• 한국수정란이식학회:학술대회논문집
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• 한국수정란이식학회 2005년도 제5회 발생공학 국제심포지엄 및 학술대회
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• pp.101-101
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• 2005

• Reproductive and Developmental Biology
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• 제34권4호
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• pp.275-281
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• 2010

The aim of this study was to investigate what protein(s) of porcine epididymal fluid (pEF) are able to enhance the nuclear maturation of porcine germinal vesicle (GV) oocytes in vitro. Proteins of pEF were fractionated by affinity, ion exchange, and gel filtration chromatography. Porcine cumulus-oocytes complexes (COC) from follicles were cultured in tissue culture medium (TCM 199) containing various fractions obtained by chromatography. Porcine COCs were also cultured in TCM 199 containing various meiosis inhibitors and pEF. After 24 or 48 h culture, oocytes were examined for evidence of GV breakdown, metaphase I, anaphase-telophase I, and metaphase II. When porcine COCs were cultured in the medium with meiosis inhibitor such as, dibutyryl cAMP (dbcAMP) and forskolin (Fo), more than 80% of oocytes were unable to resume meiosis. However, porcine COCs supplemented with pEF were able to overcome the inhibitory effect of dbcAMP and Fo. Maturation rate of oocytes was significantly (p<0.05) increased in the media supplemented with cationic protein(s) during in vitro maturation than in those with anionic protein(s) (44.1% vs 20.0%). When oocytes were cultured in the TCM 199 with fractions obtained by gel filtration, the maturation rate of oocytes was significantly (p<0.05) higher in fraction 11 containing 18 kDa than other fractions. The present study suggests that 1) dbcAMP and Fo prevent the spontaneous maturation of oocyte after isolation from follicles, and that pEF contain a substance(s) that improves meiosis resumption in vitro of porcine COCs, 2) cationic 18 kDa protein(s) are responsible for promotion of Mil stage.

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• 제34권2호
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• pp.95-106
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• 2007

목 적: 본 연구진은 선행연구를 통하여 생쥐의 미성숙 난자와 성숙 난자 사이에 차이 나게 발현하는 유전자(DEGs)의 목록을 보유하고 있는데, 그 중에서 pentose phosphate pathway (PPP)에 필수적 효소인 Ribose 5-phosphate isomerase A (Rpia)를 선택하여 본 연구를 수행하였다. 난자 성숙 과정에 관련된 Rpia의 기능을 알아보기 위한 기초연구로서 생쥐와 돼지의 난소에서 Rpia의 발현을 비교분석 하였다. 연구방법: 생쥐의 각 조직에서 11개의 MII-selective DEGs의 발현을 RT-PCR방법으로 확인하여 난소에서 강하게 발현하는 4개의 유전자를 선택하였고, 다시 이들 4개 유전자 중 난자에서 높게 발현하는 Rpia를 선택하여 생쥐 및 돼지의 난자, 난구세포, 과립세포에서의 발현을 비교분석 하였다. 돼지 Rpia 염기서열은 밝혀져 있지 않아 EST clustering 기법을 통해 동정하였다. 결 과: EST clustering 기법으로 찾아낸 돼지 Rpia 염기서열은 GenBank에 등록하였고 (Accession Number EF213106), 이를 근거로 primer를 작성하여 RT-PCR을 수행하였다. Rpia 유전자는 생쥐에서는 난자 특이적으로 발현하는 반면 돼지에서는 난자, 난구세포, 과립세포에서 모두 발현하는 차이점을 발견하였다. 결 론: 본 연구는 생쥐와 돼지의 난소에서 Rpia유전자 동정에 대한 첫 보고로서, 본 연구결과로부터 생쥐와 돼지의 COCs는 서로 다른 경로로 포도당의 대사가 일어나는 것을 알 수 있었다. 따라서 이와 같은 차이점이 두 종의 난자를 체외 배양할 때 나타나는 난자 성숙률의 차이를 가져오는 기전 중의 하나가 아닐까 추측된다. 난자 성숙을 조절하는 기전을 연구함과 동시에 체외에서 난자 성숙이 어려운 종의 최적의 IVM (in vitro maturation)조건을 찾기 위해서는 앞으로 난자와 주변세포의 포도당 대사과정에 미치는 Rpia의 기능에 대한 후속연구가 필요할 것으로 사료된다.

• 한국수정란이식학회지
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• 제9권3호
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• pp.249-254
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• 1994

This study was undertaken to investigate effects of granulosa cells on mejotic maturation of porcine oocytes in vitro. The results obtained in this study were summarized as follows : The germinal vesicle breakdown(GVBD) rates were 91.5, 93.3 and 96.6%, respectively, when the cumulus oocy:e cornplexes(COC) in the TCM-199 medium with sodium bicarbonate, Na pyruvate, penicillin G, streptomycin sulfate and 10% FCS were cultured in the condition of FSH(0.02 Au/ml), LH(10 $\mu$g/ml) and FSH + LH added. And when the COC were co-cultured with granulosa cell (5$\times$ 106 cells /ml) in the condition of FSH, LH and FSH + LH added, GVBD rates were 94.3, 92.9 and 98.9%, respectively. However, when the COC were cultured in the condition of hormone free and co-cultured with granulosa cells in the condition of hormone free, the GVBD rates were 40.4 and 86.3%, respectively. The GVBD rates were 41.0, 62.7, 84.6, 88.1 and 93.6%, respectively, when the COC were co-cultured with granulosa cells that the concentrations are 0 cells /ml, 1 $\times$ 106 cells /ml, 5:: 106 cells /ml, 1$\times$ 107 cells /ml and 5$\times$ 107 cells /ml.

• 한국수정란이식학회지
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• 제28권2호
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• pp.127-132
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• 2013

The objective of this study was to examine the effect of in vitro maturation (IVM) medium, cytochalasin B (CB) treatment during intracytoplasmic sperm injection (ICSI), and electric activation on in vitro development ICSI-derived embryos in pigs. Immature pig oocytes were matured in vitro in medium 199 (M199) or porcine zygote medium (PZM)-3 that were supplemented with porcine follicular fluid, cysteine, pyruvate, EGF, insulin, and hormones for the first 22 h and then further cultured in hormone-free medium for an additional 21~22 h. ICSI embryos were produced by injecting single sperm directly into the cytoplasm of IVM oocytes. The oocytes matured in PZM-3 with 61.6 mM NaCl (low-NaCl PZM-3) tended to decrease (0.05

• 한국동물번식학회:학술대회논문집
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• 한국동물번식학회 2002년도 춘계학술발표대회 발표논문초록집
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• pp.70-70
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• 2002

Sphingosine-1-phosphate(S1P) is one of the sphingolipid metabolites which affect a variety of cellular processes including the proliferation, differentiation, growth, survival, migration and gene expression. The present study was undertaken to investigate the effect of SIP on nuclear maturation of porcine oocytes. In vitro maturation frequency of porcine oocytes were compared in three different media; group Ⅰ: NCSU23＋0.1% PVA, group Ⅱ: NCSU23＋10% PFF(porcine follicular fluid), and group Ⅲ: NCSU23＋10% PFF＋10 ng/㎖ EGF＋2.5 mM β-mercaptoethanol. Each group containing 0.1 ㎎/㎖ cysteine was divided into 4 sub-groups of SIP concentration(0, 50, 500 and 5000nM). Porcine oocytes were incubated in each maturation medium supplemented with hormones(10 IU/㎖ PMSG and 10 IU/㎖ hCG) for 22h and then further cultured in the same medium without the hormones for 22h. After completion of in vitro maturation, the oocytes were fixed and stained to examine nuclear maturation by using a rapid stain method. In the group Ⅰ, the proportions of metaphase Ⅱ stage among oocytes cultured in 0nM(control), 50 nM, 500nM and 5000nM S1P were 45.5%, 66.7%, 56.6% and 48.7%, respectively. (omitted)

• 한국동물생명공학회지
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• 제37권2호
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• pp.96-105
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• 2022

The ovary undergoes substantial physiological changes along with estrus phase to mediate negative/positive feedback to the upstream reproductive tissues and to play a role in producing a fertilizable oocyte in the developing follicles. However, the disorder of estrus cycle in female can lead to diseases, such as cystic ovary which is directly associated with decline of overall reproductive performance. In gene expression studies of ovaries, quantitative reverse transcription polymerase chain reaction (qPCR) assay has been widely applied. During this assay, although normalization of target genes against reference genes (RGs) has been indispensably conducted, the expression of RGs is also variable in each experimental condition which can result in false conclusion. Because the understanding for stable RG in porcine ovaries was still limited, we attempted to assess the stability of RGs from the pool of ten commonly used RGs (18S, B2M, PPIA, RPL4, SDHA, ACTB, GAPDH, HPRT1, YWHAZ, and TBP) in the porcine ovaries under different estrus phase (follicular and luteal phase) and cystic condition, using stable RG-finding programs (geNorm, Normfinder, and BestKeeper). The significant (p < 0.01) differences in Ct values of RGs in the porcine ovaries under different conditions were identified. In assessing the stability of RGs, three programs comprehensively agreed that TBP and YWHAZ were suitable RGs to study porcine ovaries under different conditions but ACTB and GAPDH were inappropriate RGs in this experimental condition. We hope that these results contribute to plan the experiment design in the field of reproductive physiology in pigs as reference data.

• 한국수정란이식학회지
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• 제16권3호
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• pp.173-182
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• 2001

본 연구는 돼지 난포란의 체외성숙배양액에 superoxide dismutase(SOD)를 첨가배양하여 체외성숙과 수성이후 배발달에 미치는 영향과 산소농도 및 SOD가 체외생산된 돼지초기수정란치 배발달에 미치는 영향을 규명하고자 실시하였다. 본 연구에서 얻어진 결과를 요약하면 다음과 같다. 1. 돼지 난포란을 체외성숙배양액인 NCSU-23에 SOD를 각각 0, 100,500 및 1,000uni1s/m1 첨가하여 성숙시킨 다음, 체외수정을 실시한 결과, 핵성숙률, 정자침입율, 다정자침입률 및 평균침입정자수는 처리구와 대조구간 유의적(P<0.05)인 차이가 인정되지 않았고, 웅성전핵형성률은 처리구(90.9∼81.2%)보다 오히려 대조구(95.0%)가 유의적으로 높은 결과를 나타냈다(P<0.05). 2. 체외수정 후, 배발달배양액인 NCSU-23에 7일 동안 배양한 결과, 배반포형성률과 총세포수는 처리구가 대조구보다 유의적(P>0.05) 으고 낮은 결과를 나타냈다. 3. 배발달배양액인 NCSU-23에 SOD를 각각 0, 100, 500 및 1,000uni1s/m1을 첨가하고 5% 및 20% 산소조건하에서 7일동안 배발달을 유기한 결과, 배양 7일째 산소조건에 따른 처리구간 배반포형성률 및 총세포수는 유의차가 없었으며, SOD농도별 배반포형성률은 100 units/ml 처리구에서 0, 500 및 1,000uni1s/m1 처리구 보다 유의적으로 높은 배반포형성률을 나타냈으나, 총세포수에서는 처리구(27.6∼37.3개)가 대조구(45.6개)보다 유의적(P<0.05) 로 낮은 결과를 나타내었다. 따라서 NCSU-23배양액에 SOD의 첨가는 돼지난포란의 체외성숙과 초기배발달에 영향을 미치지 않는 것으로 조사되었으며, 5% 및 20% 산소농도에 따른 영향도 없는 것으로 사료된다.

• 한국가축번식학회지
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• 제27권2호
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• pp.115-123
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• 2003

본 연구는 돼지난포란의 체외배양액에 황화합물인 Catalase 첨가 및 저분압산소조건 하에서 첨가배양함으로서 돼지난포란의 체외성숙과 체외배발달에 미치는 영향을 구명하고자 실시하였다. 본 연구에서 얻어진 결과를 요약하면 다음과 같다. 1. 돼지난포란을 체외성숙배양액인 0.9mM cy-steine이 함유된 NCSU-23 배양액에 CAT를 각각 0, 100, 500 및 1000uni1s/m1 첨가하여 체외성숙 및 수정을 실시한 결과, 모든 평가요소에서 처리구가 대조구에 비하여 유의적으로 낮은 결과를 나타내어 체외수정에 좋지 않은 영향을 미치는 것으로 판단된다(P>0.05). 2. 체외수정을 실시한 후, 배발달배양액인 NCSU-23에 7일 동안 배양한 결과, 배반포형성률과 총세포수에 있어서 처리구가 대조구에 비하여 유의적으로 낮은 결과를 나타내어 체외성숙시 CAT 첨가배양은 배발달에 좋지 않은 것으로 판단된 다(P>0.05). 3. 배발달배양액인 NCSU-23에 CAT를 각각 0, 100, 500 및 1000units/m1을 첨가하고 5 및 20% 산소농도하에서 7일간 배양을 실시한 결과, 산소농도에 따른 차이는 인정되지 않았으며, CAT 첨가에 따른 배반포형성률과 총세포수에 있어서도 처리구가 대조구보다 유의적으로 낮은 결과를 나타냈다(P>0.05). 결론적으로 돼지난포란을 이용하여 체외수정란을 생산할 때, NCSU-23 배양액에 catalase의 첨가 및 산소조건은 영향을 미치지 않는 것으로 조사되었다.

• Reproductive and Developmental Biology
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• 제28권2호
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• pp.113-117
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• 2004

본 연구는 돼지 난포란을 이용하여 생산된 1-세포기의 체외수정란을 NCSU-23, PZM-3 및 PZM-4의 세 가지 배양액과 서로 다른 산소농도를 부여하여 돼지 체외수정란의 적합한 체외배양조건을 구명하고자 실시하였다. 돼지 난포란의 체외성숙은 BSA가 미첨가 된 NCSU-23 배앙액에 10% pFF, 0.9 mM crysteine, 25 $\mu/ml \beta$-mercaptoethanol 및 10 ng/$\mu/ml$ epidermal growth factor와 호르몬(10 IU/$ml$ PMSG, hCG)을 첨가하여 20∼22시간과 추가로 호르몬을 제거한 배양액에 20∼22시간을 배양하여 성숙을 유기하였고, 5∼6시간 동안 돼지 액상정액과 공배양함으로써 체외수정을 유기하였다. 체외수정 5∼6시간후 각각 5% 및 20%의 산소조건하의 NCSU-23, PZM-3 및 PZM4 배양액에서 배발달을 유기하였다. 돼지체외수정란을 체외배양하였을 때, 배발달 48시간에 처리구간 난할율에는 차이가 없었으나, 배양 7일째 배반포형성률은 5% 산소조건의 PZM-3 배양액에서 가장 높게 나타났다(19.9 $\pm$ 2.4 vs. 11.1$\pm$2.0 to 16.0$\pm$2.5%, P<0.05). 그리고, 총세포수에 있어서 5%의 산소조건 하에서 배양하는 것이 20% 산소조건보다 유의적(P<0.05)으로 높았으나, 배양액간 차이는 인정되지 않았다. 따라서, 체외생산된 돼지초기수정란의 체외배발달은 5% 산소조건하의 PZM-3 배양액에서 배양하는 것이 좋은 것으로 나타났다.