Semaphoring is a transmembrane receptor which participates in many cytokine-mediated signal pathways that are closely related to the angiogenesis, occurrence and development of carcinoma. The present study was designed to access the effect of mono-antibody (mAb) guided radioimmunotherapy (RIT) on skin carcinoma and investigate the potential mechanisms. Semaphoring mAb was acquired from mice (Balb/c), purified with rProtein A column; purity, concentration and activity were tested with SDS-PAGE and indirect ELISA; specificity and expression on the cutanuem carcinoma line and tissue were tested by Western blotting; morphology change was assessed by microscopy. MTT assay and colony inhibition tests were carried out to test the influence on the proliferation of tumor cells; Western blotting was also carried out for expression of apoptosis-associated (caspase-3, Bax, Bcl-2) and proliferation-related (PI3K, p-Akt, Akt, p-ERK1/2, ERK1/2) proteins and analyse the change in signal pathways (PI3K/Akt and MEK/ERK). The purity of purified semaphorin mAb was 96.5% and the titer is about $1{\times}10^6$. Western blotting showed semaphoring mAb to have specifically binding stripes with semaphoring b1b2 protein, B16F10, and A431 cells at 39KDa, 100KDa and 130KDa, respectively. Positive expression was detected both in cutanuem carcinoma line and tissue and it mostly located in cell membranes. MMT assay revealed dose-relate and time-relate inhibitory effect of semaphorin mAb on A431 and B16F10. Colony inhibition tests also showed dose-relate inhibitory effects. Western blotting demonstrated the expression of apoptosis and proliferation-related protein and changes in signal pathway. In conclusion, we demonstrated that semaphorin is highly expressed on the tumor cell-surfaces and RIT with semaphorin mAb has effect in i nhibiting proliferation and accelerating apoptosis of tumor cells.
Park, Bong-Joo;Cho, Myung-Haing;Kim, Kyeong-Ho;Lee, Sang-Kook;Lee, Chong-Soon;An, Gil-Hwan;Mar, Woong-Chon
Natural Product Sciences
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제5권3호
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pp.113-120
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1999
Nitric oxide (NO) is a free radical synthesized from L-arginine by nitric oxide synthase (NOS). It is believed that NO is an important mediator in numerous physiological and inflammatory responses. Particularly, a large amount of NO released from the inducible nitric oxide synthase (iNOS) is mostly associated with inflammatory processes. Overproduction of NO in these processes including sepsis and autoimmune diseases can have deleterious consequences and pathophysiologic relevance. Therefore, for the discovery of new inhibitory agents against iNOS activity, we have evaluated about 100 kinds of natural products after partition into three layers (n-hexane, ethyl acetate and aqueous) from 100% methanol extracts to study inhibitory effects on iNOS activity induced by lipopolysaccharide (LPS) in RAW264.7 cells culture system. As a positive control, curcumin, which is known as an anti-tumor promoter, anti-inflammatory agent as an iNOS inhibitor, was used and showed the dose-dependent inhibitory effect $(IC_{50},\;2.5\;{\mu}g/ml)$. Among tested fractions, the n-hexane fraction of Cimicifuga heracleifolia $(IC_{50}:\;9.65\;{\mu}g/ml)$, Forsythiae fructus $(IC_{50}:\;6.36\;{\mu}g/ml)$, Saposhnikovia divaricata $(IC_{50}:\;5.92\;{\mu}g/ml)$, and the ethyl acetate fraction of Chrysanthemum sibiricum $(IC_{50}:\;2.56\;{\mu}g/ml)$, Gastrodia elata $(IC_{50}:\;3.46\;{\mu}g/ml)$, and the aqueous fraction of Dianthus chinensis $(IC_{50}:\;6.73\;{\mu}g/ml)$, Euonymus alatus $(IC_{50}:\;6.78\;{\mu}g/ml)$, Mechania urticifoloria $(IC_{50}:\;8.01\;{\mu}g/ml)$ showed strong inhibitory activity against LPS-stimulated iNOS. Especially, the ethyl acetate fraction of Chrysanthemum sibiricum $(IC_{50}:\;2.56\;{\mu}g/ml)$, which exhibited the strongest inhibition against iNOS, was fractionated with silica-gel column chromatography. These subfractions exhibited dose-dependent inhibition against iNOS activity in the range of $2.59-5.6\;{\mu}g/ml$ except for fraction No. 3, 4, 5, 6, 8, 9, and 16. Our study shows that Chrysanthemum sibiricum has the strongest inhibitory effect against iNOS activity and has similar effect to curcumin. Therefore, further studies for the identification of active principles from Chrysanthemum sibiricum and investigation for the mechanism of the inhibition of iNOS by active principles will be performed.
국립기상과학원은 2010년 6월부터, 하향적외스펙트럼을 관측하는 고분해적외분광간섭계(FT-IR)인 Atmospheric Emitted Radiance Interferometer(AERI)를 안면도 기후변화감시센터에 설치하여 운영하고 있다. 고분해 적외 센서를 이용한 AERI는 위성 기반의 원격탐사 자료를 검증하는데 유효하다. 본 연구에서는 계절별 AERI 기준 스펙트럼을 선정 및 적용(Seasonal-Cloud data Filtering Method, S-CFM)하여 구름에 영향을 받은 관측 스펙트럼 자료 제거방법을 개선하였다. S-CFM을 적용하여 산출된 최하층 메탄농도는 한 개의 기준 스펙트럼을 사용(Cloud data Filtering Method, CFM)하여 산출된 최하층 메탄농도 및 지상관측 메탄농도와 비교하였으며, AERI 연직 메탄 총량을 산출하여 GOSAT 메탄 연직 총량을 통해 검증 및 분석하였다. S-CFM 방법을 적용하여 산출된 최하층 메탄농도는 CFM의 최하층 메탄농도보다 더 정확도가 높은 것으로 나타났으며, 지상관측 메탄농도의 연간 변화 패턴과 비슷한 결과를 보였다. 또한 GOSAT과 AERI의 연직 메탄 총량 비교에서도 비슷한 농도 분포를 보였으며, 매년 증가하는 패턴을 보였다. 뿐만 아니라 S-CFM을 적용함으로써 비교 가능한 자료의 개수가 증가하였다. 다만 여름철 AERI 스펙트럼을 통해 산출된 최하층 메탄농도 및 연직 총량 농도가 상당히 과대추정 되는 모습을 보이고 있기 때문에 기술적 보완이 필요한 것으로 나타났다.
아세설팜칼륨, 싸이클라메이트, 삭카린나트륨, 수크랄로스, 스테비오사이드, 아스파탐을 HPLC/MS/MS를 이용하여 동시 분석한 결과 각 감미료 별로 고유한 스펙트럼을 얻어 정량하여 머므름 시간은 2.26~9.96로 10분 이내로 분석이 가능하였다. 각각 감미료의 상관계수($R^2$)은 0.9986~0.9999로 양호한 직선상의 그래프를 얻을 수 있었고 각각의 감미료를 단계적으로 희석하여 분석한 결과 검출한계는 아세설팜칼륨, 싸이클라메이트 삭카린나트륨, 수크랄로스, 스테비오사이트, 및 아스파탐의 경우 0.02 mg/kg이었다. 시료에 대한 6종의 감미료에 대한 분석법의 회수율은 과자 87.4~106.9%, 캔디 99.8~114.7%로 전반적으로 좋은 회수율을 보여 어린이기호식품에서의 감미료 분석에 적용하였다.
Model melanoidin으로서 glucose-glycine, glucose-lysine, xylose-arginine melanoidin을 색도가 동일하게 되도록 조제하여 항산화효과 및 항산화효과와 관련된 특성을 살펴보았다. 실험에 사용한 melanoidin들은 대조군에 비해 강력한 항산화 효과를 나타내었으며 melanoidin들의 갈색도의 정도를 동일하게 하여도 당과 아미노산의 종류에 따라 항산화 효과가 다르게 나타나서 xylose-arginine melanoidin의 항산화 효과가 가장 큰 것으로 나타났다. Xylose-arginine melanoidin의 경우 DPPH에 의한 전자공여성도 실험에 사용한 세 model melanoidin중 가장 커서 xylose-arginine melanoidin의 항산화성과 전자공여성이 관계있음을 알 수 있었다. Melanoidin의 항산화 효과 관련 물질의 특성을 알기위하여 melanoidin을 Sephadex G-50에서 분리하여 그 특성을 조사한 결과 melanoidin의 종류에 따라 다른 분리 패턴을 나타내었다. 분획별 항산화효과를 비교한 결과 xylose-arginine melanoidin이 가장 강한 항산화효과를 나타내었고 다음이 glucose-lysine melanoidin이었으며 glucose-glycine melanoidin이 가장 낮은 항산화효과를 나타내어 당의 경우 glucose보다 xylose에서, 아미노산의 경우 glysine보다 lysine에서 항산화 효과가 큰 것을 알 수 있었다. 분획물의 특성 중 melanoidin의 항산화 효과가 큰 물질은 갈색도가 높으면서 ninhydrin 양성반응을 나타내고 환원성이 강한 특성을 나타내었다. Xylose-arginine melanoidin의 경우 fraction 50에서 65사이의 광범위한 영역에서, glucose-lysine melanoidin의 경우 fraction 65에서, glucose-glycine melanoidin의 경우 fraction 60에서 각각 강한 항산화 효과물질이 검출되었다. Xylose-arginine melanoidin의 경우 광범위한 갈색물질의 용출범위에서 환원작용을 나타내어 앞에서 model melanoidin 중 가장 강한 항산화 효과 및 DPPH에 의한 전자공여성을 나타낸 성질과 일치함을 알 수 있었다.
Kim, Hyo-Jin;Lee, Won-Jung;Park, Yun-Hee;Cho, Sung-Hee;Park, Sang-Won
Preventive Nutrition and Food Science
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제8권4호
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pp.356-364
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2003
A methanol extract from seeds of Paeonia lactiflora (Paeoniaceae, peony) was found to possess different antiproliferative activities against four different human cancer cell lines: Hela, MCF-7, HepG2 and HT-29. Furthermore, five different methanol (20, 40, 60, 80 and 100 % MeOH) fractions obtained by fractionation of the methanol extract of the seeds on a Diaion HP-20 column exhibited differential antiproliferative effects against the above four cancer cell lines. Among five fractions, the 60 % MeOH fraction showed relatively lower antiproliferative activity on MCF-7 estrogen-sensitive breast cancer cell than the other cancer cell lines. Systematic separation of 60% the MeOH fraction by silica gel and Sephadex LH-20 columns led to the isolation of four known stilbenes, trans-resveratrol (1), trans-(+)- $\varepsilon$ -viniferin (2), gnetin H (3) and suffruticosol B (4). The four stilbenes (1∼4) exerted differential biphasic effects on cell proliferation of MCF-7 cells in a similar manner as genistein, a soybean isoflavone used as a positive reference, in the concentration range from 1.0 to 200 $\mu$M. Three stilbenes (1 ∼ 3) weakly stimulated the proliferation of MCF -7 cells at doses below 10 JIM. However, strong antiproliferative effects on MCF-7 cell were exerted by extract 1 at a dose of 200 JIM, and by 2 and 3 at doses above 25 $\mu$M. In contrast, 4 inhibited the proliferation of MCF-7 cell at a dose below 25 $\mu$M, but stimulated cell proliferation at concentrations of 50 and 100 $\mu$M. All four stilbenes (1∼4) stimulated the proliferation of ROS 17/2.8 osteoblast-like cells in the range of 10$^{-10}$ ∼10$^{-1}$$\mu$M. Compound 1 exhibited especially potent proliferative activity, although its activity was weaker than that of genistein. Additionally, three resveratrol oligomers (2∼4) also exhibited concentration-dependently moderate proliferative activity, but less than that of 1. These results suggest that resveratrol, and its dimer and trimers from the seeds of Paeonia lactiflora may act as a phytoestrogen, but in a somewhat different manner from that of genistein.
한국 남해연안 및 서해남부연안은 겨울철 강한 북서 계절풍과 이에 동반된 냉기류 그리고 조석작용에 의해 수직혼합이 용이하며 이 혼합된 연안냉수는 그 형성 위치로부터 외해로 이동되어짐이 인공위성 열적외선 영상으로부터 쉽게 추적된다. 특히 이들 연안수들은 북서계절풍의 영향을 강하게 받아 서해남부연안수는 혹산도 부근에서 형성된 후 추자도 부근까지 남하하고 때때로 제주해협을 통과하여 남해로 유입된다. 남해 연안수는 주기 적인 북풍에 의하여 외해로 확장하는데, 확장형태에 따라 침강확장과 표류확장으로 구분할 수 있다. 침강확장은 남해연안수가 바람에 의하여 외해로 확장하는 동안 해수면에서 계속 냉각이 될 경우 밀도가 높아져 해저면으로 침강하면서 확장하는 경우이고, 냉각이 일어나지 않을 때는 표층에 떠서 외해로 확장된다. 이러한 확장형태에 따라 침강확장시는 그 연직적인 움직임이 난류수와 반시계방향의 혼합이 일어나고, 표류확장시는 시계방향의 혼합이 일어난다. 또한 남해연안수의 확장은 수온전선에도 영향을 미치는데, 침강확장시는 수온전선의 저층에서 급격한 수온변화가 나타나고 표류확장시는 표층에서 강한 변화가 나타난다. 화장형태에 따른 내부수온구조를 보면 침강확장시는 전층이 평균보다 낮게 나타나지만, 표류확장시는 표층에서만 평균보다 낮게 나타난다.
양파 껍질의 메탄올 추출물에 함유되어있는 플라보노이드류를 분리하고자 Sephadex LH-20 column chromatography를 한 결과, $F_1,\;F_2$ 두 개의 활성분획을 얻었다. $F_1$과 $F_2$ 분획의 자외선과 가시광선에서의 흡수 패턴을 측정하였다. $F_1$과 $F_2$ 분획의 band I과 band II는 전형적인 프라보놀의 피크 파장을 보였으며, $MeOH,\;NaOMe,\;AlCl_3,\;AlCl_3/HCl,\;NaOAc$와 $NaOAc/H_3BO_3$의 shift reagent를 이용한 흡수패턴을 측정한 결과, $F_1$ 분획은 3,5,7,3'-OH를 가지며 4' 위치에 glucose를 가지는 플라보놀로 확인이 되었다. $F_2$ 분획은 3(5),7,3',4'-OH를 가지는 플라보놀로 확인이 되었다. 두 분획의 분자량을 측정하고자 FAB mass를 이용한 결과, $F_1$ 분획의 경우 $m/z\;465\;(M+H)^+$로 quercetin monoglucoside에 해당되는 분자량을 보였으며, $F_2$ 분획은 $m/z\;303\;(M+H)^+$로 quercetin에 해당되는 분자량을 보였다. Quercetin 4'-glucoside와 quercetin으로 확인된 분획 $F_1$과 $F_2$에 의한 xanthine oxidase에 대한 저해기작은 비경쟁적과 무경쟁적 저해 형태가 서로 혼합되어 있는 형태이었다.
제안된 방법은 국제표준(IS)인 Entacapone-d10(EAD10)을 사용하여 체외에서 Entacapon(EA)의 정량화를 위한 간단하고, 감도가 좋고, 명확한 액체 크로마토그래피-직렬 질량 분석법(LC-ESI-MS/MS)이다. 크로마토그래피 분리는 Zorbax SB-C18에서 수행되었고, $2.1{\times}50\;mm$, $5\;{\mu}m$ 컬럼과 10 mM Ammonium formate (pH 3.0)로 구성된 이동상에서 수행되었다: 0.7 mL/min 유속의 아세토나이트릴(60:40 v/v)은 액체-액체 추출을 따른다. EA와 EAD10은 다중 반응 탐색법(MRM)에서 수소부가물을 가지고 상대적으로 포지티브 모드인 m/z $306.1{\rightarrow}233.1$과 $316.3{\rightarrow}233.0$에서 수소부과물을 가지고 측정되었다. 그 방법은 상관계수($r^2$) 0.993 이상을 갖는 1.00 - 2000.00 ng/mL의 선형 농도 범위 이상으로 입증되었다. 하루 중과 하루 이내에 3.60에서 7.30과 4.20에서 5.50% 이내의 정밀성과 97.30에서 104.20과 98.30에서 105.80% 이내의 정확도는 EA를 위해 입증되었다. 이러한 방법은 건강한 인도인 자원자들의 생물학적 동등성 연구에서 성공적으로 적용되었다.
LC-MS/MS를 사용함으로써 인체 혈장에서 ginsenoside Rb1의 분석법을 개발하고 검증하였다. 유속 0.9 mL/min에 이동상 0.1% formic acid가 첨가된 water와 methanol을 사용하여 기울기 용리 조건으로 설정하였으며 사용한 분석 칼럼은 C 18($4.6mm{\times}150mm$, particle size 5 ${\mu}m$)을 사용하여 분리하였다. MRM(multiple reaction monitoring) 방법의 전기 분무 이온화 이온 분석기로 모니터링 하여 분석하였다. 인체 혈장 샘플은 액체-액체 추출방법에 의해 acetone과 water가 섞인 용액으로 추출하였다. 이 분석의 검량선 범위는 10~500 ng/mL이며 상관계수는 0.9995를 나타냈다. 일내, 일간의 정밀성 농도범위는 상관계수 5.8% 그리고 정확성은 96.0~104.6%로 나타났다. 이 LC-MS/MS를 이용한 인체 혈장의 ginsenoside Rb1의 연구가 약동학 연구에 적용할 수 있을 거라 생각한다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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