A mammalian DNA repair enzyme, UV endonuclease III which also functions as a ribosomal protein S3 (rpS3), was purified from mouse cells and characterized. UV endonuclease III was previously cloned and known to yield a peptide of 32 kDa upon expression in E. coli [Kim et al., (1995) J. Bioi. Chem. 270, 13620-13629]. However, biochemically purified UV endonuclease III, which has a sedimentation coefficient of 3.25, appears to have an additional peptide of 28 kDa. It appears that two bands were derived from one complex, judging from the comparison of the nuclease activity on the native and SDS-gel electrophoreses. UV endonuclease III becomes non-specific upon purification and this phenomenon is more significant in the case of pure fractions of the enzyme. Non-specific activity was not influenced by pH or any salt conditions.
Polygalacturonase (PG) produced by Botrytis cinerea in the culture broth containing citrus pectin as a carbon source was partially purified and characterized. PG was produced on a range of carbon sources such as starch, glycerol, cellobiose, and Na+-PAG with total activities of 34.8, 32.0, 29.2, 27.8 units, respectively. The specific activity was highest with 2316.7 units on Na+-PGA. Proteins of culture filtrate were concentrated with polyethylene glycol and acetone and applied to a hydroxyapatite column. Among three active fractions collected from the column, the reaction containing the highest PG activity was resolved by a Q-sepharose column. The active fraction from the Q-sepharose column was further purified by HPLC Mono Q column. The partially purified enzyme was analyzed by 10% sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis. Among a few protein bands revealed, the amount of the protein of which molecular weight estimated to be 43 kDa coincided with the PG activity. The partially purified PG had optimal temperatures between 35~55$^{\circ}C$ and pH between 4.5~5.5.
Kim, Jong-Eun;Jung, Sung-Keun;Lee, Sang-Jin;Lee, Ki-Won;Kim, Gye-Won;Lee, Hyong-Joo
Journal of Microbiology and Biotechnology
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v.18
no.8
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pp.1423-1426
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2008
Nuruk, which is a natural inoculator and source of amylolytic enzymes, is used in Korean traditional rice wine. A methanol extract of nuruk (NE) attenuated lipopolysaccharide (LPS)-induced nitrite and interleukin (IL)-6 in RAW 264.7 cells. Both the n-hexane and water fractions from NE (MEH and MW, respectively) inhibited the production of nitrite and IL-6 in RAW 264.7 cells. MEH and MW also inhibited the LPS-induced inducible nitric oxide synthase expression. Further, and MEH protected against the LPS-induced activation of p38 mitogen-activated protein kinase. Together, these results indicate that nuruk may contribute to the anti-inflammatory and cancer-preventive effects of Korean traditional rice wine.
Taramira (Eruca sativa) cake, an unconventional oil cake, replaced 25 and 50 per cent crude protein of mustard cake in the ration of crossbred calves in an experiment of 90 days duration. Total glucosinolate content of the three concentrate mixture was almost similar (18.19, 17.95 and $17.95{\mu}mol/g$ dry matter), however, glucouracin was the major glucosinolate of experimental diets. Similar dry matter Intake, nutrient digestibility (except those of fibre fractions) and nitrogen balances as well as similar serum $T_3$ and $T_4$ levels and growth rate in all the groups indicated that taramira cake can replace 50 per cent crude protein of mustard cake in the diet of crossbred calves.
The cytotoxicity of animal venoms (snakes, insects and marine animals) was measured against SNU-1 (stomach cancer cells) by dye uptake assay (MTT method). And also L-amino acid oxidase (AAO) activity of the venoms was compared. Among them, the venom from Ophiophagus hannah (king cobra) showed a strong AAO activity as well as a high potent cytotoxicity. Cytotoxic protein having a AAO was then partially purified by HPLC-GPC and two fractions (Fr. I and Fr. II) were collected. The $IC_{50}$ values of Fr. I and Fr. II were 0.19 ${\mu}g/ml$ and 1.36 ${\mu}g/ml$, respectively. The results suggested that the cytotoxicity of king cobra venom may be due to its AAO activity.
To study the immunomodulatory effect of aquapuncture with canine parvovirus killed vaccine, the vaccine was inoculated into the dogs twice with on 2-week interval. The 6 dogs in the experimental group were inoculated through the Jiao-Chao acupoint, and 5 dogs in the control group were done subcutaneously. The antibody titer was determined by the hemagglutination inhibition test. The HI titers of the experimental group showed significantly higher on days 21 and 28 than those of the control group. The biochemical test on serum total protein, protein fractions and the A/G ration showed a slightly increased in $\gamma$-globulin on days 21 and 28. The hematological findings on total leukocytes and differential counts showed no significance. It was thought that the aquapuncture of the canine parvovirus killed vaccine through the Jiao-Cho acupoint may stimulate the antibody production.
This study was conducted to purify and characterize a polysaccharide fraction from whole parts of Duchesnea indica (Andr.) Focke, which was previously reported to show an antitumor activity by us. The plant was extracted with 5% ethanol for 3 days in the room temperature. The extract was dialyzed by 5% ethanol, and then concentrated by extraction with $excess\;_N-butanol$, followed by gel filtration named Fr. a and b. Each was composed of gallic acid, hexose, pentose, uronic acid and protein, indicating that both fractions were tannic polysaccharide containing protein. Heat treatment of them yielded gallic acid less polysaccharides. They showed a colony stimulating factor activity.
It was previously reported that yeast elicitor transiently increased oleanolic acid and ursolic acid in Scutellaria baicalensis suspension cultures and also doubled phospholipase $A_2$ ($PLA_2$) activity. Thus, $PLA_2$ was purified from the soluble fractions of S. baicalensis suspension cultures and the characters of the purified $PLA_2$ were identified. The $PLA_2$ was purified about 160 times compared with the starting soluble-protein extract from S. baicalensis suspension culture cells. The purified protein showed a molecular mass of about 43 kDa by SDS-PAGE. The purified plant $PLA_2$ had a neutral pH optimum (pH 7.0) and required $Ca^{2+}$ for activity. The $PLA_2$ activity was inhibited by mammalian $PLA_2$ inhibitors such as 5,8,11,14-eicosatetraynoic acid(ETYA) and arachidonyl trifluoromethyl ketone ($AACOCF_3$).
The fractions of serum proteins, the levels of serum immunoglobulins and the positive rate of HBs Ag were investigated in Korean patients with Down's syndrome. Mean concentrations (g/dl) of serum protein, albumin, a1,-globulin fraction, a2-globulin fraction, $\beta$-globulin fraction and Y-globulin fraction were 7.80$\pm$1.44, 3.89$\pm$0.74, 0.26$\pm$0.09, 0.80$\pm$0. 18, 1.00토0.29 and 1.85$\pm$0.64, respectively. Mean concentrations(mg/dl) of IgG, IgA and IgM were 1,682.17$\pm$600.26, 247.39$\pm$180.86 and 170.87$\pm$79.90, respectively. The positive rate of HBs Ag was 21.74% These results revealed higher levels of Y-globulin fraction, IgG and positive rate of HBs Ag in patients with Down's syndrome than in normal population.
To screen biologically active components of the higher fungi of Korea, the carpophores of Auricularia polytricha, a well-known edible mushroom, were extracted with 0.14M NaCl solution. The extractive was successively fractionated by adding ammonium sulfate in various amounts, the respective precipitates being weparated by centrifugation, dialyzed and freeze-dried. When a dose of 60mg/kg of each was, i.p., injected into ICR mice, the fraction shich was precopitated at 20% (NH$_{4}$)$_{2}$SO$_{4}$ showed the highest toxicity, killing seven mice within two days. The fraction obtained at 40% (NH$_{4}$)$_{2}$SO$_{4}$ showed the second highest toxicity. The two fractions were named auratoxin I and II after the genus name. The symptoms of the intoxication were convulsion during the first 30 minutes after the injection, then sleeping within an hour, and tremor, lacrimation, nasal and ophthalmic bleeding, congestion and death in 24 hours. Particularly the spleen of the mice was fonud to be enlarged remarkably. The chemical analysis of the toxins showed that auratoxin I consisted of 4.4% protein and 84.5% polysaccharide and that auratoxin II 35.8% protein and 48.0% polysaccharide.
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