현장검사는 환자가 있는 즉석에서 검사하여 결과를 알 수 있으며 신속하고 경제적으로 시행할 수 있는 장점이 있어 널리 이용되고 있다. 특히 면역크로마토그래피법을 이용한 검사 항목은 편리하게 쓰이고 있으나 오류가 발생하여 재확인 할 경우, 판독선이 시간이 경과됨에 따라 재확인이 불가능한 단점이 있고 반응이 약한 경우 판독자에 따라 오류가 생길 수 있다. 이에 검사에 쓰이는 다양한 현장검사용 스트립의 판독이 가능하고 화상을 저장할 수 있는 기능을 가진 멀티 스트립 리더기를 개발하였고, 요 임신검사가 의뢰된 검체를 대상으로 개발된 멀티 스트립 리더기를 평가한 결과 100% 일치된 결과를 보였다. 본 연구에서 개발된 멀티 스트립 리더기는 실제 임상에서 편리하고 경제적으로 사용될 수 있을 것으로 생각된다.
본 연구에서는 심혈관계 질환의 표지인자인 콜레스테롤의 농도를 새롭게 개발한 형광 크로마토그라피 방법에 의하여 측정 하고자 시도하였다. 개발된 측정 시스템은 크로마토그라피 스트립이 들어 있는 카트리지, 발색제 AEC, 콜레스테롤 옥사데이즈 (Cholesterol Oxidase, CO), 콜레스테롤 에스트라아제(Cholesterol Esterase, CE), 호스래 디쉬페록시다아제 (Horseradish peroxidase, HRP)를 포함하는 효소혼합 수용액, 그리고 형광 판독기로 구성되어 었다. 콜레스테롤 농도 변화에 따른 형광 세기 변화로 얻은 상관계수 r= 0.968로 측정 가능한 농도 범위에서 신뢰할 만한 직선성 관계를 제시하여 주었다. 회복률과 Hitachi 747 검사기기와 비교 테스트에서는 각각 106.5-94%와 상관관계 r = 0.939 (p<0.001)로 비교적 높은 유의성을 보여주었다. 따라서 본 연구에서 개발된 새로운 콜레스테롤 농도 측정법은 빠른 반응 시간 (8분)과 적은 시료량 ($5\;{\mu}l$)을 사용하기에 시료를 실험실로 운반할 필요없이 클리닉에서 측정 가능한 준현장검사 플랫폼형으로 개발되었으며 기존의 고가의 자동화 장비를 사용하는 생화학적 진단방식 대체용으로의 응용이 기대된다.
본 연구에서는 임신진단등의 간편 현장진단(point of care test, POCT)에 주로 사용되고 있는 멤브레인 측면흐름 분석기법을 사용하여 인유두종 바이러스(Human papillomavirus, HPV)의 특정 서열을 검출할 수 있는 DNA array를 개발하였다. HPV type 6, 11, 16, 18, 31, 45에 특이적인 DNA 탐침들을 측면흐름 분석용 멤브레인 표면에 고정하고, biotin이 label된 MY09/11 primer를 사용하여 얻어진 HPV PCR 반응 결과물과 탐침 사이에 hybridization 반응을 유도하였다. 이후 streptavidin이 label된 colloidal gold가 교잡물의 biotin과 반응함으로써 DNA hybridization 결과를 육안으로 확인할 수 있었다. 본 연구를 통해 개발된 HPV DNA lateral flow membrane array는 기존의 HPV DNA chip 기법과 비교하여 경제적이고 편리하게 주요 HPV type을 확인할 수 있음을 보여주었다.
Tetanus is a specific infectious disease, which is often associated with catastrophic events such as earthquakes, traumas, and war wounds. The obligate anaerobe Clostridium tetani is the pathogen that causes tetanus. Once the infection of tetanus progresses to an advanced stage within the wounds of limbs, the rates of amputation and mortality increase manifold. Therefore, it is necessary to devise a rapid and sensitive point-of-care detection method for C. tetani so as to ensure an early diagnosis and clinical treatment of tetanus. In this study, we developed a detection method for C. tetani using loop-mediated isothermal amplification (LAMP) assay, wherein the C. tetani tetanus toxin gene was used as the target gene. The method was highly specific and sensitive, with a detection limit of 10 colony forming units (CFU)/ml, and allowed quantitative analysis. While detecting C. tetani in clinical samples, it was found that the LAMP results completely agreed with those of the traditional API 20A anaerobic bacteria identification test. As compared with the traditional API test and PCR assay, LAMP detection of C. tetani is simple and rapid, and the results can be identified through naked-eye observation. Therefore, it is an ideal and rapid point-of-care testing method for tetanus.
고빌리루빈혈증은 신생아기에 가장 흔히 볼 수 있는 질환으로 전세계적으로 생후 일주일내 신생아 중 약 80%에서 관찰된다. 고빌리루빈혈증을 치료하지 않을 경우 핵황달 및 사망에 이르게 되므로 신속하고 정확하게 진단하는 것이 매우 중요하다. 본 연구에서는 상용 스마트폰을 사용하여 휴대가 편리하고 전처리 과정없이 사용이 간편한 총빌리루빈 측정시스템을 개발하였다. 본 시스템은 추가의 장치가 필요없이 스마트폰의 LED와 카메라를 이용하여 측정하며 전처리 없이 소량의 혈액을 주입하면 되므로 현장에서 누구나 쉽게 측정이 가능하다. Cobas c111의 측정값과 비교한 결과 3 mg/dL 이하 ±0.4 mg/dL 이내 94%(17/18), 3 mg/dL 이상 ±20% 이내 98%(276/282)로 CLIA 가이드라인의 정확도 기준을 만족함을 확인하였다. 이는 의료 시설 및 훈련된 인력 부족한 현장에서 신속하게 영유아의 황달 상태를 확인하는 방법으로 사용할 수 있을 것으로 보여진다.
AIDS 환자는 전 세계에 4,000만 명인 것으로 추산되며, 주로 개발도상국에서 대부분의 환자가 발생하고 있다. AIDS의 원인 바이러스인 HIV는 혈중의 CD4+ T 세포에 감염되어 수개월 내지 10년 간의 잠복기간을 거치면서 CD4+ T 세포를 점점 파괴하여 환자의 면역기능을 저하시킨다. 이렇게 면역력이 약화된 AIDS 환자는 다양한 병증에 의해 사망에 이르게 된다. 현재의 CD4+ T 세포 수를 계측하는 방법은 통상 유세포분석(flow cytometry) 방법에 의해 시행되고 있다. 유세포분석 방법은 정확도가 높다는 장점이 있으나 숙련된 전문 인력이 필요하고 장비가 고가이기때문에 개발도상국에서는 이용하기 어렵다. 본 연구결과로 마이크로 여과기를 통해 소량인 5 ㎕ 혈액으로부터 백혈구를 포획하고 포획된 세포에서 CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포를 분석하여 AIDS를 검사하는 장비를 개발하였다. 현재의 검사 장비보다 저렴하고 고도의 기술이 필요하지 않으며 휴대가 간편한 획기적인 AIDS 검사 장비임을 시사한다.
본 연구에서는 갈락토오즈의 현장검사(point-of-care testing, POCT)를 위한 일회용 갈락토오즈 바이오센서 개발에 관해 논하고자 한다. Galactose oxidase(GAO)와 horseradish peroxidase(HRP) 두 효소를 0.05 M phosphate 완충용액에 용해시킨 후 스크린 프린팅(screen printing) 방법으로 제작한 전극위에 고정화하여 센서를 제작하였다. 이렇게 제작된 센서를 이용하여 $100{\mu}L$ 이하의 시료를 이용하여 갈락토오즈를 90초 이내에 측정하였다. 전극에서의 반응을 최적화하기 위하여 GAO 효소가 가장 우수한 활성을 나타내는 pH 7.0 완충용액을 이용하여 GAO와 HRP 효소를 1:1로 고정화하고, 1mM 1,1'-ferrocene-dimethanol 전자전달매개체를 도입하여 센서를 제작하였다. 유리 탄소전극의 경우 100 mV (vs Ag/AgCl), 스크린 프린트된 전극의 경우 -100 mV(vs Ag/AgCl)의 인가전압을 적용하였다. 본 연구에 의해 개발된 센서는 $0{\sim}400{\mu}M$의 갈락토오즈 농도에 대하여 우수한 직선성($r^2$ = 0.997, S/N = 3)을 나타내었고 낮은 인가전압을 적용하여 갈락토오즈를 측정하므로, ascorbic acid, uric acid 그리고 acetaminophen과 같은 방해물질의 영향을 최소화 할 수 있었다. 또한 갈락토오즈 표준 용액에 대하여 만족할 만한 재현성을 나타내었다(CV = 5%).
배 경 :결핵의 조기치료와 전염방지를 위해서 신속하고 간편한 결핵진단법의 개발이 요구되고 있는 실정에서 결핵균에 특이한 38-kDa단백을 포함하여 금 콘쥬게이트에 결합된 유전자재조합 항원을 혈청과 반응시켜 항결핵 항체를 발견하도록 고안된 카드형태의 혈청학적 진단기법인 Xeniss Rapid TB kit가 결핵의 진단에 유용하게 이용될 수 있는 지를 알아보고자 하였다.방 법 :188명의 결핵환자(폐결핵 177명, 폐외결핵 11명)와 82명의 접촉자, 그리고 57명의 건강한 성인을 대상으로 하였으며, 연구대상자의 혈청을 이용하여 Xeniss Rapid TB kit의 민감도, 특이도, 양성예측율, 그리고 음성예측율을 조사하였다. 결 과 : 전체적인 민감도는 73.9%, 특이도 81.3%, 양상예측율 84.2%, 그리고 음성예측율은 85.8%였다. 진단시점부터 검사시점간의 시간간격에 따라서는 1개월 이내에서 61.5%로 가장 낮고 점차 증가하여 4-6개월 시점에 94.4%로 가장 높았으며 이후 점차 감소하여 12개월 이상 경과한 시점에서는 67.4%의 양성반응율을 보였다. 페외결핵 환자(90.9%)에서는 폐결핵 환자(72.8%)보다 양성반응율이 높았다. 객담도말양성 (76.2 대 68.4%), 방사선 사진상 중증 (79.3 대 63.3%), 공동성 병소(75.7 대 70.0%), 과거 치료력 (76.3 대 73.3%)이 있는 환자군에서 상대적으로 높은 양성반응율을 보였으며, 당뇨병을 동반한 환자군(69.0 대 74.8%)과 노인환자군(68.l 대 100%)에서는 상대적으로 낮은 양성반응율을 보였다. 건강성인군 7.0%, 환자가족군 17.5%에 비해 병원직원군에서 57.9%의 양성반응율을 보여 활동성 결핵환자와 장기간 지속적으로 접촉한 군에서 높은 양성반응율을 보였다. 결 론 : Xeniss Rapid TB kit는 신속하고 간편하며, 민감도와 특이도가 비교적 높고 특히, 폐외결핵에서는 높은 양성반응율을 보여 폐결핵, 폐외결핵, 그리고 감염자의 진단에 보조적 검사법으로 유용하게 이용될 수 있을 것으로 생각된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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