• 한국식품과학회지
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• 제33권4호
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• pp.486-491
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• 2001

국내외에서 분양 받고 국내식육에서 분리된 총 100균주의 Y. enterocolitica에 대한 병원성여부를 HEp-2세포 침투성 시험법을 기준으로 하고 여러 가지 병원성 확인 방법을 비교하였다. 혈청형만으로 병원성을 판단하기에는 충분하지 않았고 이외의 방법 즉, esculin과 salicin시험, pyrazinamidase 시험, biotype 등의 생화학적 특성에 바탕을 둔 실험 단독으로 병원성을 판단하기에는 완전하지 않았다. D-xylose 발효실험, CRMOX agar 시험과 자동응고반응(Autoagglutination)들은 병원성확인에 보조적인 역할만을 할 수 있었다. HEp-2 세포 침투성 시험법은 시간과 노력이 많이 소요되므로 이 방법을 대치할 수 있는 간단하고 신속, 정확하게 Y. enterocolitica 병원성을 확인할 수 있는 방법은 esculin시험에서 음성반응을 보이는 것만 PCR시험을 행하여 판별하는 것이라고 사려된다.

• 한국자기공명학회논문지
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• 제18권1호
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• pp.36-40
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• 2014

Predicting secondary structure of protein through assigned backbone chemical shifts has been used widely because of its convenience and flexibility. In spite of its usefulness, chemical shift based analysis has some defects including isotopic shifts and solvent interaction. Here, it is shown that corrected chemical shift analysis for secondary structure of protein. It is included chemical shift correction through consideration of deuterium isotopic effect and calculate chemical shift index using probability-based methods. Enhanced method was applied successfully to one of the proteins from Mycobacterium tuberculosis. It is suggested that correction of chemical shift analysis could increase accuracy of secondary structure prediction of protein and small molecule in solution.

• 한국자기공명학회논문지
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• 제21권1호
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• pp.26-30
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• 2017

Dynamic properties of proteins can present key information on protein-ligand and protein-protein interaction. Despite their usefulness, the properties of protein dynamics have not been obtained easily due to protein stability and short-term measurement. Here, it is shown that combined method for analysis of dynamical properties. It utilizes predicted order parameter and NMR relaxation data such as $T_1$, $T_2$, and heteronuclear NOE. The suggested method could be used to know the flexibility of protein roughly without precise dynamical parameters such as order parameters through model-free analysis.

• 한국자기공명학회논문지
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• 제21권3호
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• pp.85-89
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• 2017

Pyrazinamidase (PncA) from Mycobacterium tuberculosis is the hydrolytic enzyme (hydrolase) that can hydrolyze substrate PZA to active form pyrazoic acid (POA). To investigate hydrolytic reaction of M. tuberculosis PncA, 1D NMR spectra were monitored at various molar ratios of PncA and PZA. The line-width of PZA was changed as PncA was added into PZA with different molar ratios. These results suggested that determination of PncA enzymatic activity could potentially serve as an indirect measure of PZA susceptibility.

• 한국자기공명학회논문지
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• 제22권4호
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• pp.144-148
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• 2018

Catalytic enzyme Pyrazinamidase (PncA) from Mycobacterium tuberculosis can hydrolyze substrate pyrazinamide (PZA) to pyrazoic acid (POA) as active form of compound. Using NMR spectroscopy, pH-dependent catalytic properties were monitored including metal binding mode during converting PZA to POA. There seems to be a conformational change through zinc binding in active site from the perturbation of peak intensities in series of 2D HSQC spectra the conformation changes through zinc binding.

• 대한수의학회지
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• 제32권2호
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• pp.181-194
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• 1992

Two hundred and eighty nine strains of Yersinia enterocolitica isolated from healthy pigs were tested for the presence of 40~50 Megadalton virulence-associated plasmids and plasmidmediated in vitro virulence-associated properties, i.e., congo red uptake, calcium dependency, autoagglutination, CRMOX reaction, crystal violet binding and pyrazinamidase reaction. The correlationships between in vitro virulence-associated properties and the presence of 220 Kdalton outer membrane protein(OMP) were examined in strains with or without virulence-associated plasmids. The correlationships between the presence of plasmids on the production of the OMP and the expression of in vitro virulence-associated properties were studied with $CRMOX^+$ strains and acridine orangecured $CRMOX^-$ mutants. The results were as follows : 1. Of the in vitro virulence-associated tests with 289 strains of Y enterocolitica, 275 strains (95.2%) were positive for pyrazinamidase test, and followed by in order of crystal violet binding test, 226 (79.2% ) ; CRMOX test, 190 (65.7%) ; autoagglutination test, 1.85(64.0%) : calcium dependency test, 86 (29.8%) and congo red uptake test, 47(16.3%). 2. The correlationship between autoagglutination and CRMOX test(r=0.90) was highly significant (p<0.01). 3. In 190 strains(65.7%) bearing the virulence-associated plasmids(MW 40~50 Mdalton), the correlation between the presence of plasmids and their in vitro virulence-associated properties were highest with CRMOX test(r=0.93) and followed by in orders of AAG test(0.81), CV test(0.46), PYZ test(0.37) and CD test(0.18), but no correlationship between the presence of plasmids and CR test(-0.11). 4. The $CRMOX^+$ strains produced the 220 Kdalton OMP when they were cultured at $37^{\circ}C$, but not at $26^{\circ}C$. The presence of 220 Kdalton OMP was correlated significantly with in vitro virulence properties and the presence of virulence-associated plasmid, respectively. 5. In the isogenic $CRMOX^-$ mutant strains, of which plasmid were cured by treatment with acridine orange not only in vitro virulence-associated properties(CR 100%, CD 100%, AAG 82.6%, CV 58.3%) disappeared but also 220 Kdalton OMP(100%) was not produced. These results indicate that the positive CRMOX reaction is plasmid-mediated and the CRMOX test is potential as an in vitro virulence tests with Y enterocolitica.

• 대한임상검사과학회지
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• 제54권2호
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• pp.125-132
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• 2022

다제내성결핵과 광범위내성결핵은 결핵 치료의 문제가 되고 있으며 발생빈도 역시 증가하고 있다. 본 연구는 2010년 1월부터 2019년 12월까지 녹십자의료재단 의뢰된 환자를 대상으로 Löwenstein-Jensen 고체배지와 pyrazinamide for pyrazinamidase를 이용하여 약물감수성시험(DST)을 시행하여 내성으로 전환되는 항결핵제 패턴과 평균 추적 기간을 분석하였다. 항결핵제 중 1개 이상의 항결핵제 내성을 보인 증례들에서 초기 의뢰 시 INH 항결핵제에 내성인 경우가 55명(33.1%)으로 가장 높은 비율로 나타났으며, 내성으로 전환된 항결핵제는 EMB 17명(26.6%), RFP 14명(21.9%), QUI 14명(21.9%), PZA 12명(10.9%) 순으로 조사되었다. 10개의 항결핵제에 모두 감수성인 증례들에서는 INH 항결핵제에 대한 내성 전환은 43명(7.2%)으로 가장 빈도가 높았으며, 평균 추적 기간은435.6일로 조사되었으며, 내성으로 전환되는 항결핵제의 내성전환율은 INH 43명(7.2%), RFP 23명(3.9%), SM 11명(1.9%), QUI 4명(0.7%), AMK 3명(0.5%), EMB 3명(0.5%)이었다. 이에 본 연구는 항결핵제에 대한 감수성에서 내성으로의 전환은 특히 다제내성결핵과 광범위 내성결핵의 전환되는 환자에게 매우 중요한 자료가 될 것으로 보이며, 결핵 치료에서 환자 치료에 도움이 될 것으로 사료된다.

• Tuberculosis and Respiratory Diseases
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• 제72권6호
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• pp.475-480
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• 2012

Background: Pyrazinamide (PZA) is an effective antitubercular drug that becomes toxic to Mycobacterium tuberculosis when converted to pyrazinoic acid by pyrazinamidase (PZase), encoded by mycobacterial pncA. A strong association was noted between the loss of PZase activity and PZA resistance. The causative organisms in extrapulmonary tuberculosis are rarely cultured and isolated. To detect pncA mutations in specimens from extrapulmonary tuberculosis as confirmative diagnosis of mycobacterial infection and alternative susceptibility test to PZA. Methods: Specimens were collected from clinically proven extrapulmonary tuberculosis. pncA was sequenced and compared with wild-type pncA. Results: pncA from 30 specimens from 23 donors were successfully amplified (56.6% in specimens, 59% in donors). Six mutations in pncA were detected (20.0% in amplified specimens, 26.1% in specimen donors) at nucleotide positions of 169, 248 and 419. The mutation at position 169 results in substitution of aspartic acid for histidine, a possible allelic variation of M. bovis that have intrinsic PZA resistance. The mutation at position 248 changes proline into arginine and that at position 419, arginine into histidine. Conclusion: DNA-based diagnosis using pncA may be simultaneously useful for the early diagnosis of mycobacterial infection and the rapid susceptibility to PZA in extrapulmonary tuberculosis. A potential implication of pncA allelic variation at 169 might be suggested as a rapid diagnostic test for M. bovis infection or Bacille Calmette-Gu$\acute{e}$rin (BCG) reactivation.

• Tuberculosis and Respiratory Diseases
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• 제45권6호
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• pp.1178-1187
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• 1998

연구배경 : Pyrazinamide(PZA)는 대식세포(macrophage)내의 결핵균에 주로 작용하는 항결핵약제로서 단기화학요법의 중요한 요소이다. 최근 서구에서 AIDS 발생의 증가와 함께 약제내성 결핵의 발생이 증가하면서 약제내성을 조기에 발견하려는 노력이 시도되고 있다. 현재 우리나라에서는 PZA 감수성 검사 대신에 pyrazinamidase(PZase) 활성도 유무로 PZA에 대한 내성여부를 판별하고 있다. 최근 결핵균의 PZase를 coding하는 pncA 유전자가 밝혀졌고 이 유전자의 돌연변이가 결핵균의 PZA 내성에 관여한다는 보고가 있었다. 이에 본 연구자는 결핵균의 pncA 유전자를 대상으로 한 PCR-SSCP 법으로 PZA 내성여부를 진단할 수 있는지 알아보기 위하여 본 연구를 시행하였다. 방 법 : 환자에서 추출되어 배양후 대한결핵연구원에서 PZase 활성도가 확인된 44예의 결핵균주와 대한결핵연구원에서 공여받은 BCG-French Strain, BCG-Tokyo strain, 그리고 1예의 우형결핵균 배양검체를 대상으로 하였다. 검체에서 bead beater 법으로 DNA를 추출하였으며 pncA 유전자를 포함하는 561bp 분절을 중합효소연쇄반응으로 증폭하였다. 이 증폭된 DNA를 BstB I 제한효소로 절단한 후 폴리아크릴아마이드젤에서 SSCP를 시행하여 그 결과를 표준균주 H37Rv와 비교하였다. 결 과 : 44예의 결핵균 중 22예는 PZase 활성도 양성이었고 22예는 PZase 활성도 음성이었다. 양성 22 예중 18예(82%)에서 표준균주인 H37Rv와 동일한 band의 이동성을 보였고 4예는 다른 band의 이동성을 보였다. 음성균주 22예중 19예(86%)에서 H37Rv와 다른 band의 이동성을 보였고 3예는 H37Rv와 동일한 band의 양상을 보여서 두 검사방법간의 관련성 검증 결과 통계적으로 유의하였다 (p<0.01). 근본적으로 PZA에 내성을 갖는 BCG strains과 1예의 우형결핵균 모두 H37Rv와 다른 band의 양상을 보여주었다. 결 론 : 결핵균의 PZase를 coding하는 pncA 유전자를 이용한 PCR-SSCP 법은 PZA 내성의 진단방법으로 기대된다.