• Applied Biological Chemistry
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• 제38권5호
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• pp.382-386
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• 1995

감자의 단백질 분해효소 억제제-II(PI-II)단백질은 카이모트립신 저해부위와 트립신 저해부위로 나뉘어 있는데 PI-II 유전자중의 하나인 PI-IIT 유전자의 염기서열에서 비롯된 아미노산 서열이 폴리펩타이드 카이모트립신 저해제(PCI) 단백질의 아미노산 서열과 84%의 높은 동질성을 가지고 있으므로 감자의 단백질 분해효소 억제제유전자 집단 (family) 중의 하나인 PCI와 homology가 있는 유전자단편을 클로닝하기 위하여 이미 클론된 PI-IIT 유전자로부터 PCR을 행하여 얻어진 DNA 단편을 백터에 클로닝하고 염기서열을 결정하였다. 염기서열을 확인한 유전자 단편을 박테리오파아지 T7 promoter와 terminator를 갖고있는 플라스미드 pET3a에 옮겨 대장균 BL2l(DE3)에서 발현시켰던바 IPTG의 부가에 따라 유기되는 것을 확인 하였으나 발현수준은 기대했던것에 미치지 못하였다.

• KSBB Journal
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• 제17권3호
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• pp.311-313
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• 2002

L. crispatus KLB46는 Gram-positive bacteria로써 인간의 건강에 중요한 역할을 한다. 본 연구에서는 glass bead를 이용하여 세포벽을 파괴하고 hot phenol RNA 분리방법을 이용하여 RNA를 성공적으로 분리하였다. 또한 Iysozyme과 proteinase K 처리과정을 배제하여 시간적, 경제적인 면에서 유용한 방법임을 확인할 수 있었다. Gram-positive bacteria에서 glass bead를 이용한 RNA 분리는 특수한 조건에 의해 전사 되거나 반감기가 찬은 mRNA의 연구에 유용한 방법이라 사료된다.

• Biotechnology and Bioprocess Engineering:BBE
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• 제11권5호
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• pp.402-407
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• 2006

Vascular endothelial cells release proteinases that degrade the extracellular matrix (ECM), thus enabling cell migration during angiogenesis and vasculogenesis. Sildenafil citrate stimulates the nitric oxide-cyclic guanosine monophosphate pathway through inhibition of phosphodiesterase type V (PDE5). In this report, we examined the mechanisms underlying sildenafil citrate-induced cell migration using cultured mouse aortic endothelial cells (MAECs). Sildenafil citrate induced migration and proteinase secretion by murine endothelial cells. Sildenafil citrate induced the secretion of matrix metalloproteinase-2 (MMP-2) and MMP-9, which is inhibited by $NF-{\kappa}B$ inhibitors. Sildenafil citrate also induced the secretion of plasmin, which is inhibited by PI 3'-kinase inhibitors. It is suggested that sildenafil citrate-induced migrating activity in endothelial cells may be accomplished by increased secretion of proteinases.

• 한국수산과학회지
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• 제21권2호
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• pp.85-96
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• 1988

Purification and some properties of alkaline proteinases in the pyloric caeca of skipjack, Katsuwonus vagans, were investigated. Four alkaline proteinases, temporarily designated proteinases I, II, III and IV, were identified from the tissue extract of the pyloric caeca by ammonium sulfate fractionation, DEAE-Sephadex A-50 chromatography, and Sephadex G-100 and G-200 gel filtration. Result of disc-polyacrylamide gel electrophoretic analysis showed that the purified proteinases II and III were homogenous with the yields of $1.5\%\;and\;1.2\%$, and those specific activities were increased to 33 to 37 fold over that of the crude enzyme solution, respectively. Molecular weight of the proteinases II and III determined by sephadex G-100 gel filtration were 28,500 and 24,200, respectively. The optimum conditions for the caseinolytic activity of the two enzymes were pH 9.6 and $48^{\circ}C$. The reaction rates of the two alkaline proteinases were constant to the reaction time to 80 min in the reaction mixture of $3.4{\mu}g/ml$ of enzyme concentration and $2\%$ casein solution. The Km values against casein substrate determined by the method of Lineweaver-Burk were $0.56\%$ for proteinase II and $0.30\%$ for proteinase II. The proteinases II and III were inactivated under the presence of $Ag^+,\;Hg^{2+},\;Ni{2+},\;Fe^{2+},\;and\;Cu^{2+}$, and but activated by $Mn^{2+}\;and\;Ca^{2+}$ and markedly inhibited by the soybean trypsin inhibitor and N-p-toluenesulfonyl-L-lysine chloromethyl ketone. Therefore, the proteinases II and III were found to be a group of serine proteases and assured to be trypsin-like proteinases.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제44권3호
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• pp.187-196
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• 2006

The mammalian trematode Paragonimus westermani is a typical digenetic parasite, which can cause paragonimiasis in humans. Host tissues and blood cells are important sources of nutrients for development, growth and reproduction of P. westermani. In this study, a cDNA clone encoding a 47 kDa hemoglobinase of P. westermani was characterized by sequencing analysis, and its localization was investigated immunohistochemically. The phylogenetic tree prepared based on the hemoglobinase gene showed high homology with hemoglobinases of Fasciola hepatica and Schistosoma spp. Moreover, recombinant P. westermani hemoglobinase degradaded human hemoglobin at acidic pH (from 3.0 to 5.5) and its activity was almost completely inhibited by E-64, a cysteine proteinase inhibitor. Immunohistochemical studies showed that P. westermani hemoglobinase was localized in the epithelium of the adult worm intestine implying that the protein has a specific function. These observations suggest that hemoglobinase may act as a digestive enzyme for acquisition of nutrients from host hemoglobin. Further investigations may provide insights into hemoglobin catabolism in P. westermani.

• 한국수산과학회지
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• 제19권6호
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• pp.537-546
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• 1986

고등어 유문수조직중에 분포하는 알칼리성단백질분해효소의 정제조건을 검토하고 염석, DEAE-Sephadex A-50 칼럼 크로마토그래피 및 Sephadex G-100 겔 여과에 의해 3종류의 알칼리성단백질분해효소의 분리${\cdot}$정제방법을 확립하였다. 유문수조직중에 분포하는 알칼리성단백질분해효소의 추출용매는 $1\%$ NaCl 용액이 가장 효과적이었다. 정제된 가칭 Enz, A, B 및 C의 각 알칼리성단백질분해효소는 전기영동적으로 균질함이 증명되었으며, 조효소에 비해 고유활성이 Enz. A는 34배, B는 53배 그리고 C는 37배로 각각 증가하였다. 각 효소의 수율은 조효소에 대해 $1.6\%,\;2.1\%$ 및 $1.5\%$였고, 총수율은 $5.2\%$였다.

• 미생물학회지
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• 제31권2호
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• pp.141-147
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• 1993

백색 부후균인 plaurotus ostreatus 의 4가지의 균주로부터 각각 10.2 kb 와 7.2 kb (NFFA 2), 두 종류의 10.2 kb (NFFA 4001) 11.2 kb (NFFA 4501), 10.2kb 와 11.2 kb(KFCC 11635) 크기의 미토콘드리아 플라스미드들을 분리해 내었다. NFFA 2 의 변종인 NFFA 2m1 과 NFFA 2m2 에서는 이들 플라스미드가 관찰되지 않았다. 분별 원심분리에 의해 얻은 미토콘드리아에서 핵산을 추출하여 agarose gel 에서 전기영동시키면 플라스미드가 관찰되지 않았으나 proteinase K 를 처리하고 핵산을 추출하여 전기영동한 결과 이들 플라스미드가 관찰되었는에, 이는 플라스미드상에 단백질인 결합되어 있음을 시사한다. Proteinase K 를 처리한 플라스미드 DNA 와 exonuclease 를 반응시킨 결과, 이들 플라스미드들은 5'말단에 단백질이 결합된 성형 이중가닥 DNA의 구조를 가진 것을 확인하였다. 각 플라스미드들의 상호관계를 조사하기 위하여 Southern hybridization 을 수행한 결과 최소 3가지 종류의 플라스미드들로 분류할 수 있었다. 이중 한 그룹 (group I) 은 모든 P. ostreatus 균주들에서 공통적으로 발견되었다. Pleurotus 속의 5가지 다른 종(P. cornucopiae, P. florida, P. pulmonarius, P. sajor-cuja, P. spodoleucus) 의 균주들로부터 미토콘드리아 플라스미드들을 분리하였다. 이들은 한균주당 1-4 개 까지의 플라스미드를 가지며, 플라스미드의 크기는 7.2 kb-14kb 범위에 있었다. P. ostreatus 의 NFFA 2 의 10.2 kb(group I) 플라스미드와 hybridization 을 수행한 결과 P. cornucopiae ASI 2011을 제외한 다른 모든 균주들이 유사한 염기서열의 플라스미드를 갖고 있음을 알았다.

• Applied Biological Chemistry
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• 제39권2호
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• pp.104-111
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• 1996

감자의 genomic DNA library로 부터 분리한 proteinase inhibitor II (pin2) 유전자들의 제한효소 지도를 작성 하였던바 이미 분리된 상처 유발 (wound-inducible)pin2K 유전자의 것과 상이성이 있는 pin2T를 분리하여 염기서열을 결정하였다. 두 유전자의 염기서열은 전체적으로 약 86%의 동일성을 보였으며 특히 promoter 부위의 염기서열은 pin2K 유전자의 전사개시 부위의 상대적인 위치인 -714까지 네부분의 결손(20 내지 60bp)을 제외하던 약 91%수준의동일성을 보였다. 분리한 유전자들의 promoter 부위를 표지 유전자인 CAT와 GUS 유전자에 연결 시킨후 담배에서의 발현을 추적하였던바, pin2K 유전자의 promoter에 의한 표지유전자의 발현은 상처에 의해 발현 되었으나 pin2T 유전자의 promoter에 의한 표지유전자의 발현은 상처 유무와 관계없이 낮은 수준으로 나타났다. 또한 pin2T 유전자의 Promoter 내의 결손은 핵 단백질의 promoter에의 결합에 영향을 주지 않았으며 상처 유발pin2K 유전자의 promoter 염기서열과 비교하였을때 pin2T 유전자의 promoter 부위내에 5'-AGTAAA-3'라는 특별한 염기부위가 자연적으로 제거된것을 알수 있었다. 또한 5'-AGTAAh-3'의 염기부위가 다른 상처 유발 유전자들에서는 흔히 발견되고, 다른 식물 유전자들의 Promoter에서는 쉽게 발견이 되지 않았다. 따라서 상처 유발 pin2K 유전자의 Promoter내에 상처 유발과 관련있는 특별한 염기부위가 자연적으로 결실되어 pin2T 유전자의 발현이 상처 유발성을 잃은것으로 짐작된다.

• 한국식품과학회지
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• 제34권2호
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• pp.311-318
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• 2002

Lactobacillus plantarum에 대해 항균활성을 지니는 유산균을 김치로부터 분리하였다. 이 균은 Leuconostoc mesenteroides으로 동정되었으며 Leuconostoc mesenteroides B7으로 명명하였다. Leuconostoc mesenteroides B7이 생산하는 박테리오신은(박테리오신 B7) pH 및 열 안정성이 뛰어나 pH $2.5{\sim}9.5$ 그리고 $4^{\circ}C{\sim}120^{\circ}C$ 열처리에서도 항균활성을 안정하게 유지하였다. 박테리오신 B7은 proteinase K, trypsin, ${\alpha}-chymotrypsin$, 그리고 protease 처리에 의해 항균활성이 실활되므로 peptide나 단백질로 이루진 구조임을 알 수 있었다. 정제된 박테리오신 B7은 Tricine-SDS-PAGE를 통하여 분자량이 약 3,500 dalton임을 확인하였다. Leuconostoc mesenteroides B7과 이에 감수성인 균주, Lb. plantarum KFRI 464 혹은 Lb. delbruekii KFRI 347와의 혼합배양에 의하여 박테리오신 B7 생산이 증가됨을 확인하였고, 이는 박테리오신 생산 유도물질이(inducing factor) 감수성균주내에 존재함을 시사한다. 감수성균주의 세포분획을 통하여 inducing factor는 감수성균주의 세포벽과 세포내에 존재함을 알았다. 이 inducing factor가 proteinase K처리로 박테리오신 유도활성을 상실함으로써 이는 단백질성물질임을 시사하였다.

• 동아시아식생활학회지
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• 제16권4호
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• pp.447-452
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• 2006

This study examined the growth and sensory characteristics of soybean sprout cultured at 25$\pm$1$^{\circ}C$ for 4 days with distilled water control and green tea extracted water (0.03% and 0.05%). The proximate composition of soybean sprout in the green-tea water was better than that of the control in ash, protein and fat, while the soybean sprout was especially higher in 0.05% green-tea water. The contents of vitamin C and $\beta$-carotene were higher in soybean sprout in green-tea water than the control. The total free amino acids composition of soybean sprout in green-tea water was better than that of the control, with the highest being obtained in soybean sprout in 0.03% green-tea water. Antioxidative activity was assayed by DPPH radical scavenging ability with spectrophotometer at 514 nm. The soybean sprout in green-tea water was higher than control. The amylase activity of the soybean sprout increased steadily during the first 4 days and that of the control was higher than soybean sprout in green-tea water. The proteinase of soybean sprout steadily increased during 4 day culture. Furthermore, the proteinase activity of soybean sprout in green-tea water was higher than that of the control up to 2 days. Whereas after 3 days, it was the highest in 0.03% green-tea water and then decreased remarkably in 0.05% green-tea water.