115%, respectively. Doenjang and kanjang products made with a mixture of B. subtilis and R. oryzae kojis showed COS contents of 171 and $29{\mu}g/mL$, respectively, during two-month aging period, much higher than those of Japanese and Korean commercial ones.
We analyzed the cultural characteristics of isolated brewing fungi for developing fermentation starters. In a previous study, we collected 87 domestic nuruk, from which 481 fungi strains were isolated and 11 were selected showing improved productivity. After culturing these 11 fungi strains in several types of media, temperatures, carbon and nitrogen sources, Rhizopus sp. grew well in MEA, ME20S, PDA medium while Aspergillus sp. grew well in ME20S and YES. Both Rhizopus sp. and Aspergillus sp. survived well at optimal growth temperatures of 30 and $37^{\circ}C$. Rhizopus sp. utilized lactose, glucose and peptone sources while Aspergillus sp. utilized glucose, mannose, fructose and yeast extract sources. ${\alpha}-Amylase$ activity was excellent in L. ramosa CN044, R. oryzae 82-7(MEB), R. oryzae CN174 and A. oryzae 58-11(WEB) culture extracts. This study suggests that R. delemar 26-4, 58-8 and A. oryzae 78-5, 37-7 might be appropriate fungi strains for fermentation starters based on development of large fungi bodies and their good enzyme activities.
Bacterial blight is one of the most serious diseases of rice (Oryza sativa L.), and it has been known that Xanthomonas oryzae pv. oryzae (Xoo) causes this disease symptom. To develop resistance rice cultivars against Xoo, 3,000 lines of $M_3$ mutants, which were irradiated with gamma ray, were tested by 'scissor-dip method' primarily, and 191 putative resistant lines were selected. In $M_4$ generation, these lines were screened again with various ways such as measuring of symptom of bacterial blight in leaf, number of tiller, fresh weight, and phenotypic segregation ratio in next generation. Finally, six resistance lines were selected. RT-PCR analysis revealed that these lines displayed high level of R-genes such as Xa21, Pi36, and Pi-ta. These results indicate that mutations by gamma ray cause disruptions of regulatory signal transduction systems of these R-genes. Furthermore, these selected mutants could be useful for the development of rice cultivar resistant to Xoo.
Vo, Kieu Thi Xuan;Lee, Sang-Kyu;Halane, Morgan K.;Song, Min-Young;Hoang, Trung Viet;Kim, Chi-Yeol;Park, Sook-Young;Jeon, Junhyun;Kim, Sun Tae;Sohn, Kee Hoon;Jeon, Jong-Seong
Molecules and Cells
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v.42
no.9
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pp.637-645
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2019
Effector-triggered immunity (ETI) is an effective layer of plant defense initiated upon recognition of avirulence (Avr) effectors from pathogens by cognate plant disease resistance (R) proteins. In rice, a large number of R genes have been characterized from various cultivars and have greatly contributed to breeding programs to improve resistance against the rice blast pathogen Magnaporthe oryzae. The extreme diversity of R gene repertoires is thought to be a result of co-evolutionary history between rice and its pathogens including M. oryzae. Here we show that Pii is an allele of Pi5 by DNA sequence characterization and complementation analysis. Pii-1 and Pii-2 cDNAs were cloned by reverse transcription polymerase chain reaction from the Pii-carrying cultivar Fujisaka5. The complementation test in susceptible rice cultivar Dongjin demonstrated that the rice blast resistance mediated by Pii, similar to Pi5, requires the presence of two nucleotide-binding leucine-rich repeat genes, Pii-1 and Pii-2. Consistent with our hypothesis that Pi5 and Pii are functionally indistinguishable, the replacement of Pii-1 by Pi5-1 and Pii-2 by Pi5-2, respectively, does not change the level of disease resistance to M. oryzae carrying AVR-Pii. Surprisingly, Exo70F3, required for Pii-mediated resistance, is dispensable for Pi5-mediated resistance. Based on our results, despite similarities observed between Pi5 and Pii, we hypothesize that Pi5 and Pii pairs require partially distinct mechanisms to function.
An in vitro experiment was conducted to evaluate the effects of Aspergillus oryzae culture (AOC) and 2-hydroxy-4-(methylthio)-butanoic acid (HMB) on rumen fermentation and microbial populations between different roughage sources. Two roughage sources (Chinese wild rye [CWR] vs corn silage [CS]) were assigned in a $2{\times}3$ factorial arrangement with HMB (0 or 15 mg) and AOC (0, 3, or 6 mg). Gas production (GP), microbial protein (MCP) and total volatile fatty acid (VFA) were increased in response to addition of HMB and AOC (p<0.01) for the two roughages. The HMB and AOC showed inconsistent effects on ammonia-N with different substrates. For CWR, neither HMB nor AOC had significant effect on molar proportion of individual VFA. For CS, acetate was increased (p = 0.02) and butyrate was decreased (p<0.01) by adding HMB and AOC. Increase of propionate was only occurred with AOC (p<0.01). Populations of protozoa ($p{\leq}0.03$) and fungi ($p{\leq}0.02$) of CWR were differently influenced by HMB and AOC. Percentages of F. succinogenes, R. albus, and R. flavefaciens (p<0.01) increased when AOC was added to CWR. For CS, HMB decreased the protozoa population (p = 0.01) and increased the populations of F. succinogenes and R. albus ($p{\leq}0.03$). Populations of fungi, F. succinogenes (p = 0.02) and R. flavefacien (p = 0.03) were increased by adding AOC. The HMB${\times}$AOC interactions were noted in MCP, fungi and R. flavefacien for CWR and GP, ammonia-N, MCP, total VFA, propionate, acetate/propionate (A/P) and R. albus for CS. It is inferred that addition of HMB and AOC could influence rumen fermentation of forages by increasing the number of rumen microbes.
The $11{\alpha}$-hydroxylation of $16{\alpha}$, 17-epoxyprogesterone (EP) catalyzed by Rhizopus nigricans is crucial for the steroid industry. However, lower conversion rate of the biohydroxylation restricts its potential industrial application. The $11{\alpha}$-steroid hydroxylase CYP509C12 from R. oryzae were reported to play a crucial role in the $11{\alpha}$-hydroxylation in recombinant fission yeast. In the present study, the CYP509C12 of R. oryzae (RoCYP) was introduced into R. nigricans using the liposome-mediated mycelial transformation. Heterologous expression of RoCYP resulted in increased fungal growth and improved intracellular reactive oxygen species content in R. nigricans. The $H_2O_2$ levels in RoCYP transformants were approximately 2-folder that of the R. nigricans wild type (RnWT) strain, with the superoxide dismutase activities increased approximately 45% and catalase activities decreased approximately 68%. Furthermore, the $11{\alpha}$-hydroxylation rates of EP in RoCYP transformants (C4, C6 and C9) were 39.7%, 38.3% and 38.7%, which were 12.1%, 8.2% and 9.4% higher than the rate of the RnWT strain, respectively. This paper investigated the effect of heterologous expression of RoCYP in R. nigricans, providing an effective genetic method to construct the engineered strains for steroid industry.
Soft rot disease on Raspberry (Rubus crataegifolius Bunge) was observed in sale boxes at Jinju City Wholesale Market of Agricultural Products in June 2010. The infected fruits were rapidly water-soaked, softened, black and eventually rotted. The colonies on the infected fruits were white to light brown, formed numerous sporangiospores. Optimum temperature for the mycelial growth of the causal fungus on PDA was $30^{\circ}C$ and growth was still apparent at $37^{\circ}C$. Sporangia were globose, white at early and gradually to black, and 40-210 ${\mu}m$ in diameter. Sporangiophores were white to mid brown as maturation and 8-20 ${\mu}m$ in diameter. Columella were globose to sub-globose, and the size of the diameter was 85-120 ${\mu}m$ in diameter. Sporangiospores were sub-globose, rhomboidal and irregular, streaked and 5-10 ${\mu}m$ in length. On the basis of symptom, mycological characteristics, ITS rDNA sequence analysis, and pathogenicity of the fungus, the causal fungus was clearly identified as Rhizopus oryzae Went & Prinsen Geerligs. This is the first report of soft rot by R. oryzae on R. crataegifolius in Korea.
Journal of the Korean Society of Food Science and Nutrition
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v.26
no.5
/
pp.759-766
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1997
From Nuruks, a traditional Korean starter for rice wine, collected from 42 different areas in Korea, 111 fungal strains were isolated. These isolates were identified as 25 species belonging to seven genera of Rhizopus oryzae(14 strains), R. oligosporus(8 strains), R. nigricans(5 strains), R. arrhizus (5 strains), Aspergillus oryzae(12 strains),Asp. parasiticus(8 strains), Asp. fumigatus(3 strains), Asp. ochraceus(7 strains), Asp. wentii(5 strains), Asp. parasiticus(8 strains), Asp. penicilloides(3 strains), Asp. clavatus(4 strains), Penicillium purpurogenum(2 strains), Pen. glabrum(1 strain), Pen. granulaturm (1 strsin), Pen. fellutanum(1 strain), Geotrichum candidum(2 strains), Absidia corymbifera(12 strains), Mucor racemosus(2 strains), M. plumbeus(2 strains) and Curvularia lunatus(3 strains).
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