냉동보존이 진주조개(Pincata fucata martensii) 유생의 형태 및 구조에 미치는 영향을 알아보기 위하여 냉동전후 D형 및 각정기 유생을 광학 및 전자현미경으로 조사하였다. 동해방지제는 0.2 M sucrose를 첨가한 2.0 M $Me_2SO$를 사용하였다. 냉동후 유생은 일부 패각이 손상되긴 했지만 hinge와 prodissoconch가 뚜렷하게 나타났으며, 소포체, 지질 과립, 미토콘드리아, 핵 등을 포함한 세포내 소기관들이 고르게 분포되어 있었다. 또한, 섬모가 규칙적으로 배열되어 있었고, 섬모 아래 미토콘드리아와 지질과립이 위치해 있는 것이 관찰되었으나, 일부 해동된 유생에서 섬모의 불규칙적인 배열과 섬모환이 둥글게 뭉쳐져 있는 모습이 관찰되었다. 이러한 결과는 진주조개의 D형 유생과 각정기 유생이 냉동에 쉽게 영향을 받을 수 있다는 것을 보여준다. 따라서 냉동보존 시 세포의 손상을 감소시킬 수 있는 연구가 이루어져야 할 것으로 사료된다.
우리나라에서 진주양식의 대상패류인 진주조개 (Pinctada fucata martensii) 담륜자를 냉동보존하기 위하여 4가지 동해방지제를 사용하여 냉동실험을 실시하고, 적합한 동해방지제를 찾고자 하였다. 동해방지제인 dimethyl sulfoxide (DMSO), ethylene glycol, glycerol과 1, 2-propanediol을 희석액인 0.2 M sucrose에 각각 0.01, 0.1, 1.0과 2.0 M이 되도록 혼합한 다음, 10분간 평형상태를 유지한 후 냉동하였다. 냉동후 해동시킨 담륜자는 모든 동해방지제에서 농도가 증가할수록 생존율이 높아졌으나, 일부 세포내 함유물이 세포외로 유출되어 손상을 입은 개체도 보였다. 진주조개의 담륜자 냉동보존에 적합한 동해방지제는 1.0∼2.0 M의 DMSO와 ethylene gly-col로서 해동후 생존율이 82.8∼97.4%로 가장 높았다.
This study was conducted to investigate cryopreservation of pearl oyster, Pinctada fucata martensii larvae. Four cooling rates (-0.25, -0.5, -0.75 and -1.0$^{\circ}C$/min.) were used to examine a proper cooling rate during cryopreservation of trochophores before seeding temperature (-12$^{\circ}C$). Seven developmental stages (early and late trochophores, early and late D-shaped larvae and early, middle and late umbo stage larvae) and different sugars (fructose, glucose and sucrose) were used to investigate optimal larval stage and effective sugar in cryopreservation of larvae. The survival rates of frozen-thawed trochophores increased at cooling rate of -1.0$^{\circ}C$/min. As larval developing, survival rate of frozen-thawed larvae increased, except umbo stage larvae, and especially late D-shaped larvae highly survived as 91%. Addition of sugar revealed positive effect on cryopreservation in this experiment and 0.2 M glucose and sucrose mixed with 2.0 M dimethyl sulfoxide significantly enhanced survival rate of larvae (P<0.05). The results of our study indicate that desirable cooling rate, developmental stages of larvae and effective sugar far cryopreservation of pearl oyster, P. fucata martensii larvae are -1$^{\circ}C$/min, late D-shaped larvae and 0.2 M glucose and sucrose, respectively.
진주조개(Pinctada fucata martensii)는 일본의 남부지역에만 분포하는 종으로 양질의 진주를 생산하는 주된 양식 대상종이다. 우리나라에서는 1960년대 일본으로부터 이식하여 양식하고 있으나, 자연채묘에 의한 종묘 수급에 어려움을 겪고 있다. 이러한 어려움을 해결하기 위해서는 인공 종묘생산이 이루어져야 하며, 이의 확립을 위해서는 건강하고 우량형질을 지닌 어미와 함께 원활한 유생의 공급이 필요하다. 그 한가지 방법으로서 발생배의 대량 냉동보존을 들 수 있는데, 만일 진주조개 배우자의 냉동보존 기술이 확립된다면, 연중 인공 종묘생산과 선발육종이 가능해지고 우량종의 유전자를 보존할 수 있게 된다. (중략)
조개류 유생의 동해방지제 독성에 대한 내성을 평가하기 위해 진주조개, Pinctada fucata martensii와 참굴, Crassostrea gigas의 담륜자를 4종류의 동해방지제에 침지하여 생존율을 조사하였다. 실험에 사용된 동해방지제는 각각 0.01$\~$2.0 M의 DMSO, ethylene glycol, glycerol 과 1,2-propanediol이었으며, 침지시간은 5$\~$20분으로 설정하였다. 모든 동해방지제에 진주조개와 참굴 담륜자를 침지하였을 때, 농도가 낮을수록 침지시간이 짧을수록 생존율이 높아지는 경향을 보였으며, 동해방지제의 종류에 따라 담륜자의 생존율이 다르게 나타났다. DMSO와 ethylene glycol에서는 참굴 담륜자의 생존율이, glycerol과 1,2-propanediol에서는 진주조개 담륜자의 생존율이 상대적으로 높게 나타났다. 그러나 참굴에서는 4종류의 동해방지제에 0.2 M sucrose를 첨가하였을 때 생존율이 유의하게 높아졌다.
With the aim of developing and indoor overwintering technique for Pearl oyster, Pinctada fucata martensii, the metabolic rates of young oysters (52.4-83.0 mm in shell length) were measured for 2 weeks at water temperatures of 8, 10, 12, and $14^{\circ}C$. The filtration rate (FR) ranged 0 to $4.84\;L\;h^{-1}gDW^{-1}$ (mean, $0.02{\pm}0.06 $ to $3.12{\pm}1.45$), with significant changes observed over thme except for the case of a water temperature of $14^{\circ}C$. Respiration rate (R) ranged from 0 to $2.370\;mgO2\;h^{-1}gDW^{-1}$ (mean, 0 to $1.77{\pm}0.37$), with significant respiratory disorders observed at temperatures below $12^{\circ}C$; in contrast, the rate increased on the $14^th$ day of the experiment in the case of a temperature of 14$^{\circ}C$. No significant difference was observed among the different water temperatures in terms of excretion rate (E) or absorption efficiency (Abs.eff), except for a significant decrease in aerobic metabolism in the case of water temperature of $8^{\circ}C$. The estimated scope for growth (SFG) ranged from -9.1 to $126.9\;J\;h^{-1}gDW^{-1}$ (mean. $-4.1{\pm}2.6$ to $82.85{\pm}42.6$). A significant energy Joss was found at $8^{\circ}C$, with negative SFG observed throughout the experiment and a gradual energy decrease observed over time at water temperatures of $10^{\circ}C$ and 120C. However. SFG remained positive throughout the experiment in the case of $14^{\circ}C$. The estimated minimum energy requirement, assessed from energy expenditure, is $8.00-34.24\;J\;h^{-1}gDW^{-1}$ (mean, $17.67{\pm}6.17$). In conclusion, the lowest temperature suitable for indoor overwintering is above $14^{\circ}C$.
진주조개와 참굴의 성숙한 모패를 이용하여 인위적으로 산란유발한 다음 수온별로 난발생 실험을 하였다. 진주조개와 참굴의 난발생은 수온이 높을수록 발생단계별 소요 시간이 짧아지는 경향을 보였으며, 적정 발생수온은 각각 $20{\~}25^{\circ}C$와 $15{\~}25^{\circ}C$였으며, 진주조개에서 초기 D형 유생에 이른 시간은 $20^{\circ}C$와 $25^{\circ}C$에서 각각 41.7, 27.5시간, 참굴에서는 $15^{\circ}C,\;20^{\circ}C,\;25^{\circ}C$에서 각각 35.3, 26.3, 17.6시간이 소요되었다. 수온 ($WT: ^{\circ}C$)과 발생 단계별 소요 시간 (h: hour)의 관계식은 다음과 같다. 진주조개-8 세포기. $$1/h=0.0463WT-0.6945 (r^2=0.9702)$$ 상 실 기. $$1/h=0.0196WT-0.2184 (r^2=0.8118)$$ 담 륜 자: $$1/h=0.0076WT-0.0802 (r^2=0.8756)$$ D형 유생: $$1/h=0.0031WT-0.0380 (r^2=0.9075)$$ 참 굴-8 세포기. $$1/h=0.0210WT-0.1123 (r^2=0.9862)$$ 상 실 기.$$1/h=0.0143WT-0.1077 (r^2=0.9833)$$ 담 륜 자: $$1/h=0.0052WT-0.0218 (r^2=0.9857)$$ D형 유생: $$1/h=0.0029WT-0.0170 (r^2=0.9689)$$ 이들 관계식을 기초로 하여 진주조개와 참굴의 초기 발생에 있어서 난발생이 정지하는 생물학적 영도의 평균값을 구한 결과, 진주조개 $12.3^{\circ}C$, 참굴 $5.7^{\circ}C$로 산정되었다.
As a part of the investigation for utilizing pearl oyster by-products, a rapid salt-fermented pearl oyster using commercial enzyme was prepared and also examined on the characteristics. The salt-fermented pearl oyster prepared by optimal condition, which was prepared by mixing of minced pearl oyster, 15% salt, and 1% $Protamex^\circledR$ and fermented for 4 weeks, was superior in hydrolysis degree (28.7%) and ACE inhibitory activity (92.6%) to salt-fermented pearl oyster prepared by other conditions, such as the use of whole tissue, different enzymes $(Alcalase^\circledR,\;Neutrase^\circledR\;and\;Flavourzyme^\circledR)$, different salt concentrations (20 and 25%), and different fermentation periods (2, 6 and 8 weeks). There were, however, some shortcomings with this product. It showed a dark green color and an unfavorable bitter taste. These shortcomings were improved by the addition of seasoning paste. The calcium and phosphorus contents of the seasoned salt-fermented pearl oyster were 64.2 mg/100 g and 71.6 mg/100 g, respectively, and the calcium content based on phosphorus was a good ratio for absorbing calcium. The total amino acid content of the seasoned and salt-fermented pearl oyster was 7,054 mg/100 g and the major amino acids ware aspartic acid (555.1 mg/100 g), glutamic acid (1,131.2 mg/100 g), alanine (658.2 mg/100 g), and lysine (695.5 mg/100 g). The seasoned salt-fermented pearl oyster, along with angiotensin I converting enzyme (ACE) inhibitory activity (98.3%), also showed a recognizable level (87.5%) of anti-oxidative activity.
Protein, lipid classes, and fatty acid composition, including n-3 highly unsaturated fatty acids (HUFAs), were analyzed in the soft parts, which we differentiated as the adductor muscles and 'other portions,' from the cultured pearl oyster after the pearl was harvested and before the nucleus was grafted to evaluate the nutritional qualities of the soft parts. Total lipid content was higher in the other portions of the soft parts ($1.25-1.26\%$) than in the adductor muscles ($0.580.65\%$) in both pearl oyster samples, whereas protein content was higher in the latter ($15.518.7\%$) than in the former ($11.2-13.9\%$; P<0.05). The percentage of total lipids (TLs) consisting of phospholipids (PLs) was higher in the adductor muscles ($60.4-68.3\%$) than in the other portions ($40.6-47.0\%$), but the percentage of nonpolar lipids (NLs) was higher in the other portions of the soft parts. The prominent lipid classes were free sterol (FS) and triglyceride (TG) in the NLs and phosphatidylcholine and phosphatidylethanolamine in the PLs. The adductor muscles contained high levels of FS and all PL classes, while the other portions contained high levels of all NL classes, especially TG (but not FS; P<0.05). The prominent fatty acids were 22:6n-3 ($17.2-24.9\%$), 16:0 ($8.35-15.8\%$), 20:5n-3 ($7.95-14.9\%$), 18:0 dimethyl acetal (DMA, $4.79-13.5\%$), 18:0 ($4.50-6.16\%$), and 20:4n-6 ($4.36-5.43\%$). The percentages of 22:6n-3, 20:4n-6, and 18:0 DMA were higher in the adductor muscles than in the other portions of both pearl oyster samples, while those of 20:5n-3 and 16:0 were higher in the other portions (P<0.05). The levels of these food components were similar to those of other bivalves or were higher, especially the protein content, indicating that the soft parts of pearl oysters, which are currently wasted, have food value.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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