• 한국양식학회지
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• 제7권1호
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• pp.41-54
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• 1994

E. coli의 \beta-galactosidase$ 유전자를 미꾸라지 수정난에 미세현미 주입하고 이를 분석함으로써 미꾸라지에 외래 유전자 이식을 위한 reporter 유전자로서의 유용성을 검토하였다 X-gal 염객분석, 4-methylumbelliferyl-$\beta$-D-galactoside (MUG) 분석을 수행한 결과 유전자 이식 처리군 및 대조군에서 모두 \beta-galactosidase$의 활성이 관찰되었으며 PCR, dot blot 및 southern blot분석결과 역시 유전자 이식 처리군과 대조군에서 모두 유사한 양상을 나타내었다. 처리군 및 대조군의 PCR product의 염기서열은 E. coli의 \beta-galactosidase$ 유전자와 매우 높은 homology를 갖고 있었으며 pH에 따른 X-gal 염색 분석을 수행한 결과 미꾸라지에 관찰되는 본 효소는 pH 4.5에서 가장 높은 활성을 나타내었다. 따라서 앞으로 미꾸라지를 대상으로 한 외래 유전자 이식시 E. coli의 \beta-galactosidase$ 유전자의 reporter 유전자로서의 사용은 신중한 재검토가 이루어져야만 할 것으로 판단된다.

• 한국동물위생학회지
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• 제28권3호
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• pp.259-265
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• 2005

The melanocortin 1 receptor (MC1R) encoded by the coat color extension gene (E) plays a key role in the signaling pathway of melanin synthesis. The primers for the amplification of bovine MC1R gene were designed based on a bovine MC1R gene sequence (GenBank accession no. Y19103). A size of 483bp (482bp for Hanwoo) was amplified by PCR, digested with Hpa II restriction enzyme and electrophoresed in $1.5\%$ agarose gel. When the amplified DNA product (483 bp) was digested with Hpa II restriction enzyme, Hanwoo meat showed a single band of 482bp, whereas two fragments of 325bp and 158bp were detected in Holstein, Angus and meat of Hanwoo / Holstein cross cow having back coat color phenotype, respectively. The results of this experiment Indicate that new designed primers of bovine MCIR gene may be useful for identification of Hanwoo meat from Holstein, Black Angus and Hanwoo / Holstein cross cow meat.

• 한국식품과학회지
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• 제35권3호
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• pp.470-474
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• 2003

식중독은 세균에 의한 발병이 대부분이다. 따라서 식품에서 식중독 원인균을 신속하게 탐색하게 식중독으로부터의 되면 피해를 줄일 수 있을 것이다. 고전적인 식중독 원인균 탐색은 증균, 선택적 배지를 이용한 isolation, 생화학적 특징을 활용하는 분석이 있으나 많은 시간이 소요되는 단점을 갖고 있었다. 본 연구는 16S rRNA gene(16S rDNA)로부터 얻은 DNA 염기 서열을 이용 식중독 원인균의 특이적 oligonucleotide probe을 제작 reverse dot blot hybridization과 PCR 방법을 이용하여 고전적인 방법보다 빠른 시간 내에 식품에서 원인균을 탐색 할 수 있었다. 우유를 인공적으로 본 연구에서 사용한 균주로 오염시킨 후 DNA를 추출하여 PCR 증폭산물과 oligonucleotide probe를 hybridization 시킨 결과 oligonucleotide probe를 hybridization 시킨 결과 oligonucleotide probe가 위치한 곳에서 발색 반응이 나타났다. 본 연구에서 본 연구를 통해 DNA microchip으로 활용 짧은 시간 내에 많은 종류의 식중독 원인균을 탐색 할 수 있는 가능성을 확인하였다.

• Archives of Pharmacal Research
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• 제29권1호
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• pp.88-95
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• 2006

Analysis of molecular nature of mitochondrial DNA (mtDNA) could be powerful marker for anthropological studies of modern populations. While population genetic studies on mtDNA have been reported for several ethnic groups, no such study has been documented for the Korean population. We surveyed mtDNA polymorphisms in the HVS I of noncoding D-loop region and its upstream region from 430 unrelated healthy Korean population by polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) and direct sequencing analysis. PCR product with 2,790 bp spanning the specific mtDNA region (mt13715-16504) was subjected to RFLP analysis using 6 restriction enzyme (Hinf I, Hae III, Alu I, Dde I, Mbo I, Rsa I). On the PAUP analysis of PCR-RFLP results, 38 mtDNA haplotypes (Hap 1-38) were detected in the Korean populations, which were classified into 11 haplogroups (Grp 1-11) of related haplotypes encompassing all 38 haplotypes. In comparison of sequencing data with Anderson's reference sequence, the transition type was more prevalent than the transversion type. Insertions or deletions were not found. In addition, three of the polymorphic sites (A16240C, A16351G, G16384A) in HVS-I region are determined newly. The polymorphic sites were distributed randomly in the region, though the frequency at each site was variable. Thus, this research might be required for the genealogical study of Orientals.

• 농업과학연구
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• 제28권2호
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• pp.92-98
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• 2001

락토페리신은 다양한 생리활성을 나타내는 락토페린(약 80kD)에서 유래된 항균성펩타이드 분획물(5kD)이다. 마우스HC11유선상피세포에서 인체 락토페리신의 발현은 bovine beta-casein을 promotor로 하고 인체 락토페리신 cDNA를 삽입하여 제작한 pBL1-cin발현벡타를 이용하였다. 이 발현벡타를 이용하여 인체 락토페리신 발현여부를 RT-PCR, northern blot, dot blot분석을 통하여 확인하였다. pBL1-cin 발현백타를 HC11세포에 transfection 하여 얻은 RNA를 이용하여 RT-PCR를 한 결과 150bp의 크기로 확인되었고 Northern blot 분석결과는 약 2.3 kb의 크기로 확인되었다. 인체 락토페린 polyclonal항체를 이용하여 dot blot한 결과 인체 락토페리신이 분비됨을 확인하였다.

• 한국식품위생안전성학회지
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• 제33권2호
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• pp.146-150
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• 2018

고추는 한국에서 매우 중요한 양념 중 하나이다. 하지만 수입 고춧가루와 다진 양념(다대기)에 부과되는 관세율(45%/270%)의 차이로 인해, 다진 양념이 수입된 후, 건조 및 분쇄 과정을 거쳐 고춧가루로 제작되고 있는 실정이다. 본 연구에서는 종 특이 PCR 기술과 whole-genome amplification 방법을 접목하여 고춧가루(N=45) 및 다진 양념(N=5) 제품의 사용원료(고추, 마늘, 양파, 파, 생강)를 분석하였다. 모니터링 결과, 39개 고춧가루 제품은 표시사항을 준수하였으며, 6개 고춧가루 및 5개 다진 양념 제품은 제조 기준을 충족시키지 못했다. 따라서 분석 제품의 22%가 표시사항을 준수하지 못한 것으로 밝혀졌으며, 본 연구에 사용한 분석 방법은 고춧가루 제품에 사용된 원료분석에 적합한 방법임을 입증하였다.

• 한국수정란이식학회:학술대회논문집
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• 한국수정란이식학회 2002년도 국제심포지엄
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• pp.99-99
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• 2002

The hormone resistin is associated with typeII diabetes mellitus in rodent model. Resistin impairs glucose tolerance and insulin action. A new class of anti-diabetic drugs were called thiazolidinediones (TZDs) downregulates a resistin which is induced during adipocyte differentiation. But the connection between increased adiposity and resistin remains unknown. The objectives of this study was to clone a mouse resistin cDNA and to generate transgenic mice overexpressing mouse resistin gene. The 555 bp of mouse resistin was amplified from mob cDNAS by polymerase chain reaction (PCR) and cloned into pCR$\^$(R)/ 2.1 TOPO T-vector. Mouse resistin mRNA on the basis of Genbank sequence (acession no. AF323080). Then, the PCR product was cloned into pTargeT$\^$TM/ mammalian expression vector that has pCMV promoter and chimeric intron. Restriction enzyme analysis with BamH I and Not I was carried out to determine an orientation of the insert in the vector. The pCMV-mus/resistin gene was prepared from previous recombinant pTargeT$\^$TM/-mus/resistin by digestion of Bgl II, and has used for microinjection into pronuclei of one cell embryos. The microinjected embryos were transfered to pseudopregnant foster-mother. Mouse resistin expression was detected in transgenic F1 mice by Reverse Transcriptase- Polymerase Chain Reaction (RT-PCR). Resistin gene expression mouse has heavier body weight which was measured higher level of plasma glucose than that of normal mouse. And in diet-induced experiments, the abdominal fat pads were isolated from each 24h starvation and re-feeding after fasting group mice that were assessed by RT-PCR analysis. In fasting group mice, resistin expression was higher than that of re-feeding group mice. This result suggests that the resistin gene overexpressing mice may be became to obesity and be useful as an animal disease model to be diabetes mellitus caused by insulin resistance of resistin.

• Journal of Applied Biological Chemistry
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• 제52권1호
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• pp.1-7
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• 2009

후대교배종 CM 벼의 정성 PCR 검정방법을 개발하기 위하여, 벼의 내재유전자로써 OsCs-J(rice cytochrome c gene)을 선발하여 OsCytC-5'/3'의 primer쌍을 제작하고, 벼를 포함한 서로 다른 8개 작물에 대하여 PCR을 수행한 결과 벼에 특이적으로 증폭되는 111 bp의 반응 산물을 확인하였다. 국내 개발된 LS28$\times$CryIAc1 GM 벼의 검정 분석으로 정성 PCR 반응을 수행하였다. 정성 PCR을 위하여 GM 벼에 도입된 T-DNA 및 게놈상의 도입유전자 삽입부위의 인접서열을 바탕으로 구조 및 계통 특이적인 검정 primer 쌍을 제작하였다. ActCk-5'/3' primer 쌍을 이용하여 LS28의 T-DNA 내의 actin 프로모터와 OsCK1 유전자 사이를 증폭시켜 306 bp의 PCR 반응 산물을 얻을 수 있었으며, 또한 계통특이 primer 쌍인 CryIAc1 GM 벼유래의 CrLB-5'/3' 및 LS28 GM 벼 유래의 CKRB-5'/3'를 이용한 PCR 반응으로 각각 142 bp와 91 bp의 도입유전자의 인접서열 부위의 특이적인 증폭 산물을 확인할 수 있었다. 계통 특이적 검정을 위한 이들 개발 primer 쌍들은 event 계통과 대조적으로 non-GM 벼와 다양한 작물에 대하여 어떠한 특이적인 PCR 증폭 산물을 형성하지 않았다. 따라서 본 연구에서 계통특이 primer를 이용하여 후대교배종 GM 벼 계통, L528$\times$CryIAc1을 특이적으로 검출할 수 있음을 확인하였고, 제시된 방법이 GM 벼의 실용화를 위한 위해성평가의 검정방법 자료로 제공될 수 있음을 확인하였다.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제34권3호
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• pp.191-196
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• 1996

중합반응(W_R)은 극미량의 핵산을 찾아내어 소수의 감염병원체를 확인하는 매우 민감한 진단법이다. 폐포자충 같이 다수의 숙주세포에 소수의 병원제가 섞여 있는 가검물에서 핵산의 정제 여부에 따른 중합반응의 민감도를 관찰하고. 특이도가 높은 시발제(primer)를 개발하기 위하여 이 연구를 수행하였다 흰쥐를 실험적으로 감염시키고 폐 폐포세척액. 혈청을 화보하여 현미경적 검사와 중합반응을 실시하였다 또한 사람과 횐쥐의 핵산을 위시하여 여러 미생물과 기생충. 이스트 의 핵산을 절제하여 이 시발체의 특이도를 검증하였다. 그 결과 여러 시발체 중에서 rRNA의 염기 서열 중에서 선택한 #24 주서열과 #27 대서열 쌍이 가장 우수한 민감도와 특이도를 보였다. 형태학적으로 양성인 폐포세척액의 세포용해액으로 반응시킨 경우 민감도가 57.7%이며 핵산을 정제한 경우 84.6%로 증가하였다 병원체 음성인 경우와 다른 병원체와 숙주의 핵산과는 반응하지 않았다. 혈청을 이용한 경우 20개 양성 표본 중 2개가 양성이고 6개의 감염된 흰쥐의 혈액은 모두 음성이었다. 충합반응을 폐포자충증의 진단에 활용하기 위하여는 폐포세척액 보다는 가래나 기관지 분비물. 혈청이나 혈액같은 비침습적인 가검물을 이용하고 핵산시료를 준비하는 과정이 간편하고 재현성이 있도록 개발되어야 할 것이다.

• Journal of Plant Biotechnology
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• 제44권1호
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• pp.97-106
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• 2017

일반적으로 유전자를 재조합하는 생명공학기술이 널리 이용되고 있는 것은 유전자변형 작물 분야이다. LM 제품에 대한 의존도가 높아짐에 따라 한국에서는 LMO의 안전성에 대한 우려가 지속적으로 증가하고 있다. 따라서, 우리는 자연환경 내 비의도적으로 방출된 LMO를 판별할 수 있는 검출기법을 확립하였다. JRC 정보를 토대로 6개 LM 이벤트(캐놀라 1, 옥수수 1, 콩 4개)의 유전자를 검출할 수 있는 PCR 조건을 확립하였다. 각 LM 시료에서 genomic DNA를 분리하였고, 이벤트 특이적인 프라이머를 사용하여 PCR 실험을 수행하였다. 또한 자체적으로 확립된 검출법에 의해 모든 LMO의 이벤트 특이적 유전자가 검출되었다. LM 유전자의 삽입 위치를 분석하기 위해 PCR 생성물을 이용하여 염기서열을 분석하였다. 이 결과는 LM 이벤트의 특이적인 유전자를 효율적으로 검출할 수 있음을 나타낸다. 게다가 본 연구결과 확립된 검출기법은 자연환경 내 LM 작물의 모니터링 및 사후 관리에 활용될 것이다.