Vibrio cholerae균은 자연적으로 외부 유전자를 받아들이는 능력이 있으므로, 종간 수평적 유전자 전달 작용(LGT)을 받을 것으로 예상된다. 본 연구는 인체에 질병을 일으키는 3종의 비브리오균 사이에서 일어나는 LGT 현상의 정량적 측면들을 분석하였다. V. cholerae N16961, V. parahaemolyticus RIMD2210633, V. vulnificus CMCP6, Escherichia coli K12 substrain MG1655의 유전체 염기서열을 분석하여 4개의 유전체에 모두 존재하는 단백질 발현 유전자들의 4개 일조를 결정하였다. 각 조의 4개 유전자의 계통수를 작성하는 분석을 통하여, 다른 조들 간의 계통성의 일치성과 불일치성을 결정하고, 수직적 계통성과 수평적 계통성을 구분하였다. 약 70%의 조에서 계통수가 확정될 수 있었으며, 그 중 75%는 서로 일치하는 계통성을 보였고, 25%는 LGT 계통수를 보였다. 이 결과에 따르면, 비브리오균의 LGT는 다른 세균 분류균의 속보다는 과단위에서 발생하는 빈도의 LGT계통수를 보였다. 염색체별로 관찰하였을 때, 유전자 제공자별로 LGT가 집중되는 현상이 일부 관찰되었고, V. cholerae 균주의 작은 염색체에서는 염색체의 약 절반 길이에 해당하는 부분에서 제공자별 LGT 위치들이 집중되는 현상을 보였다. 이런 결과는 유전자 제공자에 따라 선택성이 반복적으로 작용하거나, 대규모의 LGT가 있다는 가설을 수립하게 하였으며, 유전자 제공자별로 LGT 유전형질이 선택성을 띄게 되는 원인과 그 현상이 비브리오균의 진화에 미치는 영향에 대한 연구의 필요성을 제시하였다.
본 연구에서는 Vibrio harveyi의 주요 병원성 인자로 알려져 있는 ECPs를 분리하는 적정 조건을 제시하고자 하였다. 5 개의 분리균주 (FF8, FF10, FR1, FR2 and FT1 strain)와 2 개의 참조균주 (ATCC 35084 및 ATCC 14126)의 ECPs를 다양한 조건에서 분리해 본 결과, 1.5% NaCl 첨가 TSA 배지에서 25℃, 24 시간 배양하는 것이 가장 좋으며, ECPs 분리시의 buffer system은 pH 8.0이 적정한 것으로 나타났다. 나아가 우리 나라에서 분리한 5 개의 분리 균주들의 주요 ECPs 성분이 serine protease인 것으로 조사되었다.
Outbreaks of foodborne diseases associated with Vibrio species such as V. parahaemolyticus, V. vulnificus, and V. cholerae frequently occur in countries having a dietary habit of raw seafood consumption. For rapid identification of different Vibrio species involved in foodborne diseases, whole-cell protein pattern analysis for 13 type strains of 12 Vibrio species was performed using SDS-PAGE analysis. Pathogenic Vibrio species such as V. parahaemolyticus, V. vulnificus, V. cholerae, V. alginolyticus, V. fluvialis, and V. mimicus were included in the 12 Vibrio species used in this study. Each of the 12 Vibrio species showed clearly specific band patterns of its own. Two different strains of V. parahaemolyticus showed two different SDS-PAGE whole-cell protein patterns, giving the possibility of categorizing isolated strains in the same V. parahaemolyticus species into two subgroups. The 36 Vibrio isolates collected from sushi restaurants in Busan were all identified as V. parahaemolyticus by comparing their protein patterns with those of Vibrio type strains. The identified isolates were categorized into two different subgroups of V. parahaemolyticus. The whole-cell protein pattern analysis by SDS-PAGE can be used as a specific, rapid, and simple identification method for Vibrio spp. involved in foodborne diseases at the subspecies level.
본 실험의 목적은 Gram 양성균 뿐만 아니라 Gram음성세균에 대한 넓은 항균활성 및 내산성 그리고 항생제 내성을 갖고 있는 유용한 probiotic 후보균주를 선발하여 어류의 세균성 질병 예방 흑은 치료를 함으로써 양식산업의 효율성을 증대시키고자 한다. 20균주의 유산균을 김치, 양식 넙치의 장 그리고 각종 젓갈류 중에서 분리하여 어류 병원성 세균에 대한 항균능을 MRS agar상에서 agar spotted method에 의해 조사하여 Vibrio anguillarum, Edwardsiella tarda 그리고 streptococcus sp.에 대해 항균활성 이 있는 7균주를 1차 선발 하고 이들중 항균스펙트럼 이 넓은 BK19를 최종선발하여 동정한 결과 Lactobacillus sakei BKl9로 나타났다. L. sakei BK19의 cell free supernatant를 pH 중화 및 catalase 처리한 후 어병세균에 대하여 항균활성을 확인하였다. L. sakei BK19 supernatant의 V.anguillarum 및 V.alginolyticus에 대한 항균성 기작은 주사전자현미경 관찰을 통하여 확인하였고 세포벽을 붕괴 시킴으로써 성장을 저해하고 사멸시키는 것으로 확인되었다.
본 실험의 목적은 Gram 양성균 뿐만 아니라 어병세균인 Gram 음성세균에 대한 넓은 항균활성 및 내산성 그리고 항생제 내성을 갖고 있는 유용한 probiotic 후보균주를 선발하여 어류의 세균성 질병 예방 혹은 치료를 함으로써 양식산업의 효율성을 증대시키고자 한다. 20종의 유산균을 김치, 양식 넙치의 장 그리고 각종 젓갈류 등에서 분리하여 어류병원성 세균에 대한 항균능을 MRS agar상에서 agar spotted method에 의해 조사하여 Vibrio anguillarum, Edwardsiella tarda, 그리고 Streptococcus sp.에 대해 항균활성이 있는 7종의 균주를 1차 선발을 하였다. pH 및 항생제 내성능을 검토하여 probiotic 균주를 분리하였다. 분리된 후보 균중 창란젓에서 분리된 BK19에서 가장 큰 항균 spectrum과 pH 내성 그리고 항생제에 대한 내성이 확인되어 최종적으로 본 실험의 공시균주로 선발하여 생화학적, 형태학적 특성 및 16S rRNA 분석을 통하여 Lactobacillus sakei BK19로 동정하였다.
Park Mi-Yeon;Kim Hyun-Jin;Choi Seung-Tae;Oh Eun-Gyong;Chang Dong-Suck
Fisheries and Aquatic Sciences
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제5권3호
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pp.178-182
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2002
The authors identified 68 Vibrio strains from Gwangan beach seawater from June to October in 2001. We identified them as 19 strains of Vibrio alginolyticus, 15 strains of V. vulnificus, 15 strains of V. parahaemolyticus, 11 strains of V. cholerae non O1, 7 strains of V. fluvialis and just one strain of V. hollisae. They showed their typical biochemical characteristics by API 20E kit (bioMerieux), respectively. It was examined whether their cultural supernatants had enzymatic activities such as hemolysin, protease or urease. The 46 strains showed hemolytic activities and/or protease activities. But we could not find any strain which had urease activity. All isolates of V. cholerae non O1 showed $\beta$ hemolysis. The others showed $\alpha$ hemolysis or did not show clear zones on sheep blood agar plates. These results of Kanagawa phenomenon were not always correspondant with hemolytic activities of cultural supernatants at late log phase. Some strains had higher hemolytic activities despite of showing protease activities on skim milk agar plates and in litmus milk media. On the other hand, some strains showed protease activities but did not show hemolytic activities. Therefore we could guess that there were the relationships between hemolysins and proteases produced by pathogenic vibrios.
From 2013 through 2015, we investigated the contamination status and antimicrobial resistance patterns of pathogenic Vibrio parahaemolyticus in commercially valuable seawater and shellfish (Oyster Crassostrea gigas, short-neck clam Venerupis philippinarum, ark shell Scapharca broughtonii and mussel Mytilus galloprovinciallis) from the southern coast of Korea. The detection rate of V. parahaemolyticus was highest in short-neck clams (23.7%), followed by ark shells (19.2%), oysters (15.9%), mussels (13.6%), and seawater (8.6%). The following percentages of PCR assays of shellfish were positive for the thermostable direct hemolysin-related hemolysin gene (trh) : oysters (12.8%), short-neck clams(11.8%), and ark shells (3.4%). Similar assays for the thermostable direct hemolysin gene (tdh) resulted in positive results for short-neck clams (5.9%) and ark shells (3.4%). Antimicrobial resistance was present in 100% of 8 tdh (+) and 2 trh (+) V. parahaemolyticus isolates challenged with ampicillin. However, all pathogenic V. parahaemolyticus were sensitive to 14 other antibiotics. To ensure the safety of shellfish consumption, the continuous monitoring of the prevalence and distribution of virulence factors of V. parahaemolyticus in shellfish farms is needed.
The antimicrobial resistance patterns to the 10 antimicrobial agents of potential pathogenic vibrios isolated from seawater and a variety of farmed fishes, including oliver flounder (Payalichthys olivaceus), black rock fish (Sebastes schlegeli), red sea bream (Pagyus major) and sea bass (Lateolabyax japonicus), were investigated from May to October, 2004. A total of 314 strains of the genus vibrios were isolated from 126 collected samples, and the number of isolated strains of Vibrio payahaemolyticus and Vibrio alginolyticus were 194 and 120, respectively. Apparently $98.5\%$ of V. parahaemolyticus and $100\%$ of V. alginolyticus isolates demonstrated antimicrobial resistance against at least one antimicrobial agent. The resistance of V. parahaernolyticus isolates to ampicillin ($97.9\%$) was highest, followed by oxolinic acid ($26.8\%$), amikacin ($19.1\%$) and tetracycline and amoxicillin/clavulanic acid ($6.7\%$). V. alginolyticus isolates were resistant to ampicillin ($100\%$), solfamethoxazoleit,imethopenem ($25\%$), amikacln ($21.7\%$), amoxicillin/clavulanic acid ($15.8\%$), ciprofloxacin ($13.3\%$), and tetracycline and doxycycline ($11.7\%$). The rate of multiple antimicrobial resistance to at least four antimicrobials was higher in the V. alginolyticus isolates ($20.8\%$) than in the V. parahaemolyticus ($6.7\%$).
The health of Alaska pollock Theragra chalcogramma seedlings was monitored during February and April 2015. After microscopic examination for parasites, 20 samples sets were made by pooling 50 individuals for each sample set. Then, they were homogenized and examined for viral and bacterial pathogens. No parasites or viruses were detected using either microscopy or PCR. Colonies suspected of belonging to the genus Vibrio were isolated from Tryptic Soya Agar and Thiosulfate Citrate Bile Salts Sucrose Agar plate incubations, and identified as Vibrio anguillarum based on biochemical and physiological examinations and PCR amplification of the 16S rDNA, recA, and pyrH genes. Although there was no mortality during the sampling period, 65.0% (13/20) of the pooled samples were PCR-positive for V. anguillarum. To prevent possible outbreaks, the pathogenic potential of V. anguillarum should be investigated in the future.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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